復榮通脈膠囊對糖尿病大鼠腎臟PDGF-BB和MMP-9表達影響的實驗研究.pdf

1、復榮通脈膠囊（批準文號:冀藥制字Z20070041）是河北省滄州中西醫(yī)結合醫(yī)院院內(nèi)的益氣養(yǎng)陰、活血通絡類中藥復方制劑，臨床用于治療氣陰兩虛、瘀血阻絡型糖尿病周圍血管病變及周圍神經(jīng)病變。在臨床應用過程依據(jù)其藥物組成及治療原則，曾試用于糖尿病腎病，效果顯著。本課題從實驗方面研究復榮通脈膠囊對糖尿病大鼠腎臟血小板源性生長因子BB(PDGF-BB)和基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)表達影響，探討其治療糖尿病腎病的作用機理，為臨床應用提供理論依據(jù)，

2、進而從抑制PDGF-BB和調(diào)節(jié)MMP-9表達方面了解益氣養(yǎng)陰活血通絡類中藥治療糖尿病腎病的作用。
　　目的:
　　復制糖尿病大鼠模型，觀察復榮通脈膠囊對糖尿病大鼠腎臟PDGF-BB和MMP-9表達的影響，探討復榮通脈膠囊治療糖尿病腎病的機理，為臨床上中醫(yī)藥治療糖尿病腎病提供可靠的試驗依據(jù)。
　　方法:
　　Wistar大鼠（成年健康雄性，n=60），隨機分為正常對照組大鼠（NC組，n=10）和造模組大鼠50只。造

3、模組大鼠禁食12小時后，腹腔一次性注射鏈脲佐菌素(STZ)60mg/kg（STZ臨用前用0.1M檸檬酸鈉緩沖液配成濃度為1％、pH=4.2的溶液）建立糖尿病大鼠模型，NC腹腔注射等量的檸檬酸鈉緩沖液。72小時后取尾靜脈血測末梢血糖，血糖值＞16.7mmol/L即確定為糖尿病大鼠。造模成功后大鼠隨機抽取40只，分為糖尿病模型組(DM，n=10)、復榮通脈膠囊低劑量治療組(FRL，n=10)、復榮通脈膠囊中劑量治療組（FRM，n=10）、復

4、榮通脈膠囊高劑量治療組(FRH， n=10)。成模后一周，按人體-大鼠體表面積比值表換算出大鼠的等效劑量，為復榮通脈中劑量組給予1.4g/(kg·d)灌胃、復榮通脈低劑量組給予0.7g/(kg·d)灌胃、復榮通脈高劑量組給予2.8g/(kg·d)灌胃，其余兩組每日給予同等劑量生理鹽水灌胃，每日灌胃1次，連續(xù)8周。實驗期間大鼠喂標準飼料，自由進食水。灌胃治療8周后禁食12h，尾靜脈取血測血糖，以3％戊巴比妥鈉80mg/kg腹腔注射麻醉大鼠

5、，腹部正中切口，腹主動脈采血，收集血標本。取血后摘取大鼠的腎臟，去除腎包膜及腎門結締組織并用生理鹽水沖洗后稱重，將腎臟切割成小于0.5cm×0.5cm×0.1 cm的組織塊，置于4％中性福爾馬林溶液中固定，HE染色在光鏡下觀察腎小球及腎小管間質(zhì)的形態(tài)學變化，SP法免疫組化觀察病理切片組織中陽性染色面積及強度。所有數(shù)據(jù)用SPSS16.0軟件統(tǒng)計處理，檢驗水準α=0.05。計量資料數(shù)據(jù)以(X)±SD表示，組內(nèi)治療前后比較采用配對t檢驗，各組

6、間比較采用單因素方差分析，方差不齊時應用多個獨立樣本比較的Kruskal-WallisH檢驗。
　　結果:
　　1、對大鼠一般狀態(tài)的影響
　　正常組大鼠精神狀態(tài)良好，眼睛有神，反應敏捷，毛發(fā)明亮有光澤，體型健壯，飲食水量增加，尿量及大便性狀正常。糖尿病組和復榮通脈膠囊低、中、高劑量組大鼠精神萎靡，反應遲鈍，毛色晦暗無光澤，抱團少動，體形瘦小，飲水量明顯增多，尿量增多。
　　2、對體重的影響
　　造模前和治療

7、前各組大鼠的體重相比無差異(P＞0.05);經(jīng)灌胃治療8周后，與NC組相比，DM組及FRL、FRM、FRH組體重明顯降低（P＜0.05），DM組及FRL、FRM、FRH組間體重比較無差異(P＞0.05);NC組大鼠8周后體重比8周前明顯增加(P＜0.05)，DM組及FRL、FRM、FRH組間大鼠治療后體重比治療前明顯降低(P＜0.05)。
　　3、對右腎重/體重比的影響
　　經(jīng)灌胃治療8周后，與NC組比較，DM組及FRL組、

8、FRM組、FRH組腎重/體重比明顯升高(P＜0.05);與DM組比較，F(xiàn)RL組腎重/體重比無明顯差異（P＞0.05），F(xiàn)RM組、FRH組腎重/體重比明顯降低（P＜0.05）;與FRL組比較，F(xiàn)RM組、FRH組腎重/體重明顯降低（P＜0.05）;FRM組和FRH組比較腎重/體重比無明顯差別(P＞0.05)。
　　4、對生化指標的影響
　　4.1 對血糖的影響
　　造模前各組大鼠的血糖相比無差異(P＞0.05);治療前，與

9、NC組相比，DM組及FRL、FRM、FRH組大鼠血糖均顯著升高(P＜0.05)，而DM組及FRL、FRM、FRH組間血糖比較無差異(P＞0.05)。經(jīng)灌胃治療8周后，與NC組相比，DM組及FRL、FRM、FRH組大鼠血糖，均顯著升高(P＜0.05)，而DM組及FRL、FRM、FRH組大鼠血糖比較無差異（P＞0.05）;各組大鼠血糖與治療前相比無明顯差異（P＞0.05）。
　　4.2 對血脂的影響
　　灌胃治療8周后，與NC組

10、相比，DM組及FRL、FRM、FRH組TG、TC水平明顯升高(P＜0.05);DM組、FRL組、FRM組及FRH組組間比較TG、TC水平無明顯差異(P＞0.05)。
　　4.3 對腎功能的影響
　　灌胃治療8周后，與NC組相比，DM組及FRL、FRM、FRH組Scr、BUN水平明顯升高(P＜0.05);與DM組比較，F(xiàn)RL組Scr、BUN水平無明顯差異（P＞0.05），F(xiàn)RM、FRH組Scr、BUN水平下降明顯(P＜0.05

11、);與FRL組比較，F(xiàn)RM、FRH組Scr、BUN水平明顯降低（P＜0.05）; FRM、FRH組間比較，Scr、BUN水平無明顯差異（P＞0.05）。
　　4.4 對CRP的影響
　　灌胃治療8周后，與NC組相比，DM組及FRL、FRM、FRH組CRP水平明顯升高(P＜0.05);與DM組比較，F(xiàn)RL組CRP水平無明顯差異（P＞0.05），F(xiàn)RM、FRH組CRP水平明顯降低（P＜0.05）;與FRL組比較， FRM、FRH

12、組CRP水平明顯降低（P＜0.05）。FRM、FRH組間比較，CRP水平無明顯差異(P＞0.05)。
　　5、對腎臟組織形態(tài)學的影響
　　光鏡下顯示，正常組大鼠腎臟腎小球、腎小管結構正常，腎間質(zhì)無炎性細胞浸潤，血管無擴張充血;糖尿病模型組腎臟結構發(fā)生改變，如腎小球內(nèi)皮細胞腫脹、系膜細胞增多，腎小管上皮腫脹，腎間質(zhì)有炎細胞浸潤，血管擴張充血。復榮通脈膠囊低劑量組腎小球系膜細胞及基質(zhì)輕度彌漫性增生，局灶節(jié)段性加重，內(nèi)皮細胞增生、

13、腫脹，基底膜空泡變性;腎小管上皮空泡及顆粒變性，灶狀萎縮，腎間質(zhì)灶狀淋巴單核細胞浸潤，灶狀纖維化，小動脈管壁輕度增厚，與模型組比較無明顯變化;復榮通脈膠囊中、高劑量組腎小球系膜細胞及基質(zhì)輕度節(jié)段性增生，上皮細胞未見著變;腎小管上皮空泡及顆粒變性，未見萎縮，腎間質(zhì)小灶淋巴單核細胞浸潤，未見纖維化，小動脈管壁未見增厚，但中、高劑量組間比較無明顯差異。
　　6、對大鼠腎臟PDGF-BB和MMP-9的影響
　　6.1 PDGF-BB

14、在正常大鼠腎臟有少量表達，與NC組比較，DM組及FRL、FRM、FRH組PDGF-BB表達明顯升高(P＜0.05);與DM組比較，F(xiàn)RL組PDGF-BB表達無明顯差異（P＞0.05），F(xiàn)RM、FRH組PDGF-BB表達明顯降低（P＜0.05）;與FRL組比較，F(xiàn)RM、FRH組PDGF-BB表達明顯降低(P＜0.05);FRM、FRH組比較PDGF-BB表達無明顯差異(P＞0.05)。
　　6.2 MMP-9在正常大鼠腎臟正常表達，

15、與NC組比較，DM組及FRL、FRM、FRH組MMP-9表達明顯降低(P＜0.05);與DM組比較，F(xiàn)RL組MMP-9表達無明顯差異(P＞0.05)，F(xiàn)RM、FRH組MMP-9表達明顯升高(P＜0.05);與FRL組比較，F(xiàn)RM、FRH組MMP-9表達明顯升高(P＜0.05);FRM、FRH組間比較，MMP-9表達無明顯差異（P＞0.05）。
　　結論:
　　1、復榮通脈膠囊對糖脂代謝無影響。
　　2、本實驗復制的糖尿

16、病大鼠模型8周后腎重/體重比、Scr、BUN明顯升高，腎損害存在明確，且血清CRP明顯升高，PDGF-BB表達升高，腎臟MMP-9表達降低。經(jīng)復榮通脈膠囊治療8周后腎重/體重比下降，Scr、BUN明顯下降，腎損害減輕，表明復榮通脈膠囊具有減輕糖尿病大鼠腎臟的肥大、降低尿素氮和肌酐的作用，還能抑制血清CRP的升高，能抑制PDGF-BB表達的升高，能抑制腎臟MMP-9表達的下降，通過以上機制延緩糖尿病大鼠的腎臟損害。
　　3、本實驗表