甘草次酸修飾的PEI-PLGA的合成及其作為納米粒載體的研究.pdf

1、聚合物納米粒是由高分子物質(zhì)構(gòu)成的固態(tài)膠體粒子，具有穩(wěn)定的形態(tài)結(jié)構(gòu)、表面效應(yīng)、小尺寸效應(yīng)及量子隧道效應(yīng),有些聚合物納米粒還具有溫度、pH、電場(chǎng)和磁場(chǎng)效應(yīng)等特定功能。所以，近些年來(lái)得到廣泛關(guān)注。通常腫瘤化療藥物都存在靶向性差、毒副作用大等缺點(diǎn)。一些化療藥物還由于溶解度小而影響其應(yīng)用。將難溶性的化療藥物載入納米粒中，不僅可增加藥物的溶解度，而且可使藥物靶向病變部位，減少對(duì)正常組織和細(xì)胞的毒副作用等，具有廣泛的應(yīng)用前景。
　　本文選擇具有

2、優(yōu)良生物相容性和生物降解性的PLGA為疏水鏈，PEI為親水鏈，通過(guò)形成酰胺鍵，合成兩親性共聚物PEI-PLGA（PP），再用具有優(yōu)良肝靶向性的甘草次酸對(duì)其進(jìn)行修飾，制得具有肝靶向性的共聚物GA-PEI-PLGA（GPP）?？疾霨A、PEI、PLGA摩爾比對(duì)GPP形成納米粒的影響，篩選優(yōu)化確定三者的最佳摩爾比為1:1:1。并應(yīng)用FT-IR、13C-NMR、1H-NMR對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行結(jié)構(gòu)表征，確證成功合成GPP共聚物。以芘為探針，采用穩(wěn)態(tài)熒光探

3、針?lè)y(cè)定GPP共聚物的臨界膠束濃度（CMC）為21.72?g/mL。所形成的GPP納米粒大小均勻，平均粒徑為164.6 nm，zeta電位為45 mV。通過(guò)溶血試驗(yàn)對(duì)GPP納米粒的血液相容性進(jìn)行考察，以評(píng)價(jià)其安全性。結(jié)果表明，GPP納米粒的血液相容性優(yōu)于PP納米粒，PP納米粒的血液相容性優(yōu)于PEI。
　　選擇姜黃素（ Cur）為模型藥物，采用薄膜水化法制備姜黃素/GA-PEI-PLGA（Cur/GPP）納米粒，應(yīng)用單因素實(shí)驗(yàn)及正交

4、設(shè)計(jì)試驗(yàn)，考察水化溫度、水化時(shí)間、投藥量對(duì)納米粒的包封率及載藥量的影響，篩選最佳制備工藝。結(jié)果表明，水化溫度對(duì)納米粒的包封率和載藥量的影響最大，其次是投藥量，再次是水化時(shí)間。確定最佳制備工藝條件為：水化溫度60℃、水化時(shí)間4 h、投藥量7 mg。按此最佳制備工藝制得的包封率為85.4％，載藥量為16.1%。透射電子顯微鏡觀察可見(jiàn)Cur/GPP納米粒呈球形，大小均一，分布均勻；激光粒度分析儀測(cè)得Cur/GPP納米粒的平均粒徑為330.3

5、nm，zeta電位為39.2 mV。采用動(dòng)態(tài)透析法考察Cur/GPP納米粒的體外釋藥性能。結(jié)果表明，游離Cur快速釋放，3 h的累積釋放率已達(dá)到95.0%。Cur/GPP納米粒在0～2 h有一定的突釋現(xiàn)象，2～14 h的釋放速率較快,14～86 h的釋放較平緩。Cur/GPP納米粒在2 h的累積釋放率為35.4%，14 h的累積釋放率為70.4%，86 h的累積釋放率為87.0%，具有緩釋特性。
　　采用 MTT實(shí)驗(yàn)考察 GPP納

6、米粒的細(xì)胞毒性，Cur/GPP納米粒的對(duì)HepG2和BEL-7402細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用，并與姜黃素/PEI-PLGA（Cur/PP）納米粒、游離Cur進(jìn)行比較。結(jié)果表明，GPP納米粒、PP納米粒對(duì)HepG2和BEL-7402細(xì)胞兩種的生長(zhǎng)均有抑制作用，隨著納米粒濃度升高、納米粒與細(xì)胞共孵育的時(shí)間增大，其抑制作用增大，細(xì)胞毒性增大；GPP納米粒對(duì)HepG2和BEL-7402細(xì)胞兩種的生長(zhǎng)抑制作用均小于PP納米粒，說(shuō)明GPP納米粒的細(xì)胞毒性

7、小于PP納米粒。共同孵育24、72 h后，GPP納米粒對(duì)HepG2細(xì)胞和BEL-7402細(xì)胞的抑制率總體上大于Cur/PP納米粒，兩者均大于游離Cur；共同孵育48 h后，濃度較低時(shí)Cur/PP納米粒的抑制作用大于Cur/GPP納米粒，濃度較高時(shí) Cur/GPP納米粒的抑制作用大于Cur/PP納米粒，且二者的抑制作用總體大于游離Cur。采用細(xì)胞攝取試驗(yàn)評(píng)價(jià)Cur/GPP納米粒的體外靶向性，以激光共聚焦顯微鏡觀察HepG2對(duì)Cur/GPP