功能多肽修飾的明膠-硅氧烷納米粒子在細胞內(nèi)轉(zhuǎn)運途徑及其作為基因載體的研究.pdf

1、基因治療能夠從基因組水平治愈人類疾病。非病毒載體相對病毒載體具有較好的生物相容性，但其基因遞送和轉(zhuǎn)染效率都較低。本課題組合成的明膠.硅氧烷納米粒子是一種新穎的有機.無機納米雜化材料，具有較好的DNA包封和釋放性能。但是有關(guān)基于明膠.硅氧烷的納米粒子作為非病毒基因載體的潛能還缺乏深入系統(tǒng)的研究。本文針對基因治療中的主要屏障，就基于明膠.硅氧烷的納米粒子作為理想非病毒載體的可行性，開展了一系列的研究，主要包括： (1)通過MTT實驗

2、對明膠-硅氧烷納米粒子(GS NPs)和Tat修飾的明膠-硅氧烷納米粒子(TG NPs)的細胞生物相容性進行了評價；通過激光共聚焦顯微鏡和流式細胞儀證實GS NPs和TG NPs均能有效進入Hela細胞；同時，結(jié)合胞吞途徑特異抑制劑和示蹤物確定了GS NPs和TG NPs跨膜進入細胞的機制。 (2)通過激光共聚焦顯微鏡和透射電子顯微鏡對明膠.硅氧烷納米粒子(GSNPs)進入細胞后的轉(zhuǎn)運途徑進行了探討。同時，結(jié)合細胞器熒光標記技術(shù)

3、，對氯喹、Tat、Kala多肽促進GS NPs逃逸溶酶體的性能進行了研究，結(jié)果表明氯喹、Tat、Kala多肽均能促進GS NPs逃逸溶酶體，但氯喹長時間(>24 h)與細胞作用具有明顯的細胞毒性，Kala多肽促溶酶體逃逸的性能不穩(wěn)定；此外，研究發(fā)現(xiàn)Tat修飾的GS NPs能夠進入細胞核，pALDH Leader多肽修飾的GS NPs能夠靶向到線粒體。 (3)通過流式細胞儀，結(jié)合DNA熒光標記技術(shù)，比較了TG NPs和脂質(zhì)體載運D