慢性應(yīng)激大鼠抑郁癥模型獎(jiǎng)賞系統(tǒng)多巴胺受體功能及中西抗抑郁藥作用的研究.pdf

1、抑郁癥(major depressive disorder，MDD)是臨床上很常見的一種精神心理疾病，以持續(xù)性的情緒低落為主要特征，快感缺乏、動(dòng)力低下是其主要核心癥狀，病程遷延，容易復(fù)發(fā)，自殺率高，嚴(yán)重地威脅著人們的生活質(zhì)量和生命健康。抑郁癥的發(fā)病機(jī)制非常復(fù)雜，到目前為止仍然不十分清楚，需要進(jìn)一步深入的研究和探索。本實(shí)驗(yàn)采用慢性不可預(yù)見性輕度應(yīng)激大鼠抑郁模型，來了解獎(jiǎng)賞系統(tǒng)相關(guān)腦區(qū)在應(yīng)激前后及用藥不同階段的神經(jīng)生化改變，以期能為臨床治療

2、提供新的認(rèn)識(shí)和方法。
　　第一部分、抑郁癥獎(jiǎng)賞系統(tǒng)多巴胺D2、D3受體功能障礙的研究
　　實(shí)驗(yàn)一：慢性不可預(yù)見性輕度應(yīng)激抑郁癥模型的建立
　　目的:大鼠抑郁模型是抑郁癥研究中最為關(guān)鍵的研究媒介，穩(wěn)定可靠的動(dòng)物模型是研究工作成果是否可靠的重要基礎(chǔ)條件。本實(shí)驗(yàn)采用慢性不可預(yù)見性輕度應(yīng)激(chronic unpredictable mild stress，CUMS)結(jié)合孤養(yǎng)的方法，以期獲得穩(wěn)定、可靠、重復(fù)性強(qiáng)的大鼠抑郁模型，

3、為進(jìn)一步的研究打下良好的基礎(chǔ)。
　　方法:選用成年雄性Sprague-Dawley大鼠，共16只，隨機(jī)分為正常組和模型組各8只，采用慢性不可預(yù)見性輕度應(yīng)激結(jié)合孤養(yǎng)的方法，制作大鼠抑郁模型，進(jìn)行21天應(yīng)激干預(yù)，分別于應(yīng)激干預(yù)前后進(jìn)行強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)(The forced swimming test，F(xiàn)ST)和液體消耗實(shí)驗(yàn)(Fluid consumption test)測(cè)量，并定期監(jiān)測(cè)大鼠體重變化，用以上三項(xiàng)指標(biāo)來評(píng)估大鼠快感缺乏和行為絕

4、望的程度。模型制作結(jié)束后，應(yīng)用高效液相色譜質(zhì)譜連用方法(HPLC-MS)分析大鼠前額葉、海馬、伏隔核各腦區(qū)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物多巴胺(DA)、3，4-二羥基苯乙酸(DOPAC)、高香草酸(HVA)、5-羥色胺（5-HT）、5-羥吲哚乙酸(5-HIAA)在應(yīng)激前后含量的變化，進(jìn)一步評(píng)估大鼠抑郁模型的有效性。
　　結(jié)果:
　　1.行為學(xué)結(jié)果顯示，相對(duì)于正常組大鼠，模型組大鼠在接受應(yīng)激干預(yù)后液體消耗實(shí)驗(yàn)的糖水偏愛指數(shù)下降顯著

5、;強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)靜止不動(dòng)時(shí)間明顯延長(zhǎng);體重增長(zhǎng)值顯著下降。各項(xiàng)結(jié)果均差異顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2.HPLC-MS檢測(cè)結(jié)果顯示，模型組在應(yīng)激后大鼠前額葉、海馬、伏隔核各腦區(qū)DA、DOPAC、HVA、5-HT、5-HIAA含量均比正常組有明顯減少，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:慢性不可預(yù)見性輕度應(yīng)激結(jié)合孤養(yǎng)制做的大鼠抑郁模型，能夠很好的模擬人類抑郁癥的核心癥狀，模型大鼠快感缺乏，行為絕望，體重下降三項(xiàng)指標(biāo)均改變明顯，且腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)

6、變化符合目前抑郁癥的神經(jīng)生化改變。模型癥狀穩(wěn)定，可重復(fù)性強(qiáng)，持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，是非常可靠的動(dòng)物抑郁模型，可以作為良好的媒介進(jìn)性下一步的實(shí)驗(yàn)。
　　實(shí)驗(yàn)二：5-羥色胺再攝取抑制劑對(duì)抑郁癥模型大鼠獎(jiǎng)賞系統(tǒng)的影響
　　目的:抑郁癥核心癥狀快感缺乏是獎(jiǎng)賞系統(tǒng)功能障礙的直接體現(xiàn)。通過大鼠抑郁模型進(jìn)一步了解獎(jiǎng)賞系統(tǒng)重要腦區(qū)多巴胺D2受體、多巴胺D3受體的在應(yīng)激干預(yù)前后含量變化，明確獎(jiǎng)賞系統(tǒng)功能障礙的確切依據(jù)，并通過對(duì)比大鼠應(yīng)用5-羥色胺再攝取

7、抑制劑西酞普蘭用藥前后不同階段神經(jīng)遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物、D2DR、D3DR的變化，來探討5-羥色胺再攝取抑制劑對(duì)獎(jiǎng)賞系統(tǒng)的可能影響。
　　方法:將依照實(shí)驗(yàn)一部分制作的抑郁模型大鼠隨機(jī)分組，分別為鹽水對(duì)照早期組、鹽水對(duì)照晚期組、西酞普蘭早期組、西酞普蘭晚期組各6只。分別給予鹽水及西酞普蘭用藥干預(yù)，另外有隨機(jī)分組的對(duì)照組及模型組大鼠各6只，分別正常飼養(yǎng)及僅按照前述模型制作方法制作成模型大鼠。分別于應(yīng)激干預(yù)前、后及用藥1天后及用藥14天后對(duì)

8、各組大鼠進(jìn)行行為學(xué)檢測(cè)，包括強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)、液體消耗實(shí)驗(yàn)及體重監(jiān)測(cè)。然后通過HPLC-MS方法檢測(cè)大鼠單胺類神經(jīng)遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物在應(yīng)激前后、用藥前后及用藥不同階段的變化，通過蛋白質(zhì)免疫印跡(Western-Blotting，WB)方法檢測(cè)D2DR、D3DR的含量改變，來進(jìn)一步了解西酞普蘭用藥不同時(shí)期對(duì)獎(jiǎng)賞系統(tǒng)的影響。
　　結(jié)果:
　　1.西酞普蘭晚期用藥組出現(xiàn)了明顯的行為學(xué)改善，糖水偏愛指數(shù)升高、強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間縮短及體重增長(zhǎng)

9、值增加，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，用藥早期無明顯改變。
　　2.西酞普蘭組早期組用藥1天后伏隔核DA、海馬DOPAC及海馬5-HT就有明顯增加，其余各組早期未見明顯有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的差別;晚期組用藥14天后西酞普蘭組各腦區(qū)DA、DOPAC、HVA、5-HT、5-HIAA均較鹽水對(duì)照組有明顯增加，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.模型組大鼠在應(yīng)激后與對(duì)照組大鼠比較，在前額葉、海馬、伏隔核各腦區(qū)D2DR及D3DR的表達(dá)均明顯下降，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在前額葉、

10、海馬、伏隔核西酞普蘭早期組D2DR的表達(dá)較模型鹽水組有顯著增加，西酞普蘭晚期組D2DR的表達(dá)均比模型鹽水組有明顯增加，三個(gè)腦區(qū)內(nèi)西酞普蘭晚期組D2DR的表達(dá)仍較空白對(duì)照組明顯減少;在三個(gè)腦區(qū)內(nèi)西酞普蘭早期組及西酞普蘭晚期組D3DR表達(dá)均較模型鹽水組有明顯增加，用藥14天后西酞普蘭晚期組比西酞普蘭早期組D3DR表達(dá)又均有明顯減少;三個(gè)腦區(qū)內(nèi)D3DR表達(dá)西酞普蘭早期及晚期組均比空白對(duì)照組均有明顯減少，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:

11、　　1.大鼠抑郁模型存在獎(jiǎng)賞系統(tǒng)功能障礙，主要表現(xiàn)在獎(jiǎng)賞系統(tǒng)重要腦區(qū)多巴胺及其代謝產(chǎn)物及D2DR、D3DR的表達(dá)的下降。
　　2.D3DR的表達(dá)在用藥的早期出現(xiàn)一過性升高后，繼之又下降，到晚期組下降顯著，提示西酞普蘭對(duì)D3DR受體功能存在一定程度的抑制，表現(xiàn)在長(zhǎng)期用藥后D3DR的表達(dá)減少，D2DR的表達(dá)雖然有所上升，但與正常組比較仍有較大差距，提示獎(jiǎng)賞系統(tǒng)功能并未得到有效恢復(fù)。
　　第二部分、柴胡加龍骨牡蠣湯抗抑郁作用的研究

12、
　　目的:中醫(yī)中藥是中華民族的瑰寶，但因作用機(jī)制復(fù)雜不清而難以被廣泛認(rèn)可和接受，通過慢性應(yīng)激大鼠抑郁模型了解柴胡加龍骨牡蠣湯的抗抑郁作用，并通過與西酞普蘭對(duì)比探索其抗抑郁的作用機(jī)制。
　　方法:制作完成的大鼠抑郁模型，隨機(jī)分組為鹽水對(duì)照早期組、鹽水對(duì)照晚期組、西酞普蘭早期組、西酞普蘭晚期、中藥方劑早期組、中藥方劑晚期組各6只，分別于用藥1天后及用藥14天后進(jìn)行強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)、液體消耗實(shí)驗(yàn)及體重變化的行為學(xué)檢測(cè)。然后通過HPL

13、C-MS方法檢測(cè)大鼠腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物的變化，通過蛋白質(zhì)免疫印跡(Western-Blotting，WB)方法檢測(cè)D2DR、D3DR的含量改變，通過與西酞普蘭比較，進(jìn)一步了解柴胡加龍骨牡蠣湯的抗抑郁作用，以及對(duì)獎(jiǎng)賞系統(tǒng)的影響。
　　結(jié)果:
　　1.行為學(xué)結(jié)果的對(duì)比發(fā)現(xiàn)，柴胡加龍骨牡蠣湯與西酞普蘭在改善抑郁癥狀的糖水偏愛指數(shù)及對(duì)體重的影響方面作用效果相當(dāng)，但柴胡加龍骨牡蠣湯比西酞普蘭能更為顯著的縮短強(qiáng)迫游泳的不動(dòng)時(shí)

14、間，差異顯著。
　　2.柴胡加龍骨牡蠣湯組單胺類神經(jīng)遞質(zhì)DA、DOPAC、HVA、5-HT、5-HIAA在用藥早期就開始出現(xiàn)，到用藥晚期各腦區(qū)均增加顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但較西酞普蘭組增加幅度相對(duì)較小，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.柴胡加龍骨牡蠣湯對(duì)D2DR、D3DR的影響趨勢(shì)與西酞普蘭相同，但幅度相對(duì)西酞普蘭較小，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:
　　1.從行為學(xué)檢測(cè)結(jié)果來看，柴胡加龍骨牡蠣湯對(duì)抑郁模型大鼠的抑郁癥狀行為學(xué)表