RNA干擾介導(dǎo)的FOXO3a基因下調(diào)延緩大鼠失神經(jīng)骨骼肌萎縮.pdf

1、目的：
　　探討慢病毒轉(zhuǎn)染RNAi技術(shù)介導(dǎo)的FOXO3a基因下調(diào)延緩大鼠失神經(jīng)骨骼肌萎縮的療效。
　　方法：
　　將40只SD大鼠，隨機(jī)分為兩組，分別為對照組(20只)和實(shí)驗(yàn)組（20只）。切斷兩組大鼠右側(cè)坐骨神經(jīng)，建立右下趾長伸肌失神經(jīng)肌萎縮模型。建立模型后于實(shí)驗(yàn)組大鼠失神經(jīng)趾長伸肌注射50μL重組慢病毒載體Lenti．GFP-FOXO3a；對照組注射Lenti．GFP溶液50μL，注射后1、3周，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)兩組大鼠分

2、別取3只，完整切除右側(cè)趾長伸肌，于熒光顯微鏡下觀察綠色熒光信號，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)兩組大鼠分別取6只，完整切除右側(cè)趾長伸肌，觀察肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)，檢測肌肉總蛋白含量，測肌肉濕重維持率，RT-PCR檢測FOXO3a基因，檢測肌細(xì)胞橫截面積。
　　結(jié)果：
　　轉(zhuǎn)染后1和3周，兩組趾長伸肌中均可觀察到大量GFP熒光信號。轉(zhuǎn)染后1周實(shí)驗(yàn)組的肌濕重維持率、肌細(xì)胞橫截面積、趾長伸肌肌肉總蛋白含量分別為(90.87±1.56)％、(937.63．4

3、2±17．63)μ㎡和(93.20±1.33)(mg／mL)均明顯高于對照組(77.73±2.21)%、(721．50±14．40)μ㎡和(74.74±1.45)(mg／mL)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P均<0．01)。RT-PCR檢測實(shí)驗(yàn)組FOXO3a基因與對照組相比明顯下調(diào)（P<0.01）。轉(zhuǎn)染后3周，上述各指標(biāo)分別為（86.69±1.31）%、（843.10±16．44）μ㎡和（80.39±2.34)(mg／mL)，仍高于對照組，對

4、照組各指標(biāo)為（53.42±2.01）%、（633.90±12.90）μ㎡和（65.22±2.72)(mg／mL)（P均<0.01）。超微結(jié)構(gòu)顯示，術(shù)后1周和3周，對照組肌細(xì)胞相對于實(shí)驗(yàn)組出現(xiàn)少量線粒體明顯空泡化，Z線紊亂，肌絲排列不整齊。
　　結(jié)論：
　　FOXO3a基因siRNA重組慢病毒在大鼠體內(nèi)有較高的轉(zhuǎn)染率，可有效抑制FOXO3a基因的表達(dá)。RNAi介導(dǎo)的FOXO3a基因下調(diào)可在大鼠失神經(jīng)早期可以延緩失神經(jīng)骨骼肌的萎