六味地黃湯的質(zhì)量控制及有效成分的藥代動力學(xué)研究.pdf

1、六味地黃湯是中醫(yī)滋陰補腎的經(jīng)典名方，出自《小兒藥證直訣》，由熟地黃、山茱萸、山藥、澤瀉、茯苓、牡丹皮組成，其組方嚴謹，配伍得當，療效確切，在臨床上得到廣泛的應(yīng)用。本文以六味地黃湯為研究對象，從六味地黃湯的質(zhì)量控制以及有效成分在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)兩方面進行研究：建立了六味地黃湯的指紋圖譜，并對其中五種有效成分的含量進行了同時測定，為六味地黃湯的質(zhì)量控制提供了定性和定量的依據(jù)；多次i.g給予大鼠六味地黃湯，確定其吸收入血成分，同時建立了大

2、鼠血漿中莫諾苷和馬錢苷的測定方法，通過i.g給予大鼠六味地黃湯、三補湯、一補一瀉湯，測定莫諾苷和馬錢苷的血藥濃度，計算藥代動力學(xué)參數(shù)，探討有效成分在體內(nèi)的動態(tài)變化規(guī)律，為臨床用藥提供科學(xué)依據(jù)。
　　 主要研究內(nèi)容包括以下三個方面：
　　 一、六味地黃湯的質(zhì)量控制研究
　　 建立了六味地黃湯的指紋圖譜和多種成分同時測定的HPLC法，并測定了六味地黃湯中多糖含量，為更好的控制六味地黃湯的內(nèi)在質(zhì)量提供了定性和定量的科學(xué)

3、依據(jù)。
　　 六味地黃湯的指紋圖譜中共得到19個共有峰，其中5個成分經(jīng)對照品對照，鑒定為沒食子酸、莫諾苷、馬錢苷、芍藥苷和丹皮酚，并建立了5種成分含量測定的方法；通過與相同色譜條件下單味藥材色譜的比對，確定了六味地黃湯中19個共有峰的歸屬，主要來自于山茱萸、牡丹皮扣熟地黃藥材，其中2、8、12、14號峰為山茱萸藥材與牡丹皮藥材共有。
　　 本文通過不同配伍組中五種物質(zhì)的含量的比較，對六味地黃湯煎煮過程成分溶出規(guī)律進行了初

4、步研究。莫諾苷、馬錢苷、芍藥苷、丹皮酚的含量在六味地黃湯全方組中為最高，其他配伍組均低于全方組，提示各味藥材的配伍能促進單味藥材中成分的溶出。牡丹皮中沒食子酸在單味藥材煎煮含量較低，在與除山茱萸藥材的其他配伍組中含量較高，在含有山茱萸的配伍組中含量則略有降低，提示其他藥味可促進牡丹皮中沒食子酸的溶出，而山茱萸藥材在一定程度上呈抑制作用。
　　 多糖成分也為六味地黃湯的有效成分，本文用蒽酮一硫酸法測定了六味地黃湯中多糖的含量。

5、r>　　 二、六味地黃湯不同配伍對血清入血成分的影響
　　 本文對六味地黃湯在大鼠體內(nèi)吸收入血成分進行研究，確定了莫諾苷和馬錢苷為六味地黃湯i.g給藥后能以原型入血的成分，并建立了同時測定大鼠血清中莫諾苷和莫諾苷在0.254～102μg/ml的范圍內(nèi)，峰面積與血清濃度之間呈良好的線性關(guān)系(r=0.9998)，日內(nèi)和日間精密度的RSD％均小于15％；馬錢苷在0.579～232μg/ml的范圍內(nèi)，峰面積與血清濃度間呈良好的線性關(guān)系

6、(r=0.9998)，日內(nèi)和日間精密度的RSD％均小于15％，符合生物樣品的分析要求。
　　 本文選用6只大鼠為一組，累計多次灌胃給予大鼠六味地黃湯、一補一瀉湯、三補湯后，分別于1、2、3h取血清進行分析，測定莫諾苷和馬錢苷的血藥濃度，提示全方組對莫諾苷和馬錢苷的吸收有一定程度的促進作用。
　　 三、大鼠血漿中莫諾苷和馬錢苷的藥代動力學(xué)研究
　　 建立了大鼠血漿中同時測定莫諾苷和馬錢苷的HPLC定量分析方法。大鼠

7、血漿以甲醇沉淀蛋白去除雜質(zhì)，N2氣吹干甲醇復(fù)溶后進樣，測定大鼠血漿中莫諾苷和馬錢苷的濃度，莫諾苷和馬錢苷分離度佳，內(nèi)源性物質(zhì)不干擾測定。莫諾苷濃度在0.01021～10.21μg/ml范圍內(nèi)，峰面積與血漿濃度間呈良好的線性關(guān)系(r=1.000)，提取回收率大于70％，日內(nèi)和日間精密度均小于5％；馬錢苷濃度在0.006325～6.325μg/ml內(nèi)，峰面積與血漿濃度間呈良好的線性關(guān)系(r=1.000)，提取回收率大于80％，日內(nèi)和日間精密

8、度均小于5％，此方法具有靈敏、專一的特點，符合生物樣品的分析要求。
　　 本文選用16只大鼠，以六味地黃湯、一補一瀉湯、三補湯分別單次灌胃(i.g.)給藥，其中六味地黃湯和三補湯大鼠血漿中莫諾苷和馬錢苷血藥濃度-時間曲線符合一級吸收的一室模型，而一補一瀉湯大鼠血漿中的莫諾苷和馬錢苷血藥濃度-時間曲線符合一級吸收的二室模型；通過藥代動力學(xué)參數(shù)的研究，進一步研究六味地黃湯的體內(nèi)過程，為臨床應(yīng)用提供更加科學(xué)的依據(jù)。
　　 對大