犬瘟熱病毒揚(yáng)州分離株生物學(xué)特性研究及融合區(qū)序列分析.pdf

1、對2001年3月至5月期間就診于揚(yáng)州大學(xué)動(dòng)物醫(yī)院疑似感染犬瘟熱病毒的犬作流行病學(xué)調(diào)查和實(shí)驗(yàn)室診斷.采用Vero細(xì)胞(非洲綠猴腎細(xì)胞)分離病毒,傳代細(xì)胞出現(xiàn)了明顯的細(xì)胞變圓、脫落及拉網(wǎng)現(xiàn)象;負(fù)染電鏡可觀察到病毒粒子;接種病料的細(xì)胞IFA檢測可見特異性的亮綠色熒光,基于上述診斷結(jié)果可確診為犬瘟熱病毒感染.利用雙瓊脂空斑技術(shù)對分離病毒進(jìn)行克隆,并命名為CDV-YZ-0101,CDV-YZ-0102,CDV-YZ-0103,它們對氯仿敏感,對酸

2、、熱抵抗力弱,血凝試驗(yàn)其只對禽類紅細(xì)胞呈弱陽性,細(xì)胞毒力(TCID<,50>)分別為10<'-4.6>~10<'-5.0>/ml、10<'-4.4>~10<'-4.9>/ml、10<'-4.8>~10<'-5.1>/ml;形成空斑直徑為0.4~0.6mm.為建立一套完整的檢測犬瘟熱的分子生物學(xué)方法,該研究中設(shè)計(jì)了一對特異引物,采用經(jīng)典法提取犬瘟熱病毒OP株(標(biāo)準(zhǔn)病毒)的RNA,對PCR循環(huán)參數(shù)進(jìn)行了搜索,篩選出PCR反應(yīng)最佳程序?yàn)?96