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文檔簡介
1、該研究共進行了三個試驗.試驗1,運用聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction PCR)方法擴增并克隆了在中國分離得到的反轉錄病毒J亞群禽白血病病毒NX0101株的前病毒全基因組序列并完成了序列測定,并與已發(fā)表的ALV-J前病毒序列進行比較.根據(jù)已報道的ALV-J前病毒基因組序列設計了8對重疊引物,通過PCR方法擴增出ALV-J/NX0101株的不同cDNA片段,分別克隆到pMD18-T載體中,轉化受體菌TG1,
2、酶切鑒定陽性克隆,并對陽性克隆測序,最后拼接出NX0101株的全基因組核酸序列.試驗2,探索了對REV特異性的雜交瘤細胞株11B154的最佳生長和抗體分泌條件.以每毫升培養(yǎng)液中平均含0.65×10<'6>個/ml活細胞起始,于37℃下在含7％CO<,2>的培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng).在24、48、72和96小時后,每毫升培養(yǎng)液平均總細胞數(shù)和活細胞數(shù)(百分比)分別是:1.13×10<'6>和1.03×10<'6>(活細胞占94.5％)、3.42×1
3、0<'6>和2.48×10<'6>(活細胞占72.5％)、2.6×10<'6>和0.98×10<'6>(活細胞占37.7％)及2.47×10<'6>和0.53×10<6>(或細胞占21.5％).同時用細胞培養(yǎng)上清液對REV感染的雞胚成纖維細胞作間接熒光抗體試驗,在培養(yǎng)24、48、72和96小時后上清液中平均抗體效價分別是1:67、1:133、1:67及1:33.試驗3,為了模仿REV垂直感染雞胚,在1和3日齡的發(fā)育SPF雞胚人工接種不同
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