保存液對再植脫位牙牙周膜成纖維細胞生物學(xué)活性的影響.pdf

1、目的：脫位牙即時、有效的保存以防止牙周膜的干燥非常重要，這能直接影響再植牙的成功率。下列四種因素對牙周膜的愈合有明顯的影響強弱的次序為牙根發(fā)育的階段、口外保存時間的長短、立即再植、濕保存時間的長短。應(yīng)盡快將其浸泡在生理性平衡介質(zhì)中，牙周膜細胞的生物學(xué)活性就可維持較長時間。保存劑的篩選是牙再植研究中的一項重要內(nèi)容，國內(nèi)對于脫位牙保存劑選擇方面的研究非常少見，而對于體外測定再植牙的牙周膜細胞的活性來評價選擇脫位牙保存劑的報道更少見。本研究在

2、體外培養(yǎng)人牙周膜細胞的基礎(chǔ)上，用MTT(四唑鹽)比色實驗法，比較脫位牙牙周膜細胞在六種不同的保存液(DMEM培養(yǎng)液、HBSS液、0.9％生理鹽水、唾液、牛奶、自來水)浸泡半小時、一小時、一個半小時、兩小時四個時間段后對細胞生物學(xué)活性的影響。 方法： 1、人牙周膜細胞的體外培養(yǎng) 取自臨床上13～19歲因正畸需要拔除的無齲病、無齦炎的前磨牙，拔除該牙后，刮下根中1/3部位的牙周膜組織。按組織塊貼壁法，用含10％FCS

3、的DMEM培養(yǎng)液，在37℃，5％CO2條件下培養(yǎng)。細胞生長達匯合點后，用2.5g/L胰蛋白酶消化進行傳代，取第8代細胞用于實驗。 2、細胞增殖活性的研究 取生長良好的第8代人牙周膜細胞，將細胞常規(guī)消化，調(diào)整細胞濃度以2×105/ml的濃度接種于四個96孔板內(nèi)，每孔100μl。細胞在含10％FCS的DMEM培養(yǎng)液中培養(yǎng)24h，鏡下見大多數(shù)成纖維細胞貼壁后，棄去孔內(nèi)液體及不貼壁細胞，用PBS液沖洗3次后，吸干，加入不同的脫位

4、牙保存液。(1)第1塊96孔板為A組，加入不同的液體作用半小時，分7小組，每組8孔，A1組為DMEM培養(yǎng)液,A2組為HBSS液,A3組為0.9％生理鹽水,A4組為唾液,A5組為牛奶，A6組為自來水；空白對照組為A7組不含任何液體。(2)第2塊，3塊，4塊96孔板為B、C、D組分別加入以上各種液體作用1小時，1.5小時及2小時，其余處理同A組。 然后，MTT法檢測細胞增殖活性的變化。 結(jié)果： 1.A組(0.5小時)

5、，六種保存液之間的細胞增殖活性無顯著性差異(P＞0.05). 2.B組(1小時)各保存液之間比較，B1組與B4、B5、B6組的細胞增殖活性比較均有顯著性差異(P＜0.05).其它組間則無。 3.C組(1.5小時)組內(nèi)比較，C6組與C1、C4組的細胞增殖活性比較有顯著性差異(P＜0.05).C6組的細胞增殖活性顯著低于C1、C4組。 4.D組(2.0小時)D1與D6組的細胞增殖活性比較有顯著性差異(P＜0.05)。

6、D1組的細胞增殖活性顯著高于D6組。 結(jié)論： 六組保存液在0.5小時內(nèi)對牙周膜細胞增殖活性的影響無顯著性差異。隨著時間的延長，1.0小時后DMEM培養(yǎng)液顯示出自身的優(yōu)勢，與唾液、牛奶、自來水組細胞增殖活性比較有顯著性差異，其中自來水組牙周膜細胞增殖活性最低。1.5小時后牙周膜細胞的增殖活性均降低，但DMEM培養(yǎng)液與自來水組和唾液與自來水組的細胞增殖活性比較有顯著性差異，自來水組牙周膜細胞增殖活性明顯低于其它兩組。2小時后