廣東鼻咽癌相關(guān)EB病毒BZLF1基因的突變分析及初步的功能學(xué)研究.pdf

1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文廣東鼻咽癌相關(guān)EB病毒BZLF1基因的突變分析及初步的功能學(xué)研究姓名：徐金芬申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：賈衛(wèi)華20080527廣東鼻咽癌相關(guān)EB病毒BZLFl基因的突變分析及初步的功能學(xué)研究腫瘤中，體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)均表明由BZLFl或BRLFl基因啟動(dòng)的EB病毒的少量裂解復(fù)制可以通過促進(jìn)血管內(nèi)皮生長因子(vascularendothelialgrowthfactor，vEGF)的生成促進(jìn)腫瘤的生長；但在C1

2、8鼻咽癌腫瘤細(xì)胞中注入BZLFl或BRLFl的腺病毒表達(dá)載體誘導(dǎo)EB病毒進(jìn)行大量裂解復(fù)制時(shí)卻可以顯著抑制裸鼠腫瘤的生長。BZLFl基因在鼻咽上皮細(xì)胞癌變的過程中究竟扮演什么角色目前尚不清楚，作為引發(fā)EB病毒裂解復(fù)制的必需基因，它在朗病毒與鼻咽癌的相關(guān)分子機(jī)制中可能起著極其重要的作用，對它的深入研究也是非常有意義的。為了深入研究EB病毒與鼻咽癌的關(guān)系，本課題組從廣東鼻咽癌患者中成功分離一株高致瘤朗病毒亞型GDl并完成其全基因組測序工作，G

3、Dl株與原型B958株相比，存在43個(gè)位點(diǎn)的缺失，44個(gè)位點(diǎn)的插入以及1413個(gè)位點(diǎn)的變異。GDl株來源于鼻咽癌患者且在廣東鼻咽癌患者中具有高度的代表性，它為EB病毒與鼻咽癌相關(guān)的分子機(jī)制研究提供了較好的模板。我們對GDl株髓病毒裂解期立早基因BZLFl(簡稱為GDl型BZLFl基因)的序列比對結(jié)果顯示，相對原型B958株，GDl型BzLFl基因的3個(gè)外顯子和2個(gè)內(nèi)含子中共存在30個(gè)點(diǎn)突變，3個(gè)單堿基缺失和1個(gè)單堿基插入。鑒于以上研究結(jié)

4、果，我們決定對GDl型BzLFl基因編碼區(qū)的變異位點(diǎn)進(jìn)行頻率調(diào)查，同時(shí)對多位點(diǎn)進(jìn)行連鎖變異分析，探討GDl型BZLFl基因在廣東鼻咽癌患者中是否具有代表性；另外通過對GDl型BzLFl基因初步的功能學(xué)研究分析這些變異位點(diǎn)對BzLFl基因的功能影響，進(jìn)一步探討B(tài)ZLFl基因在EB病毒與鼻咽癌相關(guān)的分子機(jī)制中可能起到的作用。2研究方法：21耶病毒GDl型BZLFl基因的突變分析方法：采集研究對象的漱口水標(biāo)本并提取DNA，漱口水標(biāo)本包括：廣東

5、鼻咽癌患者192例，廣東健康人群197例和河南健康人群128例，另有鼻咽癌組織DNA標(biāo)本54例，利用巢式PCR方法擴(kuò)增BZLFl基因的特定片斷(每個(gè)片斷上都分布有多個(gè)突變位點(diǎn))，將PCR產(chǎn)物直接測序，用DNAstar序列分析軟件分析校讀測序結(jié)果。分析校讀測序結(jié)果后篩選出可以得到BZLFl基因序列全長的標(biāo)本。通過對BZLFl基因編碼區(qū)的18個(gè)變異位點(diǎn)在廣東鼻咽癌患者和廣東，河南健康人群中的單點(diǎn)變異及多位點(diǎn)連鎖變異分布頻率的調(diào)查分析GDl型