嗜麥芽窄食單胞菌臨床株的耐藥現(xiàn)狀及分子耐藥機制研究.pdf

1、【目的】 了解廣東省湛江、深圳兩地區(qū)嗜麥芽窄食單胞菌的耐藥現(xiàn)狀和耐藥水平；掌握嗜麥芽窄食單胞菌產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶的種類和水平及其與耐藥性的關系；證實嗜麥芽窄食單胞菌流行株耐藥性與外膜蛋白的相關性；分析主動外排系統(tǒng)與嗜麥芽窄食單胞菌耐藥的相關性；用PCR擴增耐藥基因(qacE△1-sul Ⅰ、int Ⅰ1)并對其進行定位，以分析其與耐藥的相關性，為臨床治療嗜麥芽窄食單胞菌感染合理應用抗生素及流行病學研究提供依據(jù)和指導。 【方法

2、】 1對臨床標本中分離的55株嗜麥芽窄食單胞菌進行系統(tǒng)鑒定。 2 對嗜麥芽窄食單胞菌進行抗生素敏感性試驗： 2.1 采用紙片擴散法(K-B法)測定嗜麥芽窄食單胞菌對21種抗生素的敏感性； 2.2 采用瓊脂稀釋法測定嗜麥芽窄食單胞菌對6種抗生素的最低抑菌濃度(MIC)。 3 嗜麥芽窄食單胞菌β-內(nèi)酰胺酶的分析： 3.1 表型確證實驗紙片法進行超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)的測定； 3

3、.2 亞胺培南-EDTA 紙片增效法檢測金屬β-內(nèi)酰胺酶。 4 變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)對外膜蛋白(OMP)進行分離、鑒定。 5 檢測泵抑制劑(CCCP)對嗜麥芽窄食單胞菌氟喹諾酮類敏感性的影響。 6 堿裂解法抽提嗜麥芽窄食單胞菌的質(zhì)粒，PCR 擴增嗜麥芽窄食單胞菌耐藥基因(qacE△1-sul Ⅰ、int Ⅰ1)并對其進行定位分析。 【結果】 155株嗜麥芽窄食單胞菌在各臨床標本

4、中的分布分別為痰和氣管吸出物45株占81.82％，尿液5株占9.09％，血液3株占5.45％，胸水和膽汁各1株占1.82％。感染人群主要以60歲以上年齡段為主，占74.5％(41/55)。ICU、呼吸內(nèi)科的分離率分別為30％、22％。 2 嗜麥芽窄食單胞菌對21種抗生素的藥敏結果顯示：對頭孢唑林、頭孢西丁全部耐藥。對頭孢噻肟、頭孢曲松、亞胺培南、氨芐西林/舒巴坦、紅霉素、氨曲南、頭孢吡肟、四環(huán)素的耐藥情況十分嚴重，耐藥率分別為

5、98.18％、98.18％、96.36％、94.55％、94.55％、90.91％、87.27％、74.55％。而對米諾環(huán)素、左氧氟沙星、復方新諾明、環(huán)丙沙星、替卡西林/克拉維酸表現(xiàn)為較高的敏感性，其敏感率分別為94.55％、92.73％、87.27％、69.09％、67.27％。對10種以上抗菌藥物耐藥的臨床株共51株，占總分離數(shù)的92.73％，其中多重耐藥株大部分為同時對10-15種抗菌藥物耐藥的菌株。 3 瓊脂稀釋法測定對

6、6種抗菌藥物的耐藥率均高于K-B 法，兩種方法對慶大霉素的耐藥率測定結果差別有統(tǒng)計學意義(P<0.001)，而對另外5種抗菌藥物的耐藥率差別無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 4 嗜麥芽窄食單胞菌的ESBLs陽性率為34.55％(19/55)，金屬B-內(nèi)酰胺酶陽性率達96.36％(53/55)。ESBLs陽性菌株與ESBLs陰性菌株對哌拉西林等19種抗菌藥物的耐藥程度差別無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 5 深圳、湛江兩地區(qū)的

7、嗜麥芽窄食單胞菌臨床株對哌拉西林等21種抗菌藥物的敏感性差別無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 6 SDS-PAGE 檢測嗜麥芽窄食單胞菌的主要外膜蛋白都有9條左右，對四環(huán)素敏感的菌株，其外膜蛋白均出現(xiàn)相對分子質(zhì)量約20 000的條帶減弱。 7 55株嗜麥芽窄食單胞菌共篩選出9株外排泵陽性菌，CCCP 在體外能增強FQS抗菌活性，主動外排機制既存在于FQS耐藥株，也存在于FQS 敏感株，對耐藥株影響更大。 8 嗜麥芽

8、窄食單胞菌質(zhì)粒攜帶率為7.27％(4/55)。以55株細菌總DNA為模板，intⅠ1 基因陽性率為9.09％(5/55)，qacE△1-sul Ⅰ基因陽性率為7.27％(4/55)；以提取的質(zhì)粒為模板，4株攜帶質(zhì)粒的臨床株中檢出int Ⅰ1、qacE△l-sulⅠ基因陽性株各為1株。 【結論】 1嗜麥芽窄食單胞菌引起的感染以呼吸道為主，感染人群以老年人多見。 2 抗生素敏感性試驗結果顯示：湛江深圳兩地嗜麥芽窄食單胞

9、菌的耐藥現(xiàn)狀十分嚴重，多重高度耐藥株廣泛分布。 3 產(chǎn)生金屬β-內(nèi)酰胺酶是嗜麥芽窄食單胞菌對β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物耐藥的主要原因。 4 嗜麥芽窄食單胞菌外膜蛋白的缺失、表達減弱或增強與細菌耐藥有一定的相關性。 5 嗜麥芽窄食單胞菌對氟喹諾酮類耐藥與主動外排泵有關，泵抑制劑CCCP可部分逆轉(zhuǎn)這種耐藥性。 6 Ⅰ類整合子的存在和qacE△l-sulⅠ基因的表達參與嗜麥芽窄食單胞菌磺胺類藥物耐藥，與磺胺類藥物高度