臨床分離泛耐藥菌的篩查及銅綠假單胞菌泛耐藥機制研究.pdf

1、目的:(1)了解本院碳青霉烯類耐藥鮑曼不動桿菌的臨床分布、耐藥特征及泛耐藥現(xiàn)狀。(2)探討湖南地區(qū)臨床分離泛耐藥銅綠假單胞菌(PDR-PA)的主要耐藥機制及分子流行病學特征。
　　方法:(1)連續(xù)收集湘雅醫(yī)院2011年9月1日-2012年6月30日臨床分離非重復(fù)對碳青霉烯類耐藥的鮑曼不動桿菌以及湖南地區(qū)15家醫(yī)院2011年1月1日-2011年12月31日多重耐藥銅綠假單胞菌。VITEK-2全自動微生物分析系統(tǒng)或API對病原菌進行鑒

2、定;K-B法檢測抗菌藥物的敏感性、篩查泛耐藥菌株;藥敏結(jié)果以軟件WHONET5.6進行分析。(2)對37株P(guān)DR-PA采用改良Hodge試驗初篩碳青霉烯酶、雙紙片協(xié)同試驗和雙紙片增效試驗篩查金屬β-內(nèi)酰胺酶。(3)PCR檢測33種滅活酶基因（包括β-內(nèi)酰胺酶基因、16SrRNA甲基化酶基因、氨基糖苷類修飾酶基因等）、13種可移動性元件基因、3種外排泵基因以及外膜蛋白基因，并對擴增產(chǎn)物進行測序及BLAST分析。(4)瓊脂對倍稀釋法進行外排

3、泵抑制劑的抑制試驗，觀察抗生素的MIC變化。實時熒光定量PCR檢測外排泵基因MexA以及外膜蛋白基因OprD2的相對表達量。(5)脈沖場凝膠電泳技術(shù)(PFGE)和聚類分析法進行菌株間同源性分析。
　　結(jié)果:(1)205株碳青霉烯類耐藥的鮑曼不動桿菌主要來源于呼吸道標本，占79.0％;科室分布以ICU(55.6％)為主。頭孢哌酮/舒巴坦敏感率最高，為52.2％，對其他抗菌藥物的耐藥率達52.7％-100％，且監(jiān)測到8株泛耐藥鮑曼不動

4、桿菌。(2)15家醫(yī)院共分離到37株P(guān)DR-PA，改良Hodge實驗陽性8株，陽性率為21.6％。金屬β-內(nèi)酰胺酶初篩陽性5株，陽性率為13.5％。(3)37株P(guān)DR-PA中，其滅活酶基因陽性有TEM、armA、rmtB、VIM、IMP和CARB，陽性率分別是100.0％、22.0％、5.0％、19.0％、22.0％和37.8％?？梢苿有栽npU、tnp513、tnpA/tn21、merA和IntⅠ等5種基因為陽性，陽性率分別為16

5、.0％、81.0％、49.0％、100.0％和100.0％。所有陽性基因經(jīng)BLAST分析證實，與Genbank中已知序列同源性均大于98.0％。(4)37株P(guān)DR-PA中，外排泵抑制試驗陽性34株，陽性率為91.9％。對照組和實驗組MexA基因的相對表達量分別為0.70±0.13以及1.95±0.48(P=0.018)，而OprD2基因的相對表達量分別為3.18±0.60以及0.94±0.08(P=0.002)。(5)37株P(guān)DR-PA

6、可分為21個型，A型最多，共5株。A1亞型同時出現(xiàn)在湘雅醫(yī)院和湘雅三醫(yī)院，E1亞型分別出現(xiàn)在湖南省第二人民醫(yī)院和湘雅三醫(yī)院。
　　結(jié)論:(1)本院碳青霉烯耐藥鮑曼不動桿菌呈嚴重的多重耐藥性;(2)湖南地區(qū)已出現(xiàn)泛耐藥鮑曼不動桿菌和銅綠假單胞菌。(3)IMP、VIM、TEM、CARB、armA、rmtB等滅活酶以及外排泵MexAB-OprM的高表達和外膜蛋白OprD2的表達下降是導(dǎo)致本地區(qū)銅綠假單胞菌泛耐藥的重要原因。(4)tnpU