卡鋰電苗多糖核酸下調(diào)急性哮喘小鼠CD4+T細胞IL-17的表達.pdf

1、背景：支氣管哮喘是由嗜酸性粒細胞、肥大細胞和T淋巴細胞等多種炎性細胞和細胞組分參與的氣道慢性炎癥性疾病。以往研究證實，支氣管哮喘的發(fā)病與Th1/Th2失衡有著密切關(guān)系。但最近研究顯示Th17細胞(IL17)及其它細胞因子在哮喘小鼠動物模型的發(fā)病機制中有重要作用[1]?？ń榫嗵呛怂?BCG-PSN)作為一種免疫調(diào)節(jié)物質(zhì)，可以抑制氣道反應(yīng)性和氣道嗜酸粒細胞的浸潤，抑制Th2反應(yīng)，增強Th1反應(yīng)，減輕氣道反應(yīng)，但卡介苗多糖核酸是否能抑制IL

2、-17的表達從而來減輕氣道炎癥尚未見報道。
　　 目的：觀察卡介苗多糖核酸和地塞米松對哮喘小鼠脾源性CD4+T細胞IL-17表達的影響。
　　 方法：10只SPF級雌性BALB/C小鼠隨機分為兩組：哮喘組(5只)以O(shè)VA致敏、激發(fā)；正常對照組(5只)以等體積的PBS代替OVA致敏、激發(fā)，末次激發(fā)24小時后處理小鼠。查看小鼠的一般行為活動；霧化吸入Ach行支氣管激發(fā)試驗，有創(chuàng)肺阻抗法測定小鼠的氣道反應(yīng)性；BALF行細胞學(xué)分

3、類、計數(shù)；HE染色觀察肺組織的病理變化。研磨小鼠脾臟制成單個核細胞懸液，裂解紅細胞，免疫磁珠分離小鼠脾源性CD4+T細胞，分為正常對照組，而哮喘小鼠脾源性CD4+T細胞分為哮喘未干預(yù)組、哮喘BCG-PSN干預(yù)組和哮喘地塞米松干預(yù)組，懸于加有胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液、ConA和PMA等刺激培養(yǎng)24小時后，計算正常對照組及哮喘未干預(yù)組脾源性CD4+T細胞總數(shù)；流式儀檢測正常對照組和哮喘未干預(yù)組Th17細胞的陽性率；ELISA法測定

4、正常對照組和哮喘未干預(yù)組脾源性CD4+T細胞培養(yǎng)上清液和BALF中的IL-17濃度；Western Blot和Real Time PCR分別測定測定正常對照組、哮喘未干預(yù)組、哮喘BCG-PSN干預(yù)組和哮喘地塞米松干預(yù)組脾源性CD4+T細胞中IL-17蛋白和IL-17mRNA表達。
　　 結(jié)果：
　　 (1)哮喘組小鼠出現(xiàn)類似于人的哮喘發(fā)作癥狀，而正常對照組小鼠表現(xiàn)正常；
　　 (2)與正常對照組相比，哮喘組小鼠對

5、Ach的刺激反應(yīng)明顯，濃度反應(yīng)曲線上移(均P<0.01)；
　　 (3)與正常對照組相比，哮喘組小鼠肺組織支氣管及血管周圍大量炎性細胞(包括中性粒細胞、嗜酸性粒細胞、淋巴細胞和單核細胞)浸潤(P<0.01)；
　　 (4)與正常對照組相比，哮喘組小鼠BALF中白細胞總數(shù)、Neu(％)、Eos(％)和Lym(％)顯著增多(均P<0.01)；
　　 (5)與正常對照組相比，哮喘組小鼠BALF中IL-17濃度顯著升高(

6、P<0.01)；
　　 (6)哮喘未干預(yù)組小鼠BALF中IL-17的濃度與Neu(％)顯著正相關(guān)(r=0.903，P<0.01)；
　　 (7)與正常對照組相比，哮喘未干預(yù)組小鼠脾源性CD4+T細胞總數(shù)和Th17細胞陽性率顯著增高(均P<0.01)；
　　 (8)與正常對照組相比，哮喘未干預(yù)組小鼠脾源性CD4+T細胞培養(yǎng)上清液中IL-17的濃度顯著升高(P<0.01)；
　　 (9)與正常對照組相比，哮喘

7、未干預(yù)組小鼠脾源性CD4+T細胞中IL-17蛋白和IL-17mRNA的表達顯著增高(P<0.01)；而哮喘BCG-PSN干預(yù)組和哮喘地塞米松干預(yù)組中小鼠脾源性CD4+T細胞中的IL-17蛋白和IL-17mRNA的表達均低于哮喘未干預(yù)組(均P<0.01)，但前兩者間無顯著性差別(P>0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.本實驗中建立的急性哮喘小鼠模型是成功的；
　　 2.卡介苗多糖核酸可以下調(diào)急性哮喘小鼠CD4+T