胃癌細(xì)胞對CD4+T細(xì)胞ThPOK蛋白表達(dá)的影響及其與CD4+T細(xì)胞亞群分化的關(guān)系.pdf

1、目的：
　　研究胃癌細(xì)胞對CD4+T淋巴細(xì)胞ThPOK表達(dá)的影響及其與CD4+T細(xì)胞亞群分化的關(guān)系，探討胃癌免疫逃逸機(jī)制。
　　方法：
　　1、胃癌細(xì)胞株（SGC7901、BGC823）與CD4+T細(xì)胞株（Jurkat T淋巴細(xì)胞株）（未活化及活化）直接或Transwell間接共培養(yǎng)6h后，分離Jurkat T淋巴細(xì)胞，再單獨(dú)培養(yǎng)12h后，檢測各組Jurkat細(xì)胞中ThPOK、IFN-γ、IL-4、IL-17、FoxP

2、3表達(dá)差異。
　　2、采用慢病毒干擾技術(shù)，沉寂 Jurkat細(xì)胞 ThPOK的表達(dá)（即構(gòu)建siThPOK-Jurkat細(xì)胞），沉寂ThPOK的Jurkat細(xì)胞不同狀態(tài)下（與胃癌細(xì)胞株直接共培養(yǎng)）表達(dá)ThPOK、IFN-γ、IL-4、IL-17、FoxP3表達(dá)差異。
　　結(jié)果：
　　1、SGC7901與Jurkat細(xì)胞共培養(yǎng)按不同比例直接共培養(yǎng)，隨著淋巴細(xì)胞比例升高，ThPOK mRNA表達(dá)隨之升高（P＜0.05）。

3、r>　　2、且若將胃癌細(xì)胞與Jurkat T淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)（直接及間接），直接共培養(yǎng)時Jurkat細(xì)胞中ThPOK表達(dá)明顯升高，且活化時升高更顯著（P＜0.05）。而間接共培養(yǎng)時，胃癌共培養(yǎng)組與GES-1對照組比并無明顯變化（P＞0.05）。故認(rèn)為胃癌細(xì)胞主要通過直接接觸促進(jìn)Jurkat T淋巴細(xì)胞中ThPOK表達(dá)。
　　3、①對照活化組與對照非活化組相比，胃癌活化組與胃癌非活化組相比，前者共培養(yǎng)后Jurkat T淋巴細(xì)胞表達(dá)IF

4、N-γ、IL-4 mRNA及蛋白均高于后者（P＜0.05）。而FoxP3、IL-17蛋白前者與后者無明顯差異（P＞0.05）。
　　②Jurkat淋巴細(xì)胞未活化時，胃癌非活化組與對照非活化組相比，IFN-γ、IL-4、FoxP3 mRNA及蛋白表達(dá)上調(diào)（P＜0.05）。IL-17表達(dá)無明顯差異（P＞0.05）。
　　③而Jurkat淋巴細(xì)胞活化時，胃癌活化組與對照活化組相比，IFN-γ、IL-4、FoxP3 mRNA及蛋白表

5、達(dá)升高。IL-17表達(dá)無明顯差異（P＞0.05）。
　　4、siThPOK-Jurkat細(xì)胞中 ThPOK mRNA基因及蛋白表達(dá)明顯降低（P＜0.05），可用于后續(xù)試驗(yàn)。
　　5、胃癌細(xì)胞、GES-1分別與活化Jurkat、活化siThPOK-Jurkat細(xì)胞直接共培養(yǎng)后結(jié)果如下：
　?、賹φ粘良沤M與對照活化組相比，胃癌沉寂組與胃癌活化組相比，前者IFN-γ蛋白表達(dá)明顯降低（P＜0.05）。胃癌沉寂組與對照沉寂組相比

6、，前者IFN-γ表達(dá)明顯高于后者（P＜0.05）。
　　②對照沉寂組與對照活化組相比，胃癌沉寂組與胃癌活化組相比，前者IL-4蛋白表達(dá)明顯降低（P＜0.05）。胃癌沉寂組與對照沉寂組相比，兩組間無差異（P＞0.05）。
　?、蹖φ粘良沤M與對照活化組相比，胃癌沉寂組與胃癌活化組相比，Jurkat細(xì)胞分泌IL-17無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。胃癌沉寂組與對照沉寂組相比，IL-17蛋白表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。