哮喘小鼠血清IL-17與IgE的變化及相關(guān)性分析.pdf

1、目的：1．建立OVA致敏和激發(fā)的哮喘小鼠模型；2．觀察支氣管哮喘急性期、慢性期及緩解期小鼠與正常小鼠血清IL-17和IgE的水平變化；3．觀察支氣管哮喘急性期、慢性期及緩解期小鼠與正常小鼠肺泡灌洗液中細(xì)胞分類及肺組織病理學(xué)的變化：4．探討IL-17與IgE在支氣管哮喘免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制中的作用及相關(guān)性。
　　 方法：4~6周齡、18~22g健康清潔級(jí)雌性昆明小鼠40只，隨機(jī)分為急性哮喘組A1組(10只)、慢性哮喘組A2組（10只）、

2、哮喘緩解組A3組（10只）和對(duì)照組C組(10只)，以雞卵清蛋白(OVA)致敏和激發(fā)的方法建立哮喘模型：A1組、A2組和A3組在實(shí)驗(yàn)第0、7、14天予20μgOVA+150μlAI(OH)3+50μlNS(100mg/L)混懸液腹腔注射致敏；第28、29、30天將A1組、A2組和A3組每只小鼠單獨(dú)置于5L密閉容器中，以2％OVA霧化吸入激發(fā)，使小鼠暴露在OVA氣霧中20~30min直至出現(xiàn)哮喘樣發(fā)作為止；A1組在第30天霧化的24小時(shí)后處

3、死；A2組在第31~69天每天予2%OVA霧化吸入;A3組30天后不予任何處理；C組予等量生理鹽水腹腔注射及霧化吸入，處置時(shí)間與A2組相同；第70天處死A2組、A3組及C組。眼球取血約1.5ml后，頸椎脫位處死，血液離心，取上層血清，分別用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)白介素-17(IL-17)及IgE;支氣管肺泡灌洗液(BLAF)進(jìn)行細(xì)胞分類計(jì)數(shù);取肺組織病理切片HE染色觀察炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用SPSS18.0軟件進(jìn)行分析。
　　

4、 結(jié)果：1．哮喘小鼠模型成功建立的表現(xiàn)及比較：A1組、A2組及A3組小鼠均出現(xiàn)煩躁不安，呼吸急促，擦鼻，打噴嚏，口唇尾部紫紺，活動(dòng)頻繁，毛發(fā)豎起失去光澤，腹肌痙攣，大小便失禁等表現(xiàn)；A2組表現(xiàn)的尤其顯著，更易驚，嚴(yán)重者呼吸節(jié)律不齊，俯伏不動(dòng)，四肢癱軟；A3、組早期較明顯，后期癥狀稍緩解：C組未出現(xiàn)上述癥狀。
　　 2．血清IL-17水平：A1組小鼠為15.14±1.98ng/ml，A2組小鼠為20.63±1.90ng/ml，A3

5、組小鼠為10.96±1.44ng/ml，C組小鼠為0.39±0.46ng/ml；A2組IL-17水平明顯高于A1、A3及C組(P<0.01)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；A1組IL-17水平明顯高于A3組及C組(P<0.01)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；A3組IL-17水平明顯高于C組(P<0.01)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 3．血清IgE水平：A1組小鼠為6.63+0.78ng/ml，A2組小鼠為6.94+0.12ng/ml，A3組小鼠6.2

6、2-0.15ng/ml，C組小鼠為5.44士0.24ng/ml。A2組IgE水平明顯高于AI、A3及C組(P<0.01)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；A1組lgE水平明顯高于A3組及C組(P<0.01)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；A3組leE水平明顯高于C組(P<0.Ol)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 4．小鼠BALF中細(xì)胞總數(shù)和嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞所占百分比(EOS%、NE%)- A2組細(xì)胞總數(shù)和EOS%、NE%明顯高于A1組、A3組及C組(

7、P<0．Ol)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；A1組細(xì)胞總數(shù)和EOS%、NE%明顯高于A3組及C組(P<0.01)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；A0組細(xì)胞總數(shù)和EOS%、NE%明顯高于C組(P<0.01)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 5．血清IL-17與IgE水平呈顯著正相關(guān)(r--0.942，P<0.01)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；血清IL-17與BALF中EOS%水平呈顯著正相關(guān)(r--0.956，P

8、F中NE%水平呈顯著正相關(guān)(r=0.938，P<0.01)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 6．肺組織病理學(xué)觀察：A1、A2、A3組小鼠與C組小鼠對(duì)比顯示肺臟表面腫脹，體積增大，切面可見滲出白色泡沫。肺組織切片HE染色示支氣管管腔狹窄，黏膜水腫，黏液腺增生，黏膜皺襞增多，肺泡隔增厚、水腫形狀不規(guī)則，肺泡腔融合擴(kuò)大。A1組支氣管黏膜、黏膜下層、平滑肌及血管周圍可見大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；A3組炎性細(xì)胞浸潤(rùn)稍減少；A2組則在急性期的病理基礎(chǔ)上出

9、現(xiàn)氣道上皮纖維化，出現(xiàn)氣道重塑。C組小鼠氣管及肺泡結(jié)構(gòu)正常，支氣管粘膜上皮完整，未見明顯炎癥細(xì)胞。
　　 結(jié)論：1．哮喘小鼠模型建立成功，急性期、慢性期及緩解期的病理變化符合哮喘的病理生理改變。
　　 2.IL-17在哮喘的免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制中起促進(jìn)作用，參與哮喘的急性炎癥反應(yīng)及氣道重塑過程，并且IL-17的水平能在一定程度上表示哮喘病情的嚴(yán)重程度。
　　 3．哮喘小鼠存在免疫功能紊亂，IgE、EOS、NE在急性期升