人-人嵌合型抗甲型肝炎病毒IgM抗體檢測質控物研究.pdf

1、目的： 本研究擬用化學交聯(lián)方法構建一種人—人抗體嵌合物作為抗—甲型肝炎病毒(hepatitis A virus，HAV)IgM抗體檢測質控品，并探討其在臨床應用價值。 方法： 一、嵌合抗體的構建 通過酶聯(lián)免疫吸附試驗篩選出抗—HAV IgG陽性效價高的血清(抗HIV—1、HBsAg陰性，抗—HEV、抗—HCV、梅毒抗體陰性)，再以蛋白A柱純化出含高滴度抗—HAV IgG的人總IgG，以分子篩色譜純化出健康

2、人IgM抗體。選擇1—乙基—3[3—二甲基氨基丙基]碳二亞胺作為化學交聯(lián)劑將兩者交聯(lián)，得到的嵌合人—人IgG、IgM抗體既能和甲型肝炎病毒抗原(Hepatitis A Virus Antigen，HAV—Ag)特異性結合，又能與檢測體系中的抗μ鏈抗體特異結合。根據(jù)嵌合抗體的抗—HAVIgM活性來確定交聯(lián)反應的最佳反應條件，并對該嵌合抗體的干擾反應、交叉反應進行研究，同時以衛(wèi)生部臨床檢驗中心的抗—HAV IgM質控品作為對照研究該嵌合抗體

3、的適用性。 二、嵌合抗體作為質控物穩(wěn)定性及通用性研究 對本嵌合抗體的穩(wěn)定性進行研究，對不同稀釋保存液(包括BSA、組氨酸、山梨醇等添加劑組分及濃度)進行篩選，尋找使嵌合抗體穩(wěn)定保存的條件。穩(wěn)定性的保存條件：將上述1:1000倍稀釋后及未稀釋的嵌合抗體質控物置于4℃、—20℃、室溫、37℃、及—70℃/室溫反復凍融3次的條件下保存不同時間觀察其穩(wěn)定性。分別采用萬泰、新創(chuàng)及雅培商品試劑盒對本嵌合抗體進行檢測，考察其通用性。

4、 結果： 一、嵌合抗體的構建 本研究的最佳交聯(lián)反應條件為IgG與IgM質量比5：1(5mg IgG/1mg IgM)，每mg IgM反應體系中加入10 mg交聯(lián)劑，室溫反應6～18 h。交聯(lián)后得到了穩(wěn)定的嵌合抗體產(chǎn)物，且抗—HAV IgM檢測滴度達到1：20000。將該產(chǎn)物1:1000倍稀釋后，檢測值仍與衛(wèi)生部臨床檢驗中心發(fā)放的抗—HAV IgM質控品相當，能夠作為抗—HAV IgM檢測的陽性質控。干擾實驗結果表明

5、，作為反應物的IgG、IgM及交聯(lián)劑不影響嵌合抗體的陽性檢測結果，且該嵌合抗體在抗—HBc IgM、抗—HEV IgM檢測中不存在交叉反應。 二、嵌合抗體質控物穩(wěn)定性研究及通用性研究 本嵌合抗體在4℃條件下能穩(wěn)定保存至少3個月，經(jīng)過稀釋保存液即含1％BSA、10 mmol/L組氨酸的PBS溶液1000倍稀釋后，于4℃及—20℃條件下可以穩(wěn)定保存至少4個月。本嵌合抗體采用以上3個廠家的商品試劑盒均能檢出陽性結果，具有一定的