水產(chǎn)品中氨基糖苷類藥物殘留檢測的液-質(zhì)聯(lián)用分析法研究.pdf

1、氨基糖苷類抗生素是一類含有兩個或多個氨基糖基團并通過糖苷與氨基環(huán)多醇鍵合而成的一類抗生素的總稱。由于環(huán)多醇的不同而分為多個類別，其中較為重要的是環(huán)多醇為鏈霉胍的鏈霉素和雙氫鏈霉素，環(huán)多醇為脫氧鏈霉胺的慶大霉素、卡那霉素和新霉素。氨基糖苷類藥物通過阻斷細菌核糖體合成，達到破壞細菌細胞膜的合成和殺菌的目的，被廣泛用于動物源性食品生產(chǎn)過程中的疾病預(yù)防和控制，由此產(chǎn)生的藥物殘留帶來了一系列食品安全問題，引起了人們的廣泛關(guān)注。為了保證食品安全，保

2、護人們的身體健康，對獸藥殘留的實驗室檢測水平要求越來越高，因此準(zhǔn)確檢測藥物殘留顯得尤其重要。 目前對氨基糖苷類獸藥殘留檢測的方法主要有微生物法、免疫分析法、儀器分析法，在儀器分析法中液相色譜法應(yīng)用較多。現(xiàn)有方法能檢測的樣品基質(zhì)多為蜂產(chǎn)品和豬肉，對其它基質(zhì)樣品研究的少；且大多只能檢測樣品中一種或幾種氨基糖苷類藥物殘留，缺乏復(fù)雜基質(zhì)條件下氨基糖苷類藥物殘留的有效檢測方法；檢測步驟復(fù)雜、檢測效率較低，因此很難在實際應(yīng)用中發(fā)揮作用。LC

3、—MS/MS法具有抗背景干擾和檢測能力強、靈敏、準(zhǔn)確、檢測信息豐富的優(yōu)點，對殘留物成分確證最為有效。本文采用LC—MS/MS法，建立了水產(chǎn)品中氨基糖苷類藥物殘留檢測方法，取得了如下的主要研究成果： 1．獲得了水產(chǎn)品樣品中氨基糖苷類藥物的最佳提取條件 在水產(chǎn)品樣品提取中，考察了高氯酸、三氯乙酸、鎢酸鈉等不同蛋白質(zhì)沉淀劑的提取效果；同時比較了不同濃度三氯乙酸的提取效率，發(fā)現(xiàn)5％三氯乙酸的提取效果最好；在選擇提取方式時，主要考

4、察了超聲波破碎、機械勻漿提取對提取效率的影響。 2．獲得了提取液的最佳凈化條件 比較了不同固相萃取柱(Sep—Pak C18、HR—xSPE、Oasis MCX和Oasis SCX等)的凈化效果，通過添加七氟丁酸作離子對試劑，改變提取溶液pH值，得到10種氨基糖苷類藥物在固相萃取柱上的保留條件，從而實現(xiàn)目標(biāo)物與雜質(zhì)的分離。凈化條件為：HR—xSPE柱，活化時加入七氟丁酸，調(diào)節(jié)提后取溶液pH至4～5，洗脫溶劑為甲醇和氨水甲

5、醇。 3．獲得了氨基糖苷類藥物的檢測條件 試驗了不同的色譜柱、流動相的組成和柱溫等色譜參數(shù)和質(zhì)譜參數(shù)，得到檢測條件為：乙腈-100 mmol/L七氟丁酸(80：20，v/v/)作流動相梯度洗脫，流速：0.2mL/min，進樣量：10μL，分析物在電噴霧正離子條件下，采用多反應(yīng)離子監(jiān)測模式，用外標(biāo)法定量。 4．建立了水產(chǎn)品中氨基糖苷類藥物殘留的檢測方法 確立了標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性范圍、檢測限、回收率和精密度等方法

6、學(xué)參數(shù)。標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍：50ng/mL～1000ng/mL，對10種氨基糖苷類藥物的檢出限為20ng/g～50ng/g。以50、100和200ng/g的濃度水平添加時，魚肌肉組織中10種藥物的回收率為66.5％～108.0％，RSD為2.40％～18.8％；蝦組織中10種藥物的添加回收率為74.9％～99.1％，RSD為3.1％～12.4％。檢測10種氨基糖苷藥物，日內(nèi)重復(fù)實驗的RSD為1.2％～8.4％，日間重復(fù)實驗的RSD為2.