HCMV感染血管內(nèi)皮細胞和平滑肌細胞的生物學效應研究.pdf

1、背景和目的:動脈粥樣硬化(AS)嚴重威脅人類健康,雖然大量的流行病學資料顯示傳統(tǒng)的危險因子是動脈粥樣硬化的主要危險因素,但動脈粥樣硬化仍然有著許多潛在的病因亟待探索.低密度脂蛋白受體相關蛋白(LRP)是在AS病變部位SMC上表達的唯一脂蛋白受體,LRP結構或功能的紊亂可能是引發(fā)AS形成和發(fā)展的一個重要因素,LRP作為AS疾病的一個危險因子,其致病的主要原因可能是促發(fā)泡沫細胞的形成,HCMV感染后SMC的LRP表達及脂質(zhì)代謝方面的變化及其

2、機理是該課題重點研究內(nèi)容.如果調(diào)節(jié)和控制病毒對宿主細胞的作用是病毒性疾病治療和預防的一個重要方面.綜上所述,我們設想:1、HCMV與ECs:①HCMV感染ECs可能導致細胞形態(tài)改變,引起通透性改變和內(nèi)皮完整性的變化;②感染后的細胞功能可能發(fā)生改變,進一步導致血小板及單核細胞在內(nèi)皮的粘附;③感染性病毒顆粒的釋放可能成為侵襲SMC的病毒來源.2、HCMV與SMC:①HCMV感染SMC可能導致感染細胞的增殖;②HCMV所誘導的轉化作用可能會導

3、致SMC表面LRP活性的異常表達,進而引起宿主細胞脂質(zhì)代謝的改變;③HCMV病毒感染可能對SMC粘附分子表達產(chǎn)生影響;④外源性更昔洛韋、HCMV的ASON對IE基因和L基因,SMC的LRP表達、TG和TC的代謝產(chǎn)生影響.基于以上設想,擬主要觀測:①感染細胞形態(tài)、脂質(zhì)代謝變化,主要包括IE基因、L基因變化、粘附分子改變.②感染細胞表面LRP變化及細胞脂質(zhì)代謝、病毒核酸代謝、病毒抗原表達;③更昔洛韋、HCMV的ASON作用后平滑肌細胞IE基

4、因及LRP表達等方面的變化;④從分子水平調(diào)查CHD患者HCMV的感染狀況.探討以上內(nèi)容的變化特點和規(guī)律,在細胞和分子水平上闡述HCMV致血管壁細胞的生物學效應,為HCMV致AS發(fā)病機理的研究及其治療和預防提供一定的理論基礎.方法和技術路線:1.采用HCMV AD169株感染體外培養(yǎng)的血管內(nèi)皮細胞和平滑肌細胞,建立HCMV的細胞感染模型.2.對于血管內(nèi)皮細胞的感染模型,主要運用熒光顯微鏡觀測病毒抗原的表達,熒光定量PCR方法動態(tài)觀測病毒D

5、NA代謝變化,ELISA和細胞ELISA方法檢測感染細胞粘附分子(sICAM-1、VCAM-1)的變化,流式細胞儀動態(tài)測定HEC感染后的凋亡狀況,化學法測定ECs感染后的ATP酶活性的改變.3.對于平滑肌細胞體外感染模型,實驗分四組(對照組;感染組;更昔洛韋作用組;反義寡核苷酸作用組),主要應用RT-PCR方法和細胞ELISA觀測不同因素作用后LRP-mRNA和蛋白的表達,微量化學分析法測定細胞內(nèi)脂質(zhì)的改變,應用PCR方法檢測HCMV的

6、IE基因、L基因的變化規(guī)律,常規(guī)法觀測SMC增殖指數(shù)的變化.4.為驗證HCMV感染對冠狀動脈粥樣硬化的效應,運用ELISA和捕捉ELISA法、放射免疫分析技術、定量PCR技術檢測了經(jīng)冠脈造影確診的119例CHD患者血清HCMV-IgM、IgG抗體、HCMV-DNA、血清ET、TNF和hs-CRP的水平.5.各項指標以均數(shù)±標準差(x±S)表示,兩組均值間比較用t檢驗,各組間率的比較采用X<'2>檢驗,統(tǒng)計學處理均在計算機上用origan