牙齦卟啉單胞菌對(duì)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng).pdf

1、近年來，牙周病與心血管疾病的關(guān)系逐漸受到人們的重視，流行病學(xué)研究表明牙周病與心血管疾病密切相關(guān)，牙周病可能是動(dòng)脈粥樣硬化的危險(xiǎn)因素之一。動(dòng)脈粥樣硬化是一種波及大、中型血管的疾病，現(xiàn)在普遍認(rèn)為免疫反應(yīng)和炎癥反應(yīng)在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展中起一定作用。近期研究表明，冠心病的發(fā)生發(fā)展機(jī)制與感染引發(fā)的免疫反應(yīng)密切相關(guān)。牙周病是人類最常見的感染性疾病之一，其導(dǎo)致的局部和全身免疫反應(yīng)目前已被認(rèn)為是發(fā)病的主要病理機(jī)制。大量的流行病學(xué)調(diào)查資料表明，冠心

2、病和外周動(dòng)脈粥樣硬化的患者口腔衛(wèi)生不良率和牙周炎患病率均較高?；A(chǔ)研究已經(jīng)顯示，脂多糖-單核細(xì)胞-細(xì)胞因子（前列腺素E2、血栓素A2、白細(xì)胞介素-1β、腫瘤壞死因子α）之間的相互作用可能是牙周炎和動(dòng)脈粥樣硬化相互聯(lián)系的生物學(xué)基礎(chǔ)。因此，本研究旨在從細(xì)胞生物學(xué)的角度入手，通過培養(yǎng)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞（humanumbilicalveinendothelialcells,HUVECs），與牙齦卟啉單胞菌（Porphysomanasgingi

3、valis,P.g）共同孵育，觀察牙齦卟啉單胞菌對(duì)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞生物學(xué)活性的影響和分析關(guān)鍵細(xì)胞因子含量的變化，從而為牙周炎與冠心病之間的相關(guān)發(fā)病機(jī)制提供佐證。
　　方法：經(jīng)消化法培養(yǎng)獲得人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞，厭氧培養(yǎng)獲得牙齦卟啉單胞菌，通過MTT法檢測(cè)牙齦卟啉單胞菌對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的影響，凋亡試劑盒檢測(cè)牙齦卟啉單胞菌對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響，掃描電鏡和透射電鏡觀察牙齦卟啉單胞菌對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)的影響。ELISA法檢測(cè)牙齦

4、卟啉單胞菌對(duì)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌IL-18和CRP的影響。
　　結(jié)果：1．P.g和大腸桿菌LPS均能抑制HUVECs的增殖（P＜0.02），且P.g對(duì)HUVECs的抑制作用較大腸桿菌LPS更為明顯（P＜0.05）。P.g感染HUVECs3h后即可見部分細(xì)胞黏附性下降，極少部分細(xì)胞開始脫落固縮。隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，這種作用更加明顯，24h后凋亡檢測(cè)顯示，正常細(xì)胞組單個(gè)高倍視野下見一個(gè)或是無(wú)細(xì)胞凋亡，平均凋亡率＜2％。而P.g感染組可

5、見部分細(xì)胞凋亡，計(jì)算三個(gè)高倍視野，細(xì)胞平均凋亡率為20％左右。通過掃描電鏡和透射電鏡對(duì)P.g侵入HUVECs的觀察顯示，P.g的主要菌毛在侵襲和黏附內(nèi)皮細(xì)胞過程中起重要作用，P.g通過胞吞途徑實(shí)現(xiàn)對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的侵入。
　　2．HUVECs自身表達(dá)少量的IL-18和C反應(yīng)蛋白；P.g劑量依賴性增強(qiáng)HUVECs產(chǎn)生IL-18蛋白和C反應(yīng)蛋白的水平，IL-18蛋白水平和C反應(yīng)蛋白的水平在P.g刺激后的4h開始增加，在8h、12h和24h繼

6、續(xù)增加，且相同濃度作用下HUVECs分泌CRP的量明顯高于其分泌IL-18的量。P.gATCC33277、P.g381均可以誘導(dǎo)HUVECs分泌IL-18、CRP，其分泌的量明顯高于空白對(duì)照組(P＜0.05)，但P.gATCC33277、P.g381之間誘導(dǎo)分泌的量無(wú)明顯差別。
　　結(jié)論：P.g能明顯抑制HUVECs的增殖，增加HUVECs的凋亡；P.g可能通過胞吞途徑實(shí)現(xiàn)對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的侵入。P.g劑量和時(shí)間依賴性增強(qiáng)HUVECs表