CD133分子對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)行為的作用研究.pdf

1、腫瘤干細(xì)胞是指在腫瘤中組織少量存在的一群具有自我更新和分化潛能的腫瘤細(xì)胞。先后急性髓性白血病、乳腺癌、腦癌、腸癌、黑色素瘤等多種腫瘤中發(fā)現(xiàn)了腫瘤干細(xì)胞，該細(xì)胞亞群是腫瘤發(fā)生、復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的根源，為腫瘤的診斷和治療提供了新靶點(diǎn)。
　　腦膠質(zhì)瘤是顱內(nèi)常見(jiàn)的腫瘤類型，惡性程度高、術(shù)后易復(fù)發(fā)、病人預(yù)后差。2003年，Singh等首次發(fā)現(xiàn)了腦瘤干細(xì)胞，并將CD133分子作為腦瘤干細(xì)胞特異性的標(biāo)志分子。此后，諸多研究表明CD133+腦膠質(zhì)瘤干細(xì)

2、胞與腫瘤的分級(jí)預(yù)后、血管形成、高度耐藥性、放/化療耐受等許多惡性行為有關(guān)，但CD133分子具體的生物學(xué)功能和作用機(jī)制還有待深入研究。
　　鑒此，本研究通過(guò)基因轉(zhuǎn)染的方法構(gòu)建了一株穩(wěn)定表達(dá)CD133分子的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株，并對(duì)其生長(zhǎng)、細(xì)胞周期、神經(jīng)球形成、干細(xì)胞相關(guān)基因表達(dá)、裸鼠體內(nèi)致瘤性等生物學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了分析。
　　第一部分人CD133基因轉(zhuǎn)染腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株的建立
　　【目的】構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)人CD133分子的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株

3、。
　　【方法】構(gòu)建含人CD133全長(zhǎng)cDNA的逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)載體，采用脂質(zhì)體法將重組質(zhì)粒及其輔助載體導(dǎo)入293T細(xì)胞包裝逆轉(zhuǎn)錄病毒，進(jìn)而感染腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U251，zeocin加壓篩選，流式細(xì)胞術(shù)、細(xì)胞免疫化學(xué)及Real Time PCR檢測(cè)CD133分子的表達(dá)；同時(shí)構(gòu)建pEGZ-Term空載體轉(zhuǎn)染的對(duì)照細(xì)胞株U251-mock。
　　【結(jié)果】成功構(gòu)建高表達(dá)CD133分子的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U251-CD133。
　　【

4、結(jié)論】成功構(gòu)建了高表達(dá)CD133分子的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株，為CD133分子的生物學(xué)作用研究提供了良好工具。
　　第二部分 CD133分子轉(zhuǎn)染對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)行為的作用研究
　　【目的】研究CD133分子對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖、遷移、細(xì)胞周期、干細(xì)胞相關(guān)基因的表達(dá)、體內(nèi)致瘤性等生物學(xué)特性的影響。
　　【方法】以第一部分構(gòu)建的U251-CD133及U251-mock細(xì)胞株為研究模型，利用細(xì)胞計(jì)數(shù)、神經(jīng)球形成實(shí)驗(yàn)及PI染色法檢

5、測(cè)CD133分子對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞在體外增殖、神經(jīng)球形成能力及細(xì)胞周期的影響；Real Time PCR檢測(cè)CD133基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞株干細(xì)胞相關(guān)基因的表達(dá)；裸鼠皮下成瘤法檢測(cè)CD133分子對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的體內(nèi)致瘤性的影響。
　　【結(jié)果】(1)在有血清培養(yǎng)條件下，人CD133分子對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U251的細(xì)胞增殖并無(wú)影響；但在無(wú)血清神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)條件下可以促進(jìn)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞神經(jīng)球的形成；(2)與對(duì)照組相比，CD133基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞株S期細(xì)胞比