人腦膠質(zhì)瘤組織中CD133的表達(dá)及其臨床意義相關(guān)研究.pdf

1、人腦膠質(zhì)瘤是顱內(nèi)最常見的原發(fā)性腫瘤，目前針對(duì)膠質(zhì)瘤患者的治療，雖然給予積極的手術(shù)、放、化療等治療措施，但患者預(yù)后仍較差，且復(fù)發(fā)率極高。研究表明，WHO分級(jí)3級(jí)的膠質(zhì)瘤患者平均生存期約3-5年，多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（WHO分級(jí)4級(jí)）患者平均生存期尚不足1年，因此，在手術(shù)切除腫瘤同時(shí)尋找新的輔助療法才能使膠質(zhì)瘤治療產(chǎn)生本質(zhì)進(jìn)步。近年來，人們提出了膠質(zhì)瘤干細(xì)胞概念，即腫瘤組織中存在的，極為少量的干細(xì)胞樣細(xì)胞，它們具有不斷分裂、自我更新，多向分化

2、能力，在腫瘤細(xì)胞的形成和生長(zhǎng)中起到重要作用，而區(qū)別于其他大多數(shù)腫瘤細(xì)胞的分化、凋亡過程。
　　Singh等研究者于2003年應(yīng)用無血清培養(yǎng)基從膠質(zhì)瘤細(xì)胞中分離出具有神經(jīng)干細(xì)胞性質(zhì)的CD133陽性細(xì)胞——腦腫瘤干細(xì)胞(brain tumorstem cell，BTSC)，發(fā)現(xiàn)這類細(xì)胞具有明顯的自我更新、分化和增殖能力，在體外誘導(dǎo)培養(yǎng)時(shí)可分化形成腫瘤細(xì)胞，與從腫瘤患者中分離的腫瘤細(xì)胞表型相似。目前腦腫瘤干細(xì)胞理論認(rèn)為腫瘤的異質(zhì)性決定腫

3、瘤內(nèi)存在有少量具有干細(xì)胞屬性的腫瘤細(xì)胞，通過對(duì)稱性分裂形成子代干細(xì)胞，不對(duì)稱性分裂形成子代干細(xì)胞和腫瘤前體細(xì)胞，隨著干細(xì)胞池的逐漸擴(kuò)大而形成腦腫瘤，并表達(dá)腦腫瘤干細(xì)胞特征性標(biāo)志物CD133，因此理論上神經(jīng)上皮腫瘤中CD133陽性細(xì)胞率代表著腦腫瘤干細(xì)胞在異質(zhì)性腫瘤組織內(nèi)部的含量。CD133可以作為膠質(zhì)瘤干細(xì)胞特異性標(biāo)記物之一，引起越來越多研究者的注意。
　　目的：本研究擬通過免疫組織化學(xué)染色方法觀察CD133在不同級(jí)別人腦膠質(zhì)瘤組

4、織中表達(dá)情況，為腦膠質(zhì)瘤的診斷、病理級(jí)別評(píng)估提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　1.收集標(biāo)本:標(biāo)本來源于2010～2013年河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院神經(jīng)外科術(shù)中切除、經(jīng)兩名病理診斷醫(yī)師確診的52位腦膠質(zhì)瘤患者，其中男28例，女24例;年齡18～71歲，平均(42.5±8.1)歲。腫瘤組織按WHO2007年中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤分級(jí)標(biāo)準(zhǔn):第一組，Ⅰ～Ⅱ級(jí)（低級(jí)別）膠質(zhì)瘤組19例，第二組，Ⅲ～Ⅳ級(jí)（高級(jí)別）膠質(zhì)瘤33例?；颊呔鶠槌醮问中g(shù)且術(shù)前

5、均未接受放療、化療、免疫治療及生物治療，另外，取11例腦外傷患者行內(nèi)減壓腦組織標(biāo)本作為正常對(duì)照。
　　2.用HE染色進(jìn)行膠質(zhì)瘤病理級(jí)別分級(jí)，術(shù)中膠質(zhì)瘤組織進(jìn)行石蠟包埋、常規(guī)HE染色，光鏡下觀察。
　　3.應(yīng)用零下70度液氮速凍術(shù)中所獲新鮮膠質(zhì)瘤組織，提取膠質(zhì)瘤組織總蛋白，采用Western Blot方法檢測(cè)高級(jí)別腦膠質(zhì)瘤、低級(jí)別腦膠質(zhì)瘤及正常腦組織標(biāo)本中CD133蛋白表達(dá)。
　　4.免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)人腦膠質(zhì)瘤中CD

6、133蛋白的表達(dá)，取一部分術(shù)中標(biāo)本用4％多聚甲醛進(jìn)行浸泡固定，留用行CD133免疫組織化學(xué)染色，根據(jù)膠質(zhì)瘤細(xì)胞CD133染色程度進(jìn)行分級(jí)，（+++），＞60％的腫瘤細(xì)胞有陽性著色;(++)，30％-60％的腫瘤細(xì)胞陽性著色;(+)，＜30％的腫瘤細(xì)胞陽性著色;（-），沒有陽性細(xì)胞。
　　5.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:通過數(shù)碼醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)Motic Med6.0對(duì)結(jié)果進(jìn)行測(cè)定，Image J分析軟件半定量分析Western Blot結(jié)果，結(jié)果

7、采用單因素方差分析;卡方檢驗(yàn)分析比較CD133免疫組織化學(xué)染色結(jié)果，統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)采用SPSS13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，以P＜0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1.在52例膠質(zhì)瘤組織中，HE顯色結(jié)果證實(shí)所選的膠質(zhì)瘤樣品分級(jí)及類型與患者病理診斷相一致。
　　2.Western Blot結(jié)果顯示，高級(jí)別腦膠質(zhì)瘤組織中CD133含量高于低級(jí)別腦膠質(zhì)瘤，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，而在正常腦組織中不表達(dá)。
　　3.