骨髓干細胞移植對急性肺損傷生物學作用的基礎研究.pdf

1、本文研究了骨髓間充質干細胞移植對大鼠急性肺損傷模型的生物學影響和在損傷修復中的作用及可能的機制，探討急性肺損傷細胞治療的可能性。 方法：首先以密度梯度離心法分離、體外培養(yǎng)并擴增成體大鼠骨髓MSCs，采用免疫細胞化學及流式細胞術檢測MSCs抗原表達，同時檢測MSCs向骨細胞及脂肪細胞的分化能力，并用BrdU或DAPI標記MSCs；采用細菌內毒素攻擊法建立大鼠急性肺損傷模型，進行干細胞移植治療。將72只健康雄性Wistar大鼠隨機分

2、為3組：(1)正常對照組(C，n=24)，經尾靜脈注入0.5ml生理鹽水；(2)單純肺損傷組(L，n=24)：經尾靜脈注射LPS(5mg/kg)，然后立即經另一條尾靜脈注入0.5ml生理鹽水；(3)急性肺損傷干細胞移植組(LM，n=24)：經尾靜脈注入LPS(5mg/kg)，然后立即經另一條尾靜脈注入培養(yǎng)并標記的大鼠MSCs(1.0×106溶于0.5ml生理鹽水)。各組在實驗后2h、4h、6h麻醉狀態(tài)下活殺動物，每個時間點各8只。經腹主

3、動脈取血、離心，分離血漿，采用酶聯(lián)免疫吸附法測定血漿中TNF-a、IL-6的含量；收集肺組織測定濕/干重比值、比色法測肺勻漿髓過氧化酶(MPO)活性、制作組織切片以HE和免疫組化法行病理學檢查。 結果：1.骨髓MSCs的分離、培養(yǎng)及抗原表達與多向分化能力：密度梯度離心法能成功分離純化大鼠骨髓MSCs。免疫細胞化學示大鼠MSCs表達CD29和CD44，不表達造血干細胞標志CD34；BrdU標記法陽性率約為74％，DAPI標記法陽性

4、率可達90％以上；流式細胞儀結果顯示，隨傳代次數的增多，MSCs增殖能力減弱；BrdU標記和未標記細胞增殖周期無明顯差異。體外誘導實驗顯示，MSCs可向脂肪細胞、成骨細胞等多向分化。2.LPS致傷作用及MSCs移植對ALI的影響：組織切片HE染色顯示，LM組肺組織炎癥改變較L組減輕。免疫組織化學染色顯示MSCs移植后在肺內歸巢，并有細胞形態(tài)的變化，但未檢測到細胞分子表型的改變。與C組相比，LM組、L組在致傷后肺W/D值、組織MPO活性、