深綠木霉REMI突變菌株H6對(duì)黃瓜枯萎病的生物防治.pdf

1、本研究選用深綠木霉菌作為出發(fā)菌株，首先通過REMI技術(shù)(限制性內(nèi)切酶介導(dǎo)基因整合技術(shù))來構(gòu)建深綠木霉菌T23菌株的突變體庫(kù)，以250μg/mL，的潮霉素作為篩選標(biāo)記，共獲得了200個(gè)抗潮霉素穩(wěn)定的轉(zhuǎn)化子。對(duì)所獲得的轉(zhuǎn)化子進(jìn)行抗性篩選和生物防治實(shí)驗(yàn)，最終確定H6菌株為實(shí)驗(yàn)工程菌株，并系統(tǒng)探討了H6菌株的液體和固體發(fā)酵條件，主要結(jié)果如下: 1.固體發(fā)酵條件的種子液配方:馬鈴薯200g/L，葡萄糖20g/L，MgS04-7H2O 0.

2、5g/L，F(xiàn)eS04-7H2O 0.0075g/L，MnSO4 0.0025g/L，ZnSO4 0.002g/L，KH2PO4 3.83g/L，NaNO 31.42g/L，(NH4)2SO 41.1g/L，CaCl2 1g/L。固體發(fā)酵配料及配置比例:麥麩:腐殖酸鈉:玉米渣:稻殼:稻草粉=15:0.75:3:10:10，固料比水為1:0.5(w/v)。固體發(fā)酵條件:培養(yǎng)料鋪墊厚度為7cm，種子液接種量為20％，發(fā)酵溫度為恒溫28℃，通氣

3、量為0.5～0.8Will，每12h發(fā)酵罐內(nèi)翻動(dòng)培養(yǎng)料1次即可，固體發(fā)酵產(chǎn)物中分生孢子含量最高可達(dá)1.64×1011個(gè)/g，固體發(fā)酵產(chǎn)物經(jīng)40℃烘箱干燥后可直接使用。 2.液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方:馬鈴薯200g/L，葡萄糖20g/L，KH2PO41g/L，MgSO4"7H2O0.5g/L，F(xiàn)eS04·7H2O 0.01g/L。液體發(fā)酵條件:培養(yǎng)基pH調(diào)至4，孢懸液的接種量為0.2％(v/v)，瓶裝量為100mL/250mL三角瓶，2

4、8℃條件下發(fā)酵3d，液體發(fā)酵產(chǎn)物中厚垣孢子產(chǎn)量可達(dá)1.1×100個(gè)/g，高于目前國(guó)內(nèi)外報(bào)道的生物量。 3.生物農(nóng)藥的配置方法:液體發(fā)酵產(chǎn)物按重量每20mL，與70g載體吸附(吸附劑載體為5:1的硅藻土和輕質(zhì)碳酸鈣混劑)，再加入礦質(zhì)營(yíng)養(yǎng)元素10g(KH2PO47g、MgSO41g、CaSO41g、(NH4)6MO7O24·4H2O0.5g、H38O30.2g、MnSO40.1g、FeSO40.1g、ZnSO40.1g)，混合均勻，

5、干燥好制成顆粒劑(生物農(nóng)藥)。 4.生物農(nóng)藥與H6菌株固體發(fā)酵產(chǎn)物對(duì)黃瓜枯萎病的防治效果分別為95％～100％和95.8％左右(使用劑量為8％)，可見生物農(nóng)藥的生防效果更為突出，且厚垣孢子制劑的貨架期長(zhǎng)，可更好的滿足生產(chǎn)和推廣的需要。 5.通過H6突變菌株生防菌劑的盆栽及田間的菌劑施用劑量的篩選，得知最佳的使用比例為8％(與土壤質(zhì)量比)。 與此同時(shí)，本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)黃瓜苗期一定時(shí)間內(nèi)株高和鮮重的測(cè)量，以及對(duì)其根際土壤