骨折大鼠血清對間充質干細胞生物學行為的影響.pdf

1、目的：①觀察大鼠骨折后不同時間點外周血間充質干細胞（PBMSCs）的數(shù)量變化，并與同期培養(yǎng)的骨髓間充質干細胞(BMSCs)比較異同。②觀察大鼠骨折后外周血對間充質干細胞（MSCs）趨化和成骨的影響，并分析可能原因及其相關基因的變化。③觀察BMP-2 對大鼠BMSCs 遷移、趨化的影響，并研究此過程中的信號通路。
　　 方法：⑴建立大鼠骨折模型，根據(jù)骨折后1、3、7d 時間點分組，抽取外周血，獲得單核細胞，貼壁分離培養(yǎng)MSCs，檢

2、測各組成纖維細胞集落形成單位（CFU-Fs）數(shù)和集落形成率（CFE），同期分離培養(yǎng)BMSCs。⑵MTT 法檢測不同來源的MSCs 增殖特點，流式細胞儀檢測MSCs 表面抗原表達，成骨和成脂分化檢測其多項分化潛能。⑶分離各組外周血血清，Transwell 裝置觀察血清對BMSCs 遷移的作用，RT-PCR 法研究骨折組血清對間充質干細胞ALP、OC 和OPNmRNA 表達的影響，ELISA 法檢測各組血清中BMP-2 和SDF-1 的含量

3、。⑷BMP-2 預刺激間充質干細胞，Western blot、ELISA 檢測CXCR4 的表達及SDF-1 的分泌。⑸添加LY294002、LHMO、AMD3100 阻斷MSCs 信號通路后，Transwell裝置檢測BMP-2 對MSCs 趨化的作用。
　　 結果：①骨折后PBMSCs 含量升高，且具有間質干細胞的特性，表達抗原CD44、CD90、CD29，不表達造血細胞系標志CD34、CD45，能夠向成骨、成脂分化。②骨折

4、血清顯著促進MSCs 遷移和成骨分化，骨折組血清BMP-2 含量較對照組有顯著差異，且具有時序性。③BMP-2 處理的間充質干細胞SDF-1 分泌增加，CXCR4 表達升高，阻斷劑LHMO、AMD3100 可以明顯降低MSCs 的遷移能力，LY294002 無此作用。
　　 結論：⑴骨折后大鼠PBMSCs 動員增加，并呈時序性變化。該細胞具有間質干細胞的特性。⑵骨折后大鼠外周血含有多種因子，在促進MSCs 趨化和分化中發(fā)揮重要作