間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)肝腫瘤細(xì)胞力生物學(xué)行為的影響及相關(guān)機(jī)理研究.pdf

1、 間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)肝腫瘤細(xì)胞 力生物學(xué)行為的影響及相關(guān)機(jī)理研究 重慶大學(xué)碩士學(xué)位論文 （學(xué)術(shù)學(xué)位） 學(xué)生姓名：李曉明 指導(dǎo)教師：宋關(guān)斌 教 授 羅 慶 博 士 專 業(yè)：生物學(xué) 學(xué)科門類：理 學(xué) 重慶大學(xué)生物工程學(xué)院 二 O 一四年四月 重慶大學(xué)碩士學(xué)位論文 中文摘要 I 摘 要 間充質(zhì)干細(xì)胞（Mesenchymal stem cells，MSCs）是一種具有自我更新和多向分化潛能的多能干細(xì)胞，

2、在特定誘導(dǎo)條件下能分化為成骨、軟骨、脂肪、肌肉等多種細(xì)胞。 MSCs 能被募集到炎癥環(huán)境和損傷組織位點(diǎn)， 通過(guò)抗炎、 旁分泌、 增殖、分化等多種作用在損傷組織的修復(fù)和再生中扮演重要角色，也是基因傳遞和細(xì)胞治療的重要工具。近年來(lái)，MSCs 已成為損傷組織修復(fù)、再生等組織工程研究中應(yīng)用最多的干細(xì)胞類型。 惡性腫瘤是細(xì)胞周期紊亂和細(xì)胞分裂、生長(zhǎng)失控引起的一種致命疾病，嚴(yán)重危害人類健康，其預(yù)防和治療目前仍然是臨床上面臨的巨大挑戰(zhàn)問(wèn)題。炎性微環(huán)境

3、是腫瘤組織的重要特征之一，正常組織發(fā)生惡變也可被視為一種特殊的組織損傷， 因此， 腫瘤組織也能募集 MSCs 參與腫瘤微環(huán)境的重塑, 并對(duì)腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為產(chǎn)生重要影響。 腫瘤細(xì)胞與 MSCs 之間的交互對(duì)話及相互影響成為近年來(lái)腫瘤領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)，但是，目前人們對(duì)于 MSCs 如何參與腫瘤微環(huán)境的重建以及 MSCs 如何影響腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為還缺乏系統(tǒng)認(rèn)識(shí)。因此，本文主要研究大鼠肝腫瘤細(xì)胞CBRH-7919 在 MSCs 微環(huán)境下增

4、殖、遷移等生物學(xué)行為的變化特征，并對(duì)其相關(guān)分子機(jī)理進(jìn)行深入探討。本研究工作的主要內(nèi)容和結(jié)果如下： 1. 細(xì)胞分離、培養(yǎng) 采用 Percoll 密度梯度離心與差時(shí)貼壁相結(jié)合的方法分離大鼠 MSCs， 用含 10% 胎牛血清的 L-DMEM 培養(yǎng)基培養(yǎng)、傳代。培養(yǎng)的細(xì)胞形態(tài)均一，呈現(xiàn)出 MSCs 特有的漩渦狀分布。通過(guò)流式細(xì)胞儀對(duì)分離培養(yǎng)細(xì)胞表面相關(guān)抗原的表達(dá)進(jìn)行分析，結(jié)果顯示：CD44 和 CD90 表面抗原呈陽(yáng)性表達(dá)，而 CD34 呈

5、陰性表達(dá)。 大鼠肝癌細(xì)胞株 CBRH-7919，用含 10% 胎牛血清的 L-DMEM 培養(yǎng)基按常規(guī)方法傳代培養(yǎng)。 2. MSCs 條件培養(yǎng)基對(duì) CBRH-7919 細(xì)胞遷移的影響 利用 transwell 方法考察了 MSCs 條件培養(yǎng)基 （Conditioned medium from MSCs, MSC-CM）對(duì) CBRH-7919 細(xì)胞遷移行為的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組比較，CBRH-7919 細(xì)胞在 MSC-CM 誘導(dǎo)條