PLGA緩釋微球制備條件對蛋白藥物活性及免疫原性的影響.pdf

1、多肽藥物的聚合物緩釋微球技術(shù)至今未能成功地應(yīng)用于蛋白藥物，主要是蛋白分子的高級結(jié)構(gòu)在制劑過程中脆弱易變、失活甚至導(dǎo)致有害的免疫反應(yīng)，實現(xiàn)蛋白藥物緩釋技術(shù)的突破有賴于通過改善微球制備條件避免蛋白變性及有害抗體的產(chǎn)生。本研究旨在以促紅細(xì)胞生成素（EPO）這樣一個具有代表性的蛋白藥物為例探討緩釋微球制備條件對蛋白免疫原性的影響，建立起兩者之間的相關(guān)關(guān)系。主要研究內(nèi)容如下： ⑴鑒于微球劑型制備過程中的水-油界面和水-氣界面是公認(rèn)的造成蛋

2、白聚集的原因，開發(fā)了諸如低溫冷凍相分離、親水“油”相中乳化（S-O-hO）等一系列避免水-油和水-氣界面的微球制備新方法，使蛋白在溫和條件下與多糖形成可以耐受有機(jī)溶劑的玻璃體顆粒，并在無水條件下乳化成為PLGA微球。為了驗證這些新方法能否如預(yù)期的那樣避免蛋白的聚集和免疫原性，運用SEC-HPLC、ELISA和促UT-7細(xì)胞生長及其抑制法，采用BALB/C小鼠模型，考察EPO在每一微球制備階段的聚集度、抗體的產(chǎn)生和生物活性的變化。實驗結(jié)果

3、證明，采用上述無水-油和水-氣界面的新方法制備的EPO-葡聚糖微粒大小均勻（粒徑1～5μm）、表面光滑、EPO的生物活性保留率較好（90％左右）。達(dá)到這一步驟的EPO沒有發(fā)生聚集。 ⑵將含有EPO的葡聚糖微粒通過親水“油相”為連續(xù)相的無水乳化法（S/O/hO）包封于PLGA微球并且與常規(guī)的“油包水-水包油”法（W/O/W）及“油包固體-油包油”法（S/O/O）進(jìn)行了比較。三種方法制備微球的包封率皆為75％左右。 就EPO的聚集而

4、言，隨SEC-HPLC進(jìn)樣濃度的變化，從W/O/W法和S/O/O法制備的微球中回收的EPO發(fā)生了不可逆聚集。而從S/O/hO法微球中回收的EPO發(fā)生了可逆聚集。關(guān)于免疫原性，注射了W/O/W和S/O/O法微球的小鼠體內(nèi)的抗EPO抗體量明顯多于注射了S/O/hO法微球的小鼠。細(xì)胞抑制實驗發(fā)現(xiàn)注射了W/O/W法微球的小鼠的血清比注射了其它兩種方法的微球的小鼠血清更多地抑制UT-7細(xì)胞的增殖。 ⑶SEC-HPLC、ELISA和UT-7