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文檔簡介
1、聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)被廣泛應用于藥物研發(fā)中,以提高藥物療效,并有多種PEG藥物投入臨床。但近期臨床試驗研究顯示某些PEG藥物出現(xiàn)的臨床副反應與PEG引起的免疫應答有關。目前對PEG化脂質體的PEG免疫反應研究得比較成熟,但對PEG化蛋白的PEG免疫反應比較少。研究PEG抗體的產生規(guī)律及對蛋白藥物代謝的影響對提高PEG蛋白藥物藥效具有重要意義。
本論文主要研究了PEG特異性抗體特性與所修飾載
2、體蛋白免疫原性的關系。
本論文以破傷風類毒TT、牛血清白蛋白BSA、雞卵清蛋白OVA作為模型蛋白,并通過氨基修飾得到BSA-TT和TT-TT兩種偶聯(lián)蛋白,以BSA-TT、TT、TT-TT、OVA作為載體蛋白。通過動物免疫試驗,四種載體蛋白免疫原性從高到底分別是TT-TT>TT>TT-BSA>OVA。
采用化學修飾法將分子量為5000的PEG偶聯(lián)到載體蛋白上,通過凝膠純化得到PEG-載體蛋白修飾產物。本論文設計了兩類不
3、同PEG修飾水平載體蛋白。PEG修飾程度較高的包括TT-PEG-1、OVA-PEG。PEG修飾水平較低的包括BSA-TT-PEG、TT-TT-PEG、TT-PEG-2。并對產物進行物理結構表征分析。
將5種PEG-載體蛋白產物免疫動物。ELISA結果表明PEG-載體蛋白能在Balb/c小鼠體內誘導產生抗PEG抗體,抗體類型主要為IgM和IgG1,第7、21、35天的PEG抗體滴度依次升高。PEG-載體蛋白能夠誘導產生PEG免疫
4、記憶。載體蛋白的免疫原性影響PEG免疫反應強度,在一定范圍內,載體蛋白免疫原性越強,誘導的PEG特異性抗體數(shù)量越多。載體蛋白免疫原性過強,產生載體蛋白抑制現(xiàn)象,抑制PEG抗體的產生。PEG修飾水平也影響抗PEG抗體的滴度,在本次研究中,TT-PEG-2的PEG修飾度低于TT-PEG-1修飾度,但前者產生的抗PEG抗體水平高于后者。
競爭性ELISA顯示所產生的抗體為PEG特異性抗體。
PEG多克隆抗體的制備:以TT-
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