中國獻(xiàn)血者感染乙型肝炎病毒的分子流行病學(xué)研究.pdf

1、目的：
　　 研究我國HBsAg陽性獻(xiàn)血者感染的HBV病毒的基因型，亞型，血清型的分布及重要基因區(qū)域的突變特征；分析獻(xiàn)血者中HBV基因型，亞型，血清型與獻(xiàn)血者HBV血清學(xué)特征及病毒學(xué)特征的關(guān)系；研究HBsAg陰性HBVDNA檢測陽性獻(xiàn)血者感染的HBV病毒的基因型，亞型，血清型，分析其序列變異與HBsAg檢測陰性的可能關(guān)系。
　　 方法：
　　 1．從2008-2010年五家合作血液中心（血站）（新疆烏魯木齊血液中

2、心，洛陽血站，綿陽血站，云南昆明血液中心，柳州血液中心）HBsAg確證陽性獻(xiàn)血者標(biāo)本中隨機(jī)選取245份樣本進(jìn)行研究。
　　 2．S區(qū)擴(kuò)增測序結(jié)合多對型特異性引物巢式PCR法分析HBV基因型，通過S區(qū)序列推導(dǎo)HBV血清型，通過PreS/S區(qū)擴(kuò)增測序或全基因組擴(kuò)增測序分析HBV基因亞型。
　　 3．?dāng)U增PreC/BCP區(qū)，用ClustalX將PreC/BCP區(qū)測序結(jié)果和PreS/S區(qū)擴(kuò)增結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)株序列進(jìn)行比對，分析是否存在

3、PreS區(qū)和PreC/BCP區(qū)重要位點的突變；將測序結(jié)果翻譯成氨基酸后與標(biāo)準(zhǔn)株的氨基酸序列比對，分析是否存在S區(qū)和逆轉(zhuǎn)錄酶(rt)編碼區(qū)突變。
　　 4．用SPSS11.0統(tǒng)計軟件分析各地HBV血清型，基因型，基因亞型的分布，比較獻(xiàn)血者中HBV基因型和亞型分布與慢性乙型肝炎患者的區(qū)別，分析HBV血清型，基因型，基因亞型與人口特征，病毒學(xué)特征和血清學(xué)特征的關(guān)系，比較PreS/S區(qū)和PreC/BCP區(qū)變異的地理分布，人口特征分布，基

4、因型和亞型分布以及其與病毒學(xué)特征和血清學(xué)特征的關(guān)系。組間均數(shù)比較用獨立樣本t檢驗，率的比較用x2檢驗。
　　 5．?dāng)U增8份HBsAg陰性HBVDNA檢測陽性樣本的HBVPreS/S區(qū)和PreC/BCP區(qū)，分析其基因型、亞型和血清型，分析成功測序樣本的PreS區(qū)，S區(qū)和PreC/BCP區(qū)序列變異，分析其與HBsAg檢測陰性的關(guān)系。
　　 結(jié)果：
　　 1．烏魯木齊，洛陽，綿陽，昆明，柳州五地獻(xiàn)血者感染的HBV病毒的

5、主要基因型為B型和C型，B型流行率高于C型，未見E-H型；基因亞型依次為B2，C2，D1，A1;血清型依次為：adw，adr，ayw;在昆明獻(xiàn)血者中發(fā)現(xiàn)了B基因型的一種新亞型B9;五地獻(xiàn)血者感染的HBV中所有的A型和絕大多數(shù)B型為adw血清型，絕大多數(shù)C型為adr血清型。
　　 2．C型和C2亞型中的HBeAg陽性率分別顯著高于B型和B2亞型中的HBeAg陽性率。
　　 3.17％的HBsAg陽性獻(xiàn)血者樣本中存在主要疏水

6、區(qū)（majorhydrophilicregion，MHR）區(qū)突變，突變率低于其它國家報道的數(shù)據(jù)：獻(xiàn)血者感染的HBV病毒B基因型中MHR區(qū)的突變率高于C基因型；PreS區(qū)發(fā)生缺失的較少，且所有的D基因型樣本中均未發(fā)現(xiàn)D基因型特有的PreS區(qū)33個核苷酸的缺失；C型HBV中PreS區(qū)的突變率高于B型；五地獻(xiàn)血者中PreC/BCP區(qū)變異樣本的HBeAg陽性率顯著低于無該區(qū)突變樣本，C型中A1762T/G1764A朕合突變率高于B型，C2亞型高

7、于B2亞型，G1896A突變在B型中發(fā)生率高于C型和D型，A型中未發(fā)現(xiàn)該位點突變；五地獻(xiàn)血者中逆轉(zhuǎn)錄酶區(qū)突變位點主要與阿德福韋酯和拉米夫定耐藥有關(guān)，未發(fā)現(xiàn)最典型的YMDD拉米夫定突變。
　　 4．我國獻(xiàn)血者中HBsAg-/HBVDNA+的獻(xiàn)血者主要為隱匿性感染，小部分為窗口期感染；我國五地獻(xiàn)血者HBV隱匿性感染基因型主要為C型；HBV隱匿性感染可能與PreS區(qū)缺失或插入及MHR區(qū)氨基酸突變有關(guān)，HBeAg檢測陰性可能與PreC/

8、BCP區(qū)核苷酸突變有關(guān)。
　　 結(jié)論：
　　 1．S區(qū)擴(kuò)增測序結(jié)合多對型特異性引物巢式PCR法可以彌補(bǔ)單獨測序法分型不能鑒別混合基因型感染的缺陷，是HBV分型的較好方法。
　　 2．我國獻(xiàn)血者中感染的HBV病毒的主要基因型為B型和C型，B型高于C型，且具有流行率增高的趨勢，C型獻(xiàn)血者中HBV復(fù)制活性高于B型。
　　 3．獻(xiàn)血者感染的C型HBV在PreS區(qū)的突變率和A1762T/G1764A聯(lián)合突變率高于B