社區(qū)獲得性耐甲氧西林金黃色葡萄球菌臨床株遺傳學(xué)分析.pdf

1、目的：了解天津地區(qū)CA-MRSA臨床株的遺傳學(xué)特點，包括：檢測它們的耐藥表型、pvl基因的攜帶情況、SCCmec分型和MLST分型，為臨床診斷、預(yù)防和治療奠定基礎(chǔ)。 方法：(1)菌株收集與藥敏檢測：收集自2001年-2006年天津市四家三級甲等醫(yī)院金葡菌，其中15株金葡菌鼻腔攜帶株、125株金葡菌臨床株。依據(jù)CA-MRSA的概念將臨床株分成CA-MRSA和醫(yī)院獲得MRSA(HA-MRSA)。采用頭孢西丁紙片法，檢測MRSA。應(yīng)用

2、微量肉湯稀釋法檢測金葡菌對12中抗生素(包括：青霉素、苯唑西林、氨芐西林、環(huán)丙沙星、莫西沙星、頭孢唑啉、氯霉素、林可霉素、慶大霉素、頭孢曲松、萬古霉素和紅霉素)的MIC，分析其耐藥率。(2)金葡菌的pvl篩檢：應(yīng)用PCR方法，對全部金葡菌檢測pvl基因，并對PCR陽性的擴增產(chǎn)物進(jìn)行DNA序列分析。(3)金葡菌的SCCmec分型：參照Olivera等[26]的文獻(xiàn)報道合成引物。對CA-MRSA和HA-MRSA菌株應(yīng)用多重PCR方法，進(jìn)行S

3、CCmec分型。(4)金葡菌的MLST分析：擴增金葡菌的7個高度保守的看家基因，將擴增的序列片段進(jìn)行DNA序列分析。將分析結(jié)果提交國際數(shù)據(jù)庫網(wǎng)站http：//saureus.mlst.net進(jìn)行比對，最終獲得菌株ST分型。 結(jié)果：(1)MRSA的檢測：132例健康查體者鼻腔攜帶菌株中，篩檢出15例金葡菌攜帶株。金葡菌攜帶率為11.36％。其中，經(jīng)頭孢西丁紙片法檢測，15例攜帶株均為MSSA。在健康查體者中，沒有發(fā)現(xiàn)MRSA鼻腔攜

4、帶株。在125株金葡菌臨床株中MRSA54株，依據(jù)臨床資料分成12株CA-MRSA和42株HA-MRSA。應(yīng)用微量肉湯稀釋法，檢測對12種抗生素的MIC。其中，42株HA-MRSA除對萬古霉素敏感外，對其他11種抗生素均有較高的耐藥率，呈現(xiàn)多重耐藥的表型。而12株CA-MRSA除對β-內(nèi)酰胺類抗生素有很高的耐藥率外，對非β一內(nèi)酰胺類抗生素耐藥率較低。在15株攜帶株中，對青霉素耐藥率較高，對林可霉素和紅霉素也有中等程度的耐藥，對其他類抗生

5、素仍較敏感。(2)pvl基因PCR方法檢測：檢測125株臨床株和15株攜帶株的pvl基因。結(jié)果僅檢出pvl基因陽性菌株3株。pvl基因檢出率較低(3/140)。其中1株是從CA-MRSA中檢出，來自膿液，另外2株為MSSA，來自痰液。(3)SCCmec分型：用多重PCR方法，對12株CA-MRSA和42株HA-MRSA進(jìn)行SCCmec分型。在12株CA-MRSA中，除1株未定型外，其余11株均屬于SCCmecIV型；在42株HA-MRS

6、A中，以SCCmecIII型和IIIa型較多，分別為10株和16株，其次為SCCmecII型7株和SCCmecIIIb型6株，還有3株未定型。沒有發(fā)現(xiàn)SCCmecI型菌株。(4)MLST分型：對pvl基因陽性的CA-MRSA臨床株6Saul，進(jìn)行MLST分型。屬于ST88。該菌株來自膿液。 結(jié)論：1、健康者鼻腔攜帶菌株中，沒有發(fā)現(xiàn)CA-MRSA。在54株MRSA臨床株中，發(fā)現(xiàn)12株CA-MRSA。2、應(yīng)用臨床藥敏實驗、PCR法篩