MiR-650對胃癌細(xì)胞生物學(xué)影響及臨床意義.pdf

1、目的：胃癌是常見的惡性腫瘤之一，具有高發(fā)病率和高死亡率的特點(diǎn)，其5年生存率僅約30％-40%。目前胃癌發(fā)病的microRNA分子機(jī)制相關(guān)研究資料仍相當(dāng)有限，本文研究miR-650的表達(dá)與胃癌細(xì)胞增殖及凋亡等活動(dòng)之間的關(guān)系，探討了miR-650在胃癌發(fā)病機(jī)制中的調(diào)控作用及臨床意義。
　　 方法：采用RT-PCR檢測miR-650在胃癌組織及胃癌細(xì)胞中的表達(dá)水平，分析患者術(shù)后生存期與miR-650的表達(dá)水平等臨床因素間的內(nèi)在聯(lián)系，胃

2、癌細(xì)胞轉(zhuǎn)染成熟miR-650序列及其抑制劑-LNA寡核苷酸序列后，利用CCK-8試劑盒檢測細(xì)胞增殖情況，利用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡情況，通過LC-MS/MS系統(tǒng)定量分析篩選miR-650靶蛋白，采用Western Blot檢測miR-650靶蛋白RGS7的表達(dá)水平，裸鼠體內(nèi)研究評估m(xù)iR-650對胃癌細(xì)胞的生物學(xué)影響及其抑制劑的生物療效。
　　 結(jié)果：胃癌組織中miR-650表達(dá)水平存在明顯差異，患者術(shù)后生存期與miR-650的

3、表達(dá)水平密切相關(guān)，而與性別、腫瘤大小及腫瘤分期等臨床因素?zé)o明顯相關(guān)性。KATOⅢ、NUGC4及SGC-7901細(xì)胞高水平表達(dá)miR-650，而NCI-N87及MKN-45細(xì)胞僅微量表達(dá)miR-650，胃癌細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-650抑制劑后其增殖能力明顯下降，胃癌細(xì)胞凋亡水平明顯上升，同時(shí)發(fā)現(xiàn)RGS7蛋白是miR-650下游靶蛋白之一，靶蛋白RGS7表達(dá)水平與miR-650表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)，動(dòng)物體內(nèi)研究證實(shí)miR-650抑制劑可顯著抑制體內(nèi)腫