沉默ARTN基因?qū)ξ赴┘?xì)胞生物學(xué)特性的影響及ARTN與胃癌臨床病理特征之間的關(guān)系.pdf

1、目的:
　　研究沉默ARTN基因?qū)ξ赴┘?xì)胞增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)特性的作用，并探索其具體的機(jī)制，以及檢測(cè)胃癌組織中ARTN基因的表達(dá)，結(jié)合患者的臨床病理特征，確定ARTN基因與胃癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系。
　　方法:
　　使用Western Blot方法檢測(cè)胃癌細(xì)胞株SGC7901、MGC803、BGC823中ARTN基因的表達(dá)量，篩選出ARTN基因表達(dá)量最高的一株細(xì)胞，合成ARTN基因的干擾RNA（1808，1383，1

2、604三組），并利用基因轉(zhuǎn)染技術(shù)將三組干擾RNA分別轉(zhuǎn)染進(jìn)該胃癌細(xì)胞株，并用流式細(xì)胞儀觀察轉(zhuǎn)染效率，分別用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western Blot方法檢測(cè)基因干擾后的ARTN mRNA和蛋白的表達(dá)，選出沉默效率最高的那一組干擾RNA序列。沉默ARTN基因后，使用CCK-8的方法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性，采用Transwell小室方法分別檢測(cè)細(xì)胞遷移能力及侵襲能力，分別用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western Blot方法檢測(cè)細(xì)胞ARTN基因轉(zhuǎn)染

3、前后胃癌相關(guān)基因（P53、MMP-2、MMP-9、VEGF及BCL-2）在RNA水平和蛋白水平上的表達(dá)變化。另外用免疫組化和Western Blot分別檢測(cè)胃癌組織和正常胃粘膜的ARTN表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　MGC803中ARTN基因的表達(dá)量最高，干擾RNA序列1383組的沉默效率最高，轉(zhuǎn)染干擾序列后， ARTN基因在 RNA水平和蛋白水平的表達(dá)明顯下降，胃癌細(xì)胞MGC803在干擾ARTN基因后，細(xì)胞增殖能力、遷移能力和侵

4、襲能力均明顯下降，胃癌細(xì)胞中P53、MMP-2、MMP-9、VEGF及BCL-2在RNA水平和蛋白水平表達(dá)均下調(diào)。胃癌組織中的ARTN表達(dá)明顯高于正常胃粘膜。
　　結(jié)論:
　　ARTN基因可以增強(qiáng)胃癌細(xì)胞的增殖能力、遷移能力、侵襲能力，沉默ARTN基因可以下調(diào)胃癌增殖、轉(zhuǎn)移和侵襲相關(guān)基因的表達(dá)。ARTN與胃癌的分化程度、浸潤(rùn)深度、轉(zhuǎn)移及TNM分期有關(guān)，檢測(cè)ARTN的表達(dá)可以用來(lái)評(píng)估胃癌的臨床分期和指導(dǎo)其治療，對(duì)胃癌的發(fā)生發(fā)展