Lumican對胃腺癌腺細胞生物學特性影響及臨床意義.pdf

1、腫瘤微環(huán)境在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉移的各個階段中都起著至關重要的作用。其中細胞外基質蛋白是腫瘤微環(huán)境的重要組成部分，在腫瘤中常常發(fā)現基質蛋白有異常表達，其有助于腫瘤的進展和轉移，近年來研究顯示，Lumican的表達與許多惡性腫瘤的生長和轉移相關，但其在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的確切作用還不明確。因此我們探討了SLRP家族成員Lumican在胃腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用，從而進一步來理解Lumican與人類腫瘤的關系。應用RT-PCR、熒光定量PCR、免疫

2、印跡及免疫組織化學技術，在mRNA及蛋白水平檢測了Lumican在胃腺癌組織中的表達情況；應用慢病毒載體系統(tǒng)建立了Lumican過表達和特異性干擾細胞株，利用CCK-8實驗，平板克隆及裸鼠皮下成瘤實驗，分析了過表達或干擾Lumican表達對胃腺癌細胞生長的影響；Transwell及Matrigel膠穿實驗，分析了其對胃腺癌細胞遷移和侵襲的影響；流式細胞術檢測了Lumican表達上調或下調時胃腺癌細胞失巢凋亡率的改變，及Lumican上調

3、時胃腺癌細胞周期的改變；免疫印跡技術和細胞免疫熒光檢測了smad2、samd3及samd4的表達和活化。同時我們還構建了Lumcian重組蛋白pQE30-HLumican（分子量約40kDa）原核表達載體系統(tǒng)及V152-HLumican(分子量約55kDa)真核表達載體系統(tǒng)，利用CCK-8實驗，分析了兩種重組蛋白對胃腺癌細胞生長的影響；通過Transwell實驗，分析了兩種重組蛋白對胃腺癌細胞遷移能力的影響。流式細胞術檢測了V152-H

4、Lumican重組蛋白對胃腺癌細胞失巢凋亡的影響；軟瓊脂克隆形成實驗觀察了其對胃腺癌細胞非錨定生長的影響；裸鼠皮下成瘤實驗觀察了其對胃腺癌細胞體內生長的影響。
　　研究結果表明：胃腺癌組織中Lumican mRNA表達水平顯著高于癌旁正常粘膜組織，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。胃腺癌組織中Lumcian主要以其分子量為55kDa大小的糖蛋白形式存在，40kDa大小的核心蛋白（core protein）也有少量表達。免疫組化結果

5、顯示Lumican蛋白在胃腺癌組織的表達率顯著高于癌旁正常粘膜（91.67%比7.5%，P<0.01），其表達水平與胃腺癌患者的性別、年齡、腫瘤發(fā)生部位、Laren分型、是否為印戒細胞癌、脈管侵犯、癌栓無明顯相關，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；而與胃腺癌的浸潤深度（P<0.01）、有無淋巴結轉移（P<0.01）、有無遠處轉移（P<0.05）、TNM分期（P<0.01）、腫瘤大?。≒<0.05）和是否為早期胃腺癌（P<0.01）密切相

6、關。Kaplan-Meier生存統(tǒng)計結果顯示，Lumican表達強陽性、陽性、弱陽性和陰性患者的總體生存率分別為:48.17%、53.56%、68.48%和89.48%，隨著其表達增強，生存率逐漸減小，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。Lumican過表達能夠顯著增強胃腺癌細胞內核心蛋白的表達，而其糖基化蛋白增強不明顯；Lumican表達受干擾后，核心蛋白表達明顯下降，而其糖基化蛋白下降不明顯。Lumican過表達能夠抑制胃腺癌細胞在體

7、內外的生長，抑制胃腺癌細胞遷移和侵襲，增加失巢凋亡率，同時Lumican基因過表達能夠減緩細胞周期進展，一定程度引起G1期的阻滯。Lumican表達受干擾后，胃腺癌細胞生長得到促進，遷移、侵襲和抗失巢凋亡能力增強。Lumcian可能通過抑制smad4的表達，及smad2和smad3的活化來調控胃腺癌細胞增殖、遷移、侵襲和抗失巢凋亡。pQE30-HLumican重組蛋白可抑制胃腺癌細胞的增殖及遷移。V152-HLumican重組蛋白可促進