miR-150調(diào)控內(nèi)皮祖細(xì)胞分化等生物學(xué)功能的研究.pdf

1、目的：探討 miR-150在早期內(nèi)皮祖細(xì)胞及晚期內(nèi)皮祖細(xì)胞的表達(dá)含量；探討miR-150對EPCs的分化、血管形成等生物學(xué)作用；探討miR-150是否通過調(diào)控靶基因c-Myb來調(diào)控EPCs的分化。
　　方法：1.密度梯度離心法獲取人外周血來源的單個(gè)核細(xì)胞（PBMCs），借助差速貼壁法和EPCs專用培養(yǎng)基定向誘導(dǎo)培養(yǎng)EPCs并培養(yǎng)14~28天，光學(xué)顯微鏡下觀察EPCs的細(xì)胞形態(tài)變化，應(yīng)用流式細(xì)胞儀、乙酰低密度脂蛋白、與荊豆凝集素吞噬

2、實(shí)驗(yàn)鑒定細(xì)胞表型，實(shí)時(shí)定量PCR測定miR-150在早期內(nèi)皮祖細(xì)胞及晚期內(nèi)皮祖細(xì)胞中的表達(dá)含量；2.miR-150的模擬物和抑制物分別轉(zhuǎn)染eEPCs和lEPCs，檢測miR-150對eEPCs和lEPCs的分化、增殖、成血管能力的影響；3.探查miR-150的可能靶基因c-Myb，PCR技術(shù)檢測mRNA的表達(dá)；Western Blot檢測靶蛋白的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：1.密度梯度離心法獲得人外周血來源MNCs經(jīng)體外培養(yǎng)后，表達(dá)相應(yīng)

3、的內(nèi)皮細(xì)胞特異抗原，包括CD31、CD133、vWF、VEGFR-2，能夠吞噬Dil-acLDL與UEA-1結(jié)合，具有增殖和成血管能力，細(xì)胞純度較高；2.使用miR-150模擬物和抑制物轉(zhuǎn)染EPCs48小時(shí)后，證實(shí)miR-150能夠調(diào)控eEPCs和lEPCs的表面特異性抗原的表達(dá)水平，上調(diào)miR-150可以促進(jìn)eEPCs的分化；下調(diào)miR-150可以降低lEPCs的成血管及增殖能力；3.miR-150表達(dá)上調(diào)后EPCs中c-Myb蛋白合