巰基氧化酶1對人SMMC-7721肝癌細胞生物學(xué)功能的影響研究.pdf

1、背景與目的:肝癌是我國常見腫瘤之一，肝癌發(fā)病機制錯綜復(fù)雜，遺傳、飲食、病毒和寄生蟲感染等均可與肝癌發(fā)生發(fā)展有關(guān)。隨著分子生物學(xué)發(fā)展，有多種肝癌相關(guān)基因經(jīng)過相同或不同研究者多次研究，被認為可能參與到肝癌的發(fā)病過程中。Araujo等發(fā)現(xiàn)QSOX1在高分化的神經(jīng)母細胞瘤腫瘤組織中高表達，且在復(fù)發(fā)率高的病人中也出現(xiàn)高表達。另外，他們還發(fā)現(xiàn)QSOX1在神經(jīng)母細胞瘤的分化和侵襲中起重要作用。QSOX1也被認為可能參與到乳腺癌、前列腺癌等的發(fā)生發(fā)展過

2、程。目前關(guān)于QSOX1與肝癌的發(fā)生發(fā)展間關(guān)系的研究報道甚少，本研究進一步驗證QSOX1在肝癌細胞中的表達及其對肝癌細胞生物學(xué)功能的影響，揭示QSOX1對肝癌細胞生物學(xué)功能所發(fā)揮的作用，為肝癌早診和治療提供理論基礎(chǔ)和實驗依據(jù)。
　　方法:針對QSOX1的shRNA慢病毒載體的構(gòu)建由上海吉凱基因技術(shù)有限公司完成。將針對QSOX1的shRNA慢病毒載體，以及空病毒載體（帶有陰性對照病毒）各轉(zhuǎn)染至人SMMC-7721肝癌細胞，即分別為轉(zhuǎn)染

3、組和陰性對照組?？瞻讓φ战M為不做任何轉(zhuǎn)染的目的細胞。經(jīng)篩選出穩(wěn)定表達株后擴大培養(yǎng)，采用實時熒光定量核酸擴增(qPCR)檢測系統(tǒng)，及免疫印跡法(Western-blot)分別檢測細胞中QSOX1基因mRNA和蛋白質(zhì)在肝癌細胞中的表達情況;運用CCK-8法通過檢測細胞活力以驗證細胞增殖情況;采用細胞克隆形成實驗測定細胞成瘤能力;利用流式細胞技術(shù)檢測細胞周期;運用細胞Transwell實驗和劃痕實驗分別測定細胞轉(zhuǎn)移和遷移能力。通過SPSS17

4、.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行統(tǒng)計分析。
　　結(jié)果:慢病毒轉(zhuǎn)染組和對照病毒轉(zhuǎn)染組均成功轉(zhuǎn)染;慢病毒轉(zhuǎn)染組QSOX1基因mRNA和蛋白質(zhì)表達均分別明顯低于空病毒轉(zhuǎn)染組和空白對照組;經(jīng)CCK-8細胞增殖實驗發(fā)現(xiàn)，慢病毒轉(zhuǎn)染組細胞增殖相對于其他對照組明顯減緩（P＜0.05）;慢病毒轉(zhuǎn)染組細胞克隆數(shù)量分別明顯低于其他對照組;流式細胞術(shù)分析表明，慢病毒轉(zhuǎn)染組與空細胞組比較，慢病毒轉(zhuǎn)染組G1期細胞所占比例明顯減少，而S期明顯增多，在G2/M期無明顯變化;

5、慢病毒轉(zhuǎn)染組與空病毒轉(zhuǎn)染組細胞相比，慢病毒轉(zhuǎn)染組G1期細胞也明顯減少，而S期細胞無顯著變化，G2/M期細胞明顯增多。通過細胞劃痕實驗觀察細胞在O小時、8小時、24小時的遷移情況，結(jié)果顯示，慢病毒轉(zhuǎn)染組遷移能力在24小時明顯降低。細胞transwell轉(zhuǎn)移實驗顯示，空細胞組和空病毒組細胞轉(zhuǎn)移數(shù)無明顯差異，而慢病毒轉(zhuǎn)染組細胞轉(zhuǎn)移數(shù)明顯減少。
　　結(jié)論:通過慢病毒轉(zhuǎn)染，干擾QSOX1基因在SMMC-7721細胞中的表達，能降低SMMC-