脫氧核酶對人肝癌SMMC-7721細(xì)胞端粒酶活性的影響.pdf

1、廣東藥學(xué)院碩士學(xué)位論文脫氧核酶對人肝癌SMMC7721細(xì)胞端粒酶活性的影響姓名：洪潔華申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：病原生物學(xué)指導(dǎo)教師：呂小迅劉曉波20080501廣東藥學(xué)院碩士研究生學(xué)位論文IIRTPCR擴(kuò)增hTERT基因片段，MTT比色分析法測定細(xì)胞增殖抑制情況；用TRAPPCR銀染法檢測端粒酶活性；統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用多樣本均數(shù)兩兩比較的方差分析。結(jié)果:1.胞外切割后RTPCR擴(kuò)增產(chǎn)物1%瓊脂糖凝膠電泳分析顯示:各組泳道中內(nèi)對照βactin擴(kuò)

2、增產(chǎn)物條帶(592bp)的亮度相似，而hTERT擴(kuò)增產(chǎn)物條帶(222bp)的亮度DzTi組明顯弱于其它兩組?；叶葤呙璋攵拷Y(jié)果顯示，空白組、DzTi組和DzTiscr對照組SMMC7721細(xì)胞中hTERTmRNA的相對表達(dá)量分別為0.7180.014、0.2830.012、0.7160.019，q檢驗(yàn)方差分析，DzTi組hTERTmRNA相對表達(dá)量分別與空白組及陰性對照組相比，均下降61%左右，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.轉(zhuǎn)染4

3、8h后各組RTPCR擴(kuò)增產(chǎn)物凝膠電泳分析顯示:各組泳道中內(nèi)對照βactin擴(kuò)增產(chǎn)物條帶(592bp)的亮度相似，而hTERT擴(kuò)增產(chǎn)物條帶(222bp)的亮度DzTi組明顯弱于其它三組?；叶葤呙璋攵拷Y(jié)果顯示，空白組、脂質(zhì)體組、DzTi組和DzTiscr對照組SMMC7721細(xì)胞中hTERTmRNA的相對表達(dá)量分別為0.7260.018、0.7250.011、0.1700.029、0.7100.013，經(jīng)q檢驗(yàn)方差分析，DzTi組hTER

4、TmRNA相對表達(dá)量分別與空白組、脂質(zhì)體組、DzTiscr組相比，均下降76%左右，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.MTT比色分析法測定細(xì)胞增殖抑制率顯示:在正常使用濃度和作用細(xì)胞的時間內(nèi)，LipoDzTi組對肝癌SMMC7721細(xì)胞的增殖有抑制作用，并具有濃度依賴性和時間依賴性；LipoDzTi組分別與對照組Lipo組、LipoDzTiscr組比較，均有顯著性差異(P0.05)。4.轉(zhuǎn)染48h后端粒酶活性，TRAPPCR銀染法檢測

5、顯示:空白組、脂質(zhì)體組及DzTiscr組作用48h，其TRAP產(chǎn)物電泳均顯示明顯的梯形條帶，亮度深；而實(shí)驗(yàn)組即DzTi組，作用48h后，TRAP產(chǎn)物電泳顯示梯形條帶明顯減少，亮度淺。結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)合成的脫氧核酶能夠從基因水平上高效特異地抑制人肝癌SMMC7721細(xì)胞端粒酶hTERTmRNA的表達(dá)，降低肝癌細(xì)胞的端粒酶活性，從而抑制細(xì)胞生長。作為一種新發(fā)現(xiàn)的催化性核酸，脫氧核酶在腫瘤的基因治療領(lǐng)域中將具有及其重要的應(yīng)用價(jià)值。關(guān)鍵詞:端粒