GRHL1在非小細胞肺癌中的表達及其對肺腺癌A549細胞生物學行為的影響.pdf

1、第一部分GRHL1、GRHL2在非小細胞肺癌組織中的表達及其與臨床病理特征的關(guān)系
　　目的：
　　研究GRHL1、GRHL2在NSCLC組織中的表達水平及其與臨床病理特征的關(guān)系。
　　方法：
　　通過免疫組織化學方法檢測GRHL1、GRHL2在37例肺鱗癌、48例肺腺癌組織以及所對應(yīng)癌旁肺組織中的表達情況,并收集臨床病理資料,分析GRHL1、GRHL2的表達與臨床病理特征的關(guān)系。實驗結(jié)果采用SPSS19.0統(tǒng)計軟

2、件進行分析。
　　結(jié)果：
　　1、肺癌組織中GRHL1的陽性表達率明顯低于癌旁肺組織,GRHL1在肺鱗癌組織與癌旁肺組織中的陽性表達率分別為32.43％（12/37）、81.08%（30/37）,GRHL1在肺腺癌組織與癌旁肺組織中的陽性表達率分別為31.25%（15/48）、83.33%（40/48）。肺癌組織中GRHL2的陽性表達率明顯高于癌旁肺組織，GRHL2在肺鱗癌組織與癌旁肺組織中的陽性表達率分別為81.08%（3

3、0/37）、10.81%（4/37）,GRHL2在肺腺癌組織與癌旁肺組織中的陽性表達率分別為75.00%（36/48）、12.50%（6/48）。
　　2、GRHL1、GRHL2在肺癌中的表達程度與腫瘤的組織分化程度、臨床TNM分期以及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，而與患者年齡、性別、腫瘤病理類型無關(guān)。
　　結(jié)論：
　　GRHL1在NSCLC組織中低表達，GRHL2在NSCLC組織中高表達。GRHL1、GRHL2在肺癌中的表達程

4、度與肺癌的組織分化程度、臨床TNM分期和有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。
　　第二部分GRHL1對肺腺癌A549細胞生物學行為的影響
　　目的：
　　探討GRHL1過表達后對A549細胞增殖、周期、遷移、克隆能力的影響。
　　方法：
　　體外構(gòu)建GRHL1基因表達質(zhì)粒pENTER-Flag-GRHL1，采用脂質(zhì)體法將重組真核表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至低表達GRHL1的A549細胞系，構(gòu)建過表達GRHL1的A549細胞系，通過qPC

5、R、Westernblot鑒定表達產(chǎn)物。采用結(jié)晶紫細胞染色實驗、流式細胞術(shù)、細胞劃痕實驗、細胞克隆實驗，觀察過表達GRHL1后對A549細胞增殖、周期、遷移、克隆能力的影響。
　　結(jié)果：
　　1、將成功構(gòu)建的pENTER-Flag-GRHL1表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染A549細胞，經(jīng)qPCR、Westernblot鑒定顯示GRHL1過表達效果明顯,由此可見構(gòu)建的GRHL1過表達A549細胞系A(chǔ)549-GRHL1(+)達到實驗預期目標,可作

6、為本實驗理想的細胞系。
　　2、結(jié)晶紫細胞染色結(jié)果顯示與空載質(zhì)粒VECTOR組相比，過表達GRHL1對A549細胞的增殖起到抑制作用；流式細胞術(shù)檢測細胞周期發(fā)現(xiàn)A549-GRHL1(+)組細胞周期被阻滯在G0/G1期；劃痕實驗結(jié)果顯示與空載質(zhì)粒VECTOR組相比，過表達GRHL1極大地抑制了A549細胞的遷移能力；細胞克隆實驗顯示與空載質(zhì)粒VECTOR組相比，過表達GRHL1能明顯抑制A549細胞的克隆能力。
　　結(jié)論：