姜黃素對肺腺癌A549細(xì)胞中SCF泛素連接酶及其生物學(xué)行為的影響.pdf

1、目的:
　　應(yīng)用姜黃素處理肺腺癌A549細(xì)胞,觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化,檢測細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及SCF泛素連接酶活性的變化,以探討姜黃素對肺腺癌A549細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及相關(guān)的分子作用機(jī)制,為姜黃素在肺癌的臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)和新方法。
　　方法:
　　1、建立傳代肺腺癌A549細(xì)胞干預(yù)模型,姜黃素以濃度梯度方式(0、10、20、40、80umol/L)處理肺癌細(xì)胞24h、48h、72h,倒置顯微鏡下觀察藥物處

2、理后細(xì)胞形態(tài)特征的變化,MTT法檢測姜黃素對肺癌細(xì)胞增殖的影響,計(jì)算出不同時(shí)間段的藥物IC50。
　　2、根據(jù)藥物IC50值選取適當(dāng)濃度的姜黃素處理肺癌細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)檢測不同時(shí)間段(0h、24h、48h)姜黃素對肺癌細(xì)胞周期的影響。
　　3、用不同濃度(0、10、20、40umol/L)的姜黃素處理肺癌細(xì)胞不同時(shí)間(12h、24h、48h),流式細(xì)胞術(shù)檢測姜黃素對肺癌細(xì)胞凋亡的影響。
　　4、Western blot

3、ting法檢測不同濃度(0、10、20、40umol/L)的姜黃素處理不同時(shí)間(24h、48h、72h)后肺癌A549細(xì)胞中SCF泛素連接酶結(jié)構(gòu)蛋白Cul1、Skp2及周期蛋白p27的表達(dá)變化。
　　結(jié)果:
　　1、姜黃素能抑制肺癌A549細(xì)胞的生長增殖,并呈時(shí)間和濃度依賴性,其作用48h、72h的藥物IC50分別是27.98umol/L、20.98umol/L。
　　2、姜黃素能誘導(dǎo)肺癌A549細(xì)胞的周期阻滯于G1期