體外下調(diào)NY-SAR-35對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)行為的影響.pdf

1、目的:研究NY-SAR-35對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的影響。
　　方法:
　　(1)用qRT-PCR篩選出高表達(dá)NY-SAR-35的膠質(zhì)瘤細(xì)胞;
　　(2)用帶有熒光的特異性干擾NY-SAR-35表達(dá)的序列轉(zhuǎn)染膠質(zhì)瘤細(xì)胞，對(duì)轉(zhuǎn)染條件進(jìn)行優(yōu)化;
　　(3) CCK-8法檢測(cè)干擾NY-SAR-35對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長(zhǎng)能力的影響;
　　(4)流式細(xì)胞儀檢測(cè)干擾NY-SAR-35對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞周期和凋亡的影響;

2、　　(5) Western blot檢測(cè)細(xì)胞周期蛋白A(Cyclin A)、細(xì)胞周期蛋白激酶2(CDK2)、凋亡相關(guān)蛋白caspase-3和caspase-9的表達(dá)水平變化;
　　(6)通過(guò)Matrigel粘附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)膠質(zhì)瘤細(xì)胞黏附能力變化;
　　(7)劃痕修復(fù)實(shí)驗(yàn)、Transwell遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移能力;
　　(8) Transwell Matrigel侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲能力、Wester blot

3、檢測(cè)上皮細(xì)胞鈣粘蛋白(E-cadherin)和N-鈣粘蛋白(N-cadherin)表達(dá)水平變化。
　　結(jié)果:
　　(1) NY-SAR-35的蛋白表達(dá)可見(jiàn)于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中，但主要在細(xì)胞核中;選取A172和U251兩株膠質(zhì)瘤細(xì)胞株作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象;
　　(2)經(jīng)qRT-PCR檢測(cè)，篩選出干擾效率最高的兩組干擾序列作為實(shí)驗(yàn)組;
　　(3)CCK-8法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，下調(diào)NY-SAR-35表達(dá)后，兩株膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖能力較對(duì)照組

4、顯著下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;
　　(4)流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期，顯示膠質(zhì)瘤細(xì)胞NY-SAR-35表達(dá)下調(diào)后，S期細(xì)胞增加，G2/M期細(xì)胞減少，G0/G1期細(xì)胞所占百分比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異; Westernblot結(jié)果顯示NY-SAR-35下調(diào)后Cyclin A的表達(dá)增加，CDK2減少，與對(duì)照組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;
　　(5)流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡，結(jié)果顯示NY-SAR-35干擾后膠質(zhì)瘤細(xì)胞的凋亡增加，與對(duì)照組比較差異具有統(tǒng)計(jì)

5、學(xué)意義; Western blot結(jié)果顯示NY-SAR-35下調(diào)后caspase-3的表達(dá)增加，與對(duì)照組比較其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，caspase-9的表達(dá)無(wú)變化，與對(duì)照組比較差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;
　　(6)粘附實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在干擾NY-SAR-35后，兩株膠質(zhì)瘤細(xì)胞的黏附能力均下降，與對(duì)照組比較其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;
　　(7)在劃痕修復(fù)實(shí)驗(yàn)中，當(dāng)干擾NY-SAR-3512小時(shí)時(shí)，兩株膠質(zhì)瘤細(xì)胞的修復(fù)率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;當(dāng)24小

6、時(shí)時(shí)，實(shí)驗(yàn)組的修復(fù)率明顯低于對(duì)照組，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;同時(shí)，Transwell遷移實(shí)驗(yàn)顯示下調(diào)NY-SAR-35可以導(dǎo)致穿膜細(xì)胞數(shù)量減少，與對(duì)照組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;
　　(8)Transwell Matrigel侵襲實(shí)驗(yàn)顯示干擾NY-SAR-35后，細(xì)胞的穿膜數(shù)量明顯降低;Western blot檢測(cè)干擾后E-cadherin的表達(dá)量增加，N-cadherin的表達(dá)量降低，與對(duì)照組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論