簡(jiǎn)介：河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)及知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本學(xué)位論文在導(dǎo)師或指導(dǎo)小組的指導(dǎo)下I由本人獨(dú)立完成。本學(xué)位論文研究所獲得的研究成果，其知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。河北醫(yī)科大學(xué)有權(quán)對(duì)本學(xué)位論文進(jìn)行交流、公開和使用。凡發(fā)表與學(xué)位論文主要內(nèi)容相關(guān)的論文，第一署名單位為河北醫(yī)科大學(xué)，試驗(yàn)材料、原始數(shù)據(jù)、申報(bào)的專利等知識(shí)產(chǎn)權(quán)均歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。否則，承擔(dān)相應(yīng)的法律責(zé)任。一吼七翩虢耀二孑了篡擎I；|；河北醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標(biāo)注等內(nèi)容外，文中不包含其他人已發(fā)表或撰寫的研究成果，指導(dǎo)教師對(duì)此進(jìn)行了審定。本論文由本人獨(dú)立撰寫，文責(zé)自負(fù)。～躲。卡新擗讜岬B、1耳L；H白口中文摘要1英文摘要O00OO00OO0OOOOOOOOOOOOO00OOO0OOIOOOO000000OOO003研究論文河北省嬰幼兒病毒性腹瀉的病原學(xué)研究前言6日IJ吾””””””””一一一“”一””“““一一一““一”一“””一一。O材料與方法OOIO07結(jié)果OOOOOOOOOOOOOOO14附圖000000000OOOOODOOOO18附表OOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOO20討論0O0OOAGMOOO0OOOO24結(jié)論OOOOOOOOOOOOOOOOO27參考文獻(xiàn)OOOOOOOO000027綜述嬰幼兒病毒性腹瀉研究進(jìn)展OOOO30致謝OOOOOOOOOOOO0000000OOOOOOOO37個(gè)人簡(jiǎn)歷OOOOOOOO38

簡(jiǎn)介：乙型肝炎病毒具有傳染性強(qiáng)、傳播途徑復(fù)雜、流行面廣泛、治療困難等特點(diǎn)人體感染后常可導(dǎo)致急、慢性乙型病毒性肝炎并且許多人成為無癥狀的乙肝病毒攜帶者長(zhǎng)期的慢性感染甚至可導(dǎo)致肝硬化和肝細(xì)胞癌中國(guó)是乙型病毒性肝炎的高發(fā)區(qū)乙肝病毒攜帶者高達(dá)10％以上二十年來的防治工作仍然未能得到很好控制我們?cè)诙嗄甑幕榍搬t(yī)學(xué)檢查中篩查出許多乙肝表面抗原陽性的欲婚青年傳染性很強(qiáng)的乙肝大三陽HBSAG、HBEAG、抗HBC陽性、和雙陽HBSAG、HBEAG陽性也很常見如何采取措施以阻斷他們結(jié)婚后的相互傳染及減少對(duì)后代的影響且不影響他們的結(jié)構(gòu)和生育這一問題成為婚前醫(yī)學(xué)檢查工作者爭(zhēng)論的焦點(diǎn)國(guó)內(nèi)外許多研究均證實(shí)了進(jìn)行乙肝疫苗接種或和注射乙肝高效價(jià)免疫球蛋白HBIG對(duì)于阻斷乙肝病毒的母嬰垂直傳播是有效的但采用乙肝疫苗或和聯(lián)合注射HBIG對(duì)于阻斷乙型肝炎病毒的配偶間傳播是否有效國(guó)內(nèi)尚未見報(bào)道該次研究采用實(shí)驗(yàn)流行病學(xué)方法對(duì)進(jìn)行乙肝疫苗接種或和聯(lián)合注射HBIG阻斷乙型肝炎病毒在配偶間傳播的效果進(jìn)行評(píng)價(jià)并對(duì)單獨(dú)乙肝疫苗接種和聯(lián)合注射HBIG的不同方案間的效果進(jìn)行比較

簡(jiǎn)介：目的合成適合畢赤酵母表達(dá)的乙型肝炎病毒HBVE抗原基因，在畢赤酵母中表達(dá)出高特異性和高免疫反應(yīng)性的重組乙型肝炎病毒E抗原HBEAG。方法采用聚合酶鏈反應(yīng)從含HBV全基因序列ADW的質(zhì)粒PHBV1中擴(kuò)增出野生型E基因，在兩個(gè)不同的位點(diǎn)定向插入酵母表達(dá)載體PPICZΑA，構(gòu)建兩種重組質(zhì)粒CZΑAEAG；采取基因搭橋法及TAQ酶聚合反應(yīng)，選用酵母偏愛的同義密碼子替換野生型E基因的部分密碼子，制備合成E基因SYNEAG基因，在兩個(gè)不同的位點(diǎn)定向插入PPICZΑA酵母表達(dá)載體，構(gòu)建兩種重組質(zhì)粒CZΑASYNEAG；SACI消化重組質(zhì)粒，用電轉(zhuǎn)法將線性化的攜帶有野生型和合成E基因的四種重組PPICZΑA分別轉(zhuǎn)化畢赤酵母菌株GS115，，篩選HISMUTS表型轉(zhuǎn)化子，經(jīng)甲醇誘導(dǎo)表達(dá)HBEAG。結(jié)果酶切電泳及DNA測(cè)序證實(shí)野生型及合成E基因已正確克隆到表達(dá)載體中；聚丙烯酰胺凝膠電泳及ELISA顯示HBEAG在畢赤酵母中分泌表達(dá)，含CZΑASYNEAG的酵母重組子表達(dá)量最高，約為63MGL，培養(yǎng)上清ELISA測(cè)定效價(jià)1∶81920，最大吸光度值達(dá)28；重組HBEAG與乙型肝炎病毒核心抗體間無結(jié)合反應(yīng)。結(jié)論成功合成了適合畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)的HBVE基因及構(gòu)建了PPICZΑASYNEAG重組質(zhì)粒，畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)高效分泌表達(dá)出與乙型肝炎病毒核心抗原間無交叉抗原性、具有良好免疫反應(yīng)性的HBEAG。

簡(jiǎn)介：遵義醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文兒童病毒性腦炎常見病原學(xué)及臨床研究遵義醫(yī)學(xué)院碩士研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。學(xué)位論文中除了特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，不包含其他人或其它機(jī)構(gòu)已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。其他同志對(duì)本研究的啟發(fā)和所做的貢獻(xiàn)均已在學(xué)位論文中作了明確的說明并表示了謝古巴恩。學(xué)位論文作者簽名簽字日期年月日遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人完全了解遵義醫(yī)學(xué)院有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即遵義醫(yī)學(xué)院有權(quán)保留并向有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交學(xué)位論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)遵義醫(yī)學(xué)院可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以公布學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容，可以采用影印、縮印或其它復(fù)制手段保存學(xué)位論文，即遵義醫(yī)學(xué)院具有學(xué)位論文的數(shù)字化制品復(fù)制權(quán)，信息網(wǎng)絡(luò)傳播權(quán)和匯編權(quán)。保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書。學(xué)位論文作者簽名導(dǎo)師簽名簽字日期年月日簽字日期年月日遵義醫(yī)T?％碩十學(xué)位論文兒童病毒性腦炎常見病原學(xué)及臨床研究縮略語英文全稱BPBASEPAIRCOXVCOXSACKIVIRUS中英文縮略詞表CSFCEREBROSPINALFLUIDECHOVECHOVIRUSELISAENZYMELINKEDIMMUNOSORBENTASSAYEVVIRALENCEPHALITISEVSJEVHRPHSVODPCRRPMENTEROVIRUSJAPANESEBENCEPHALITISVIRUSHORSERADISHPEROXIDASEHERPESSIMPLEXVIRUSOPTICALDENSITYPOLYMERASECHAINREACTIONROUNDSPERMINUTERTPCRREVERSETRANSCRIPTIONPCR中文全稱堿基對(duì)柯薩奇病毒腦脊液艾柯病毒酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)病毒性腦炎腸道病毒流行性乙型腦炎病毒辣根過氧化物酶單純皰疹病毒光密度聚合酶鏈反應(yīng)每分鐘轉(zhuǎn)數(shù)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)

簡(jiǎn)介：隨著以拉米夫定為代表的新一代核苷類似物在中國(guó)慢性乙型肝炎患者中的廣泛應(yīng)用核苷類似物耐藥成為目前臨床關(guān)注的焦點(diǎn)問題我們采用本室先前建立的RFLP方法篩檢YMDD變異并將其應(yīng)用于臨床監(jiān)測(cè)拉米夫定治療過程中耐藥性的產(chǎn)生取得了較好的效果由于RFLP的局限性我們對(duì)篩檢YMDD變異陽性的標(biāo)本進(jìn)行了P基因測(cè)序以進(jìn)一步了解拉米夫定耐藥株的P基因AE區(qū)序列特點(diǎn)該研究中還有2例患者中分別因?yàn)镻基因RTD83N和RTM204I變異導(dǎo)致HBSAG的表達(dá)提前出現(xiàn)終止但患者仍表現(xiàn)為HBSAG陽性說明在患者中這種提前終止的變異株均與野毒株同時(shí)存在為進(jìn)一步研究變異毒株的生物學(xué)意義我們通過定向點(diǎn)突變成功的在模板P38Ⅱ的基礎(chǔ)上構(gòu)建了五種P基因變異株并在此基礎(chǔ)上將包含不同突變點(diǎn)的全基因質(zhì)粒通過磷酸鈣轉(zhuǎn)染的方法轉(zhuǎn)染HEPG2細(xì)胞通過轉(zhuǎn)染細(xì)胞上清的檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)五種不同的P基因變異株均可表達(dá)并分泌HBSAG和HBEAG證明轉(zhuǎn)染質(zhì)粒在細(xì)胞內(nèi)可正常表達(dá)和分泌但五種變異株與野株相比SN值相差不多說明這五種P基因變異對(duì)S基因表達(dá)的抗原并無明顯影響

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多力竭性運(yùn)動(dòng)對(duì)病毒性心肌炎小鼠的影響及蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：華東師范大學(xué)碩士學(xué)位論文亞甲藍(lán)光化學(xué)法滅活血漿中丙型肝炎病毒的分子生物學(xué)機(jī)理姓名倪小菊申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師錢開誠(chéng)20070501華東師范大學(xué)2007屆碩士論文亞甲藍(lán)光化學(xué)法滅活血漿中丙型肝炎病毒的分子生物學(xué)機(jī)理院系生金型堂堂睦專業(yè)生塑絲堂皇坌王生絲堂方向岔王魚瘞堂研究生埕塵蘊(yùn)指導(dǎo)老師毯玨遮班究屋摘要輸血是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)不可或缺的重要支撐手段，但輸血也存在一定的風(fēng)險(xiǎn)，特別是經(jīng)輸血傳播HIV、HBV、HCV等病毒感染的風(fēng)險(xiǎn)。輸血相關(guān)病毒感染因其涉及面廣且預(yù)后不良，具有較大的社會(huì)負(fù)面影響?？朔《拘暂斞L(fēng)險(xiǎn)，保障輸血安全已成為醫(yī)學(xué)界乃至全社會(huì)關(guān)注的焦點(diǎn)。由于血液制品病毒標(biāo)記物檢測(cè)在方法學(xué)上的局限性以及病毒窗口期的存在，目前還不能萬無一失地剔除攜帶病毒的血液或血液成分制品，因此僅依賴血液篩查的手段不能完全杜絕通過輸血傳播病毒的風(fēng)險(xiǎn)。以阻斷病毒通過輸血途徑傳播為目的的血液成分病毒滅活技術(shù)被認(rèn)為是提高輸血安全性的一道重要的屏障。對(duì)血液成分病毒滅活方法及其機(jī)理的研究是輸血醫(yī)學(xué)研究的熱點(diǎn)之一。亞甲藍(lán)光化學(xué)方法METHYLENEBLUEPHOTOCHEMISTRYMBP目前己成功應(yīng)用于臨床用單袋血漿的病毒滅活，其有效性和安全性已被充分驗(yàn)證，但該方法滅活病毒的分子生物學(xué)機(jī)理尚不十分明了，與此有關(guān)的研究還在繼續(xù)深入之中。闡明亞甲藍(lán)光化學(xué)法病毒滅活的機(jī)理將有助方法學(xué)的改進(jìn)，并為其它病原體滅活方法的研究提供理論參照。本研究選擇丙型肝炎病毒HEPATITISCVIRL腮，HCV作為MBP病毒滅活機(jī)理研究的實(shí)驗(yàn)對(duì)象，主要是因?yàn)镠CV是我國(guó)輸血后感染的最主要病原體之一，在影響輸血安全的諸因素中占有較大的權(quán)重，且該病毒的感染活性目前尚無法用體

簡(jiǎn)介：目的人偏肺病毒是一種廣泛流行于世界各地的重要呼吸道感染病原體。了解本地區(qū)人偏肺病毒的感染現(xiàn)狀、流行特征和分型將有助于相關(guān)呼吸道感染的防控并為臨床治療、檢測(cè)試劑開發(fā)和疫苗的研發(fā)提供理論依據(jù)。本研究的目的是對(duì)武漢地區(qū)的門診流感樣病例患者進(jìn)行人偏肺病毒的檢測(cè)和分子流行病學(xué)調(diào)查了解本地各年齡階段人群的感染現(xiàn)狀及病毒流行規(guī)律。方法2008年7月至2011年12月武漢市兒童醫(yī)院和武漢市一醫(yī)院門診共收集到4009例符合納入標(biāo)準(zhǔn)的流感樣病例患者。使用實(shí)時(shí)熒光RTPCR方法檢測(cè)患者咽拭標(biāo)本中的人偏肺病毒RNA使用RTPCR方法對(duì)人偏肺病毒陽性樣本的部分N基因和F基因片段進(jìn)行擴(kuò)增和測(cè)序測(cè)序結(jié)果用于基因分型和系統(tǒng)發(fā)生分析。此外結(jié)合患者信息對(duì)武漢地區(qū)的人偏肺病毒感染人群時(shí)間分布進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果在4009份流感樣病例標(biāo)本中共發(fā)現(xiàn)117例人偏肺病毒RNA陽性標(biāo)本檢出率為292％其中15例還存在其它呼吸道病毒感染混合感染率為128。各年齡組患者中以5歲及以下兒童的人偏肺病毒感染率最高534615歲兒童和1664歲成人的感染率分別為082和031?例65歲以上老年流感樣病例患者中未檢出人偏肺病毒陽性。研究期間武漢地區(qū)的人偏肺病毒感染表現(xiàn)出以兩年為周期的季節(jié)分布模式在08年10月至09年3月以及2010年3至6月兩次達(dá)到流行高峰高峰期人偏肺病毒檢出率分別為1944和2476。117份陽性樣本中的102份分型成功其中36份為A2亞型308、41份為B1亞型350、25份為B2亞型214。本研究未發(fā)現(xiàn)A1亞型且所有A2亞型陽性樣本均屬于A2B群。A型和B型人偏肺病毒同時(shí)流行于研究過程中的各個(gè)年度但每個(gè)流行季節(jié)只有一型占據(jù)優(yōu)勢(shì)0809年度的優(yōu)勢(shì)型是A型而0910、1011以及11年下半年的優(yōu)勢(shì)型為B型其間發(fā)生了一次優(yōu)勢(shì)轉(zhuǎn)換。系統(tǒng)發(fā)生分析證明武漢地區(qū)流行的人偏肺病毒毒株與參考毒株在進(jìn)化上十分接近但武漢流行株也表現(xiàn)出了基因變異和遺傳分化的跡象。結(jié)論本研究是國(guó)內(nèi)首次對(duì)一個(gè)地區(qū)的全年齡段人群進(jìn)行為期1年以上的大型人偏肺病毒流行病學(xué)調(diào)查。研究證明人偏肺病毒是引起武漢地區(qū)兒童急性呼吸道感染的一個(gè)重要病因且在成人中也有傳播本地人偏肺病毒感染的高發(fā)人群是5歲以下兒童A型和B型人偏肺病毒在武漢地區(qū)同時(shí)流行優(yōu)勢(shì)相互交替。我們的研究結(jié)果對(duì)本地區(qū)人偏肺病毒感染的預(yù)防和治療具有積極的指導(dǎo)意義。

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簡(jiǎn)介：乙肝病毒（HBV）感染造成的終末期肝病或暴發(fā)性肝炎預(yù)后極差肝移植通常是唯一有效的治療方法但術(shù)后乙肝病毒再感染嚴(yán)重影響了患者的長(zhǎng)期生存率目的探討病毒學(xué)因素對(duì)原位肝移植（OLT）后乙肝病毒再感染的影響（包括術(shù)前病毒含量、HBVS基因變異）方法以熒光定量方法檢測(cè)11例因乙肝相關(guān)性終末期肝病行肝移植治療的患者術(shù)前血清的乙肝病毒含量并比較三組病毒水平以套式PCR方法檢測(cè)11例肝移植患者術(shù)前、術(shù)后血清及15例慢性乙肝患者血清的HBVDNA并測(cè)序選擇肝移植患者存在A決定簇變異的陽性片段進(jìn)行克隆后測(cè)序比較再感染組術(shù)前、術(shù)后乙肝病毒序列及各組病毒基因間的差異并以GOLDKEY軟件分析各變異點(diǎn)對(duì)抗原決定簇分布的影響結(jié)論術(shù)前HBV復(fù)制與否及復(fù)制水平是影響術(shù)后乙肝病毒再感染的因素之一該研究中絕大多數(shù)患者來自中國(guó)北方地區(qū)序列測(cè)定結(jié)果符合ADR亞型的地區(qū)分布特征部分變異病毒株可以明顯改變A決定簇構(gòu)象在抗HBS存在不仍能造成術(shù)后HBV再感染即出現(xiàn)“抗體逃逸現(xiàn)象”HBIG造成的免疫壓力對(duì)病毒變異具有篩選和促進(jìn)作用HBVS基因區(qū)變異可干擾聚合酶序列但未累及其高保守區(qū)（YMDD基序）也許對(duì)抗病毒藥物（如拉料呋啶）的敏感性無影響但P區(qū)終止密碼子突變可能會(huì)影響病毒復(fù)制能力MHR區(qū)外散在分布的變異尤其LEU213ILE變異可能在乙肝慢性感染過程中具有一定意義

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簡(jiǎn)介：南方醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文腫瘤翻譯調(diào)控蛋白（TCTP）對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞LOVO的生物學(xué)特性影響及安全型慢病毒載體構(gòu)建探索姓名馬強(qiáng)申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)免疫學(xué)指導(dǎo)教師李明20090410中文摘要安全性沒有很好解決，如對(duì)導(dǎo)入基因的控制、外緣基因及基因載體本身整合到宿主染色體帶來的一系列問題等；②用于大腸癌理想載體的選擇應(yīng)具有安全性、高效性、靶向性、大容量性和可控性等特點(diǎn)，目前還難以找到可運(yùn)用到理想的臨床要求載體③缺乏足夠的基因治療靶序列，大腸癌的發(fā)生是一種多基因水平調(diào)控的失控所致單獨(dú)基因治療效果差。由此進(jìn)一步深入研究大腸癌的發(fā)病機(jī)制，尋找確定更多更有效的治療靶基因，制備安全高效的基因治療載體是大腸癌基因治療中迫切需要解決的問題。本文第一部分著重研究腫瘤翻譯調(diào)控蛋白TCTP對(duì)高轉(zhuǎn)移性結(jié)腸癌細(xì)胞株的細(xì)胞生物學(xué)影響以及相關(guān)信號(hào)傳導(dǎo)通路的研究。第二部分著重研究新型基因治療用慢病毒載體生產(chǎn)體系的改進(jìn)和優(yōu)化。第一部分通過構(gòu)建靶向TCTP基因的SHRNA質(zhì)粒表達(dá)載體，下調(diào)TCTP在LOVO細(xì)胞中的表達(dá)。通過CCK一8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)LOVO細(xì)胞的增殖速度，粘附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)LOVO細(xì)胞對(duì)ECM的粘附能力，趨化實(shí)驗(yàn)和劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)LOVO細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力，侵襲實(shí)驗(yàn)檢澳LJLOVO細(xì)胞對(duì)于ECM的分解穿透能力，EMSA以及熒光素酶實(shí)驗(yàn)檢I貝OTCTP下調(diào)后對(duì)于NFRB活性的影響。通過成瘤實(shí)驗(yàn)檢測(cè)TCTP下調(diào)對(duì)于LOVO細(xì)胞成瘤能力的影響，轉(zhuǎn)移模型實(shí)驗(yàn)檢測(cè)LOVO細(xì)胞體內(nèi)肝轉(zhuǎn)移能力的影響，通過2D電泳和質(zhì)譜分析鑒定與TCTP相關(guān)蛋白，并初步評(píng)價(jià)TCTP在正常人以及病人血清中的含量。構(gòu)建SHRNA質(zhì)粒表達(dá)載體，質(zhì)粒酶切以及測(cè)序鑒定表明質(zhì)粒構(gòu)建成功。下調(diào)TCTP在LOVO細(xì)胞中的表達(dá)，經(jīng)熒光顯微鏡觀察各組LOVO細(xì)胞均出現(xiàn)綠色報(bào)告熒光，RT。PCR，WESTERNBLOTTING，QRTPCR分析鑒定TCTP的表達(dá)下調(diào)分別達(dá)至T82％、89％、73％。TCTP下調(diào)能夠體外減慢LOVO細(xì)胞的增殖速度，SHRNATCTP，SHRNATCTPLOVOPARENTAL組分別鋪96孔板，每孔細(xì)胞數(shù)2000個(gè)。每株細(xì)胞5個(gè)復(fù)孔，鋪7塊板，連續(xù)測(cè)量7天。從第4天開始，SHRNATCTP組生長(zhǎng)速度明顯慢于SHNCRNATCTP組和NC組，經(jīng)過統(tǒng)計(jì)學(xué)分析后，SL刪ATCTP組在測(cè)量第1F1773P005、2F0048，P005、3F7865P005天時(shí)，11

簡(jiǎn)介：2002年西藏地區(qū)乙型肝炎病毒HBVHEPATITISB基因型分布的研究首次報(bào)道了S區(qū)同源性分析屬于D基因型而C區(qū)同源性分析為C基因型的毒株。隨后他們對(duì)這種毒株進(jìn)行了HBV全基因序列擴(kuò)增和測(cè)序在對(duì)全基因序列的家系進(jìn)化和重組分析中發(fā)現(xiàn)這種S區(qū)與C區(qū)分型不一致的毒株是C型HBV在NT511450區(qū)段重組了D基因型而出現(xiàn)的結(jié)果并推測(cè)這種特殊的HBVCD重組體是西藏地區(qū)流行的HBV優(yōu)勢(shì)毒株。隨后我室在對(duì)全國(guó)進(jìn)行HBVC基因亞型調(diào)查時(shí)發(fā)現(xiàn)在甘肅臨夏地區(qū)回族人群中亦有HBVCD的存在。與前述報(bào)道不同的是我們首次發(fā)現(xiàn)了在S區(qū)NT10799重組了D基因型的HBVCD重組體其中D基因型占整個(gè)HBV基因組的25％只有少數(shù)是與前述西藏地區(qū)相同的HBVCD重組體這種重組體的D基因型占整個(gè)HBV基因組的46％。在對(duì)兩種重組體進(jìn)行全基因組擴(kuò)增測(cè)序并進(jìn)行進(jìn)化樹分析以后我們發(fā)現(xiàn)以全基因組構(gòu)建的進(jìn)化樹中這兩種重組體屬于HBVC基因型的大分支但構(gòu)成了與C1C5亞型不同的兩個(gè)分支因此也可以將其命名為C6和C7亞型。由此我們將重組區(qū)段較短的HBVCD重組體稱為HBVCD1C6亞型而將重組區(qū)段較長(zhǎng)的HBVCD重組體稱為HBVCD2C7亞型。為了解HBVCD1和HBVCD2這兩種重組體的特征我們首先調(diào)查了HBVCD重組體在西北五省不同地區(qū)和不同民族中的分布。采用聚合酶鏈反應(yīng)一限制性片斷長(zhǎng)度多態(tài)性PCRRFLP法對(duì)來自西北五省份的1000例慢性HBV感染者血清進(jìn)行了HBV基因分型同時(shí)對(duì)部分CD重組體標(biāo)本進(jìn)行了全基因序列擴(kuò)增和測(cè)序。在西北五省中西藏地區(qū)和青海省的HBV主要流行株為CD重組體HBVCD的感染占到整個(gè)HBV感染的64％和55％；甘肅和寧夏兩省的少數(shù)民族地區(qū)則以C型為主要流行株CD重組體是流行率位于第二位的毒株在兩省的流行率分別為27％和15％；新疆地區(qū)維族人群以D基因型和C基因型為主要流行株HBVCD重組體僅占4％。HBVCD重組體的分布在不同省份差異有顯著性X22966P0000。在調(diào)查的漢、藏、回、維吾爾四個(gè)民族中HBVCD重組體是藏族人群中的優(yōu)勢(shì)基因型占HBV總感染人群的65％；在回族人群中占30％；在西北地區(qū)藏族和回族聚居地及聚居地附近的漢族人群中占21％；在新疆維吾爾族人群的HBV感染中僅占4％。各民族之間的基因型分布差異有顯著性X21188P0000。HBVCD在西藏青海甘肅各地區(qū)不同民族間的分布差異有顯著性西藏地區(qū)漢族為10％藏族為79％X283156P0000；青海漢族33％、藏族67％、回族50％X242043P0000甘肅漢族13％、藏族31％、回族61％X254409P0000；在寧夏回族15％和甘肅回族61％人群中的流行率差異有顯著性X236555P0000。HBVCD1和HBVCD2的分布在西藏和青海不同地區(qū)差異有顯著性X291921P0000。因此認(rèn)為HBVCD重組體在西北五省不同地區(qū)和不同民族中的分布有特殊的規(guī)律。為進(jìn)一步了解HBVCD重組體與我國(guó)西北地區(qū)流行的其他基因型在臨床和病毒學(xué)特征上是否有差別。我們?cè)O(shè)計(jì)了臨床對(duì)照實(shí)驗(yàn)比較了HBVCD重組體與西北地區(qū)其它常見基因型B、C、和D在臨床特征方面的差異。同時(shí)我們還調(diào)查了C和CD重組體兩種基因型毒株在前C和C區(qū)常見變異位點(diǎn)發(fā)生變異模式的差別。我們對(duì)來自西北五個(gè)臨床中心的507份慢性HBV感染者標(biāo)本的臨床資料和HBV基因分型結(jié)果進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)學(xué)對(duì)比分析同時(shí)隨機(jī)選取以上臨床中心的標(biāo)本中CD重組體和C基因型共356份慢性HBV感染者血清標(biāo)本進(jìn)行了前C及C基因區(qū)的序列擴(kuò)增和分析。結(jié)果顯示四組基因型病例在年齡和性別構(gòu)成比無差異的情況下各基因型間ALT水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；TBIL水平在各組之間差異有顯著性F3555P0014其中CD重組體的TBIL水平最低平均值為193±287而B基因型的TBIL水平最高平均值為463±719。HBEAG陽性率在各組之間差別也有顯著性X230422P0000其中只有CD重組體的HBEAG陽性數(shù)大于陰性數(shù)而其它基因型均為HBEAG陰性數(shù)大于陽性數(shù)。HBVC和CD重組體兩種基因型在前C及C區(qū)常見變異位點(diǎn)發(fā)生變異的模式上前C區(qū)A1896位點(diǎn)的變異PC變異在兩種基因型之間的差異存在顯著性X29525P0002其中CD重組體PC變異的頻率低于基因型C；同時(shí)核心啟動(dòng)子BCP雙變異在兩種基因型間差異也存在顯著性X25466P0019其中C基因型BCP變異的頻率低于CD重組體。提示HBVCD重組體有不同于西北地區(qū)流行的其它基因型毒株的臨床和病毒學(xué)特征。為進(jìn)一步探討HBVCD重組體是否由HBVC基因型和HBVD基因型的共同感染和隨后的重組產(chǎn)生并探明HBVCD重組體的變異速率。我們收集了三個(gè)存在不同HBV基因型混合感染的家庭和一個(gè)單純感染了HBVCD重組體的家庭。對(duì)四個(gè)家庭各成員的HBV全基因或部分序列進(jìn)行了克隆和分析并對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行了異質(zhì)性分析和構(gòu)建進(jìn)化樹。結(jié)果我們應(yīng)用三代成員均有HBVCD重組體感染的序列計(jì)算出HBVCD重組體的變異率為35105每位點(diǎn)每年。經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)有不同基因型混合感染者的個(gè)體中分離的準(zhǔn)種序列在不同基因型間的序列異質(zhì)性較小而在同種基因型間的序列異質(zhì)性較大。在采用準(zhǔn)種異質(zhì)性最大的個(gè)體NT641200所構(gòu)建的進(jìn)化樹中我們看到基因型C2和CD重組體之間沒有明顯的界限而且可看到從基因型C到CD重組體的漸變演化過程。這可能提示HBVCD重組體并非基因型C和基因型D之間重組產(chǎn)生的產(chǎn)物而只是與基因型C異質(zhì)性較大的準(zhǔn)種株在某些個(gè)體中這種準(zhǔn)種因?yàn)楦m合于宿主而被選擇成為優(yōu)勢(shì)株。為了解HBVCD重組體和基因型C、基因型D在體外的復(fù)制特性差別我們構(gòu)建了HBVCD重組體和基因型C、基因型D的13拷貝HBV并通過瞬時(shí)轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞系HEPG2來研究HBV的復(fù)制及蛋白表達(dá)情況。我們構(gòu)建了2株HBVC基因型、2株HBVD基因型和3株HBVCD重組體毒株的13拷貝HBV序列將13拷貝HBV全基因序列與PUC19質(zhì)粒相連。經(jīng)測(cè)序證實(shí)插入序列的正確性后提取質(zhì)粒用脂質(zhì)體法瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HEPG2細(xì)胞并對(duì)轉(zhuǎn)染后72小時(shí)的細(xì)胞培養(yǎng)上清和細(xì)胞中的HBSAG和HBEAG分別進(jìn)行了定量檢測(cè)。結(jié)果證明轉(zhuǎn)染的13拷貝HBV能夠在HEPG2細(xì)胞中進(jìn)行轉(zhuǎn)錄和翻譯在細(xì)胞培養(yǎng)上清和細(xì)胞內(nèi)均可測(cè)到HBSAG和HBEAG為研究CD重組體與基因型C和基因型D在體外的復(fù)制差別搭建了平臺(tái)。

簡(jiǎn)介：第二軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文乙型肝炎病毒相關(guān)肝癌的比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究姓名范薇薇申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師王紅陽20050401第二軍醫(yī)大學(xué)縮略詞表碩士學(xué)位論文縮略詞表HBVHEPATITISBVJRUS乙型肝炎病毒HCCH印ATOCELLLLLARCARCMOMA肝細(xì)胞癌2DETWODIMENSIONGELELECTROPHORESIS一維凝膠電泳}毋XHEPATITI8BVIRUSXPROTEIN乙型肝炎X蛋白AFPⅡ一FETOPROTEIL3甲胎蛋白GFPGREENF1UOROSCENTPROTEIN綠色熒光蛋白CPECYTOPATHICEFFECT細(xì)胞病變效應(yīng)MOIMULTIPLICITY0FINFECTION感染復(fù)數(shù)ICAT1SOTOPECODEDAFFINITYTAG同位素標(biāo)記親和定量技術(shù)IAAIODOACETAMIDE碘乙酰胺HNRNPKHETEROGENEOUSNUCLEARRIBONUCLEOPROTEINK異種核糖核蛋白體KFBSFETABOYIFIESERUM胎牛血清PAGEPOLYACYLAMIDEGELELECTROPHORESIS聚丙烯酰胺凝膠電泳PCRPOLYMERASECHAINREACTIOIL聚合酶聯(lián)反應(yīng)PMSFPHENYLMETHYLSULFONYLFLUORDE苯甲基磺酰氟

簡(jiǎn)介：研究生導(dǎo)師及課題組成員簡(jiǎn)介導(dǎo)師S王郡甫男，1965年11月出生，醫(yī)學(xué)免疫學(xué)博士，研究員，碩士生導(dǎo)師。主要從事基因工程，腫瘤免疫學(xué)等方向研究。課題指導(dǎo)小組其他成員；許曉群男，1975年6月出生，碩士，副研究員，主要從事分子免疫學(xué)方面的研究。張建華女，1953年8月出生，副主任技師，主要從事細(xì)胞生物學(xué)方面的研究。目錄摘要IIABSTRACTⅣ符號(hào)說明VII前言1正文3第一部分人IL24的EDNA獲取及克隆載體的構(gòu)建31實(shí)驗(yàn)材料和儀器311主要實(shí)驗(yàn)材料312主要儀器設(shè)備一713主要實(shí)驗(yàn)方法82實(shí)驗(yàn)結(jié)果133第一部分附錄圖表15第二部分PADMDA7／IL24腺病毒表達(dá)載體的構(gòu)建L81實(shí)驗(yàn)材料與方法1811主要實(shí)驗(yàn)材料L812主要儀器設(shè)備2113主要實(shí)驗(yàn)方法222實(shí)驗(yàn)結(jié)果303第二部分附錄圖表3L第三部分ADMDA一7／IL24腺病毒感染喉癌細(xì)胞HEP2及對(duì)HEP2的生物學(xué)影響351實(shí)驗(yàn)材料與方法3511主要實(shí)驗(yàn)材料3512主要儀器設(shè)備3713主要實(shí)驗(yàn)方法382實(shí)驗(yàn)結(jié)果4L3第三部分附錄圖表42討論“44，J、結(jié)48參考文獻(xiàn)49文獻(xiàn)綜述52攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文6L虱【謝62