簡介：目的通過體外不同條件培養(yǎng)腎小球內(nèi)皮細胞，觀察血管生成素（ANGIOPOIETIN，ANG）及其受體TIE2、血管內(nèi)皮生長因子（VULARENDOTHELIALGROWTHFACT，VEGF）表達變化規(guī)律，探討ANGTIE2、VEGF對腎小球內(nèi)皮細胞功能的影響。方法（1）體外培養(yǎng)小鼠腎小球內(nèi)皮細胞，采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應（REVERSETRANIONPOLYMERASECHAINREACTION，RTPCR）方法觀察正常糖對照組（DGLUCOSE56MMOLL，NG）、高滲對照組（MANNITOL25MMOLLDGLUCOSE56MMOLL，DM）、高糖刺激組（DGLUCOSE30MMOLL，HG）不同時間點刺激小鼠腎小球內(nèi)皮細胞后，ANG1、ANG2、TIE2、VEGFMRNA表達的變化。（2）脂質(zhì)體分別轉(zhuǎn)染針對ANG2基因的PCDNA31ANG2質(zhì)粒和ANG2SIRNA，24H后RTPCR法檢測腎小球內(nèi)皮細胞ANG2MRNA表達變化情況。（3）四甲基偶氮唑藍比色法（MTT）法觀察高糖刺激和轉(zhuǎn)染PCDNA31ANG2質(zhì)粒24H后腎小球內(nèi)皮細胞的增殖情況。（4）TRANSWELL小室法觀察高糖刺激腎小球內(nèi)皮細胞24H后細胞遷移率變化情況。結(jié)果1高糖刺激組ANG1MRNA在12H表達明顯抑制，24H、72H、96H表達明顯上調(diào)，差異有統(tǒng)計學意義，0H、48H較正常對照組表達無明顯變化。高糖刺激組ANG2MRNA僅在24H、72H、96H表達明顯上調(diào)，而在0H、12H、48H與正常對照組比較表達無明顯變化。高糖刺激組TIE2MRNA在24H、72H、96H較正常對照組表達明顯升高，在0H、12H、48H與正常對照組比較無統(tǒng)計學差異。（2）高糖刺激組VEGFMRNA在24H、72H、96H較正常對照組表達明顯升高，在0H、12H、48H與正常組比較無統(tǒng)計學差異。（3）轉(zhuǎn)染PCDNA31ANG2質(zhì)粒和ANG2SIRNA24H后，PCDNA31ANG2質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組較正常糖對照組ANG2MRNA明顯升高，ANG2SIRNA轉(zhuǎn)染組較高糖刺激組ANG2MRNA明顯抑制，差異有統(tǒng)計學意義。4PCDNA31ANG2質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組細胞增殖較正常對照組明顯增快，差異有統(tǒng)計學意義。（5）高糖刺激組與正常糖對照組比較，高糖刺激組腎小球內(nèi)皮細胞遷移率明顯升高，與正常糖對照組比較差異有統(tǒng)計學意義。結(jié)論（1）體外培養(yǎng)腎小球內(nèi)皮細胞可穩(wěn)定表達ANG1、TIE2、VEGF，高糖可誘導腎小球內(nèi)皮細胞ANG2MRNA表達。高糖環(huán)境可引起腎小球內(nèi)皮細胞ANGTIE2、VEGFMRNA表達的改變，并呈時間依賴性。（2）ANG2可促進腎小球內(nèi)皮細胞的增殖，高糖可促進腎小球內(nèi)皮細胞的遷移。

簡介：分類號密級國際十進分類號（UDC）第四軍醫(yī)大學學位論文牙齦卟啉單胞菌對人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞的生物學效應（題名和副題名）王曉燕（作者姓名）指導教師姓名王勤濤教授（主任醫(yī)師）指導教師單位第四軍醫(yī)大學口腔醫(yī)院牙周黏膜病科申請學位級別碩士專業(yè)名稱口腔臨床醫(yī)學（口腔內(nèi)科學）論文提交日期200804答辯日期200805論文起止時間2007年03月至2008年05月學位授予單位第四軍醫(yī)大學牙齦卟啉單胞菌對人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞的生物學效應研究生王曉燕學科專業(yè)口腔臨床醫(yī)學（口腔內(nèi)科學）所在單位第四軍醫(yī)大學口腔醫(yī)院牙周黏膜病科導師王勤濤教授（主任醫(yī)師）資助基金項目“資助基金項目“十一五”國家科技支撐計劃2007BAI18B02關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞牙齦卟啉單胞菌人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學2008年05月

簡介：山東大學碩士學位論文體外擴增臍血巨核細胞的生物學特性及其體內(nèi)功能的研究姓名王海蓮申請學位級別碩士專業(yè)兒科學指導教師鞠秀麗20080506山東大學碩士學位論文MKMNCMEGAKARYOCYTEMONONUCLEARCELLS巨核細胞單個核細胞NOD／SCIDNONOBESEDIABETICSEVERECOMBINEDIMMUNODEFICIENT非糖尿病PBSPCRPDGFPEPISCFTNFTPOTXSLOPHOSPHATEBUFFEEDSALINEPOLYMETASECHAINREACTION免疫缺陷磷酸鹽緩沖液多聚酶鏈反應PLATELETDERIVEDGROWTHFACTOR血小板衍生生長因子PHYCOERYTHRINPROPIDIUMIODIDESTEMCELLFACTORTURNORNECROSISFACTORTHROMBOPOIETINTHROMBOXANSYNASE藻紅蛋白碘化丙啶千細胞因子腫瘤壞死因子血小板生成素血栓素合成酶

簡介：目的1擬建立穩(wěn)定的小鼠子宮蛻膜基質(zhì)細胞DSC培養(yǎng)方法，觀察DSC形態(tài)特征和生物學特性。2在體外建立穩(wěn)定的從小鼠骨髓來源的單核細胞誘導成熟樹突狀細胞DC的培養(yǎng)體系，觀察DC形態(tài)特征和生物學特性。3建立細胞共培養(yǎng)模型，初步探討小鼠蛻膜基質(zhì)細胞對成熟DC增殖的影響，為進一步研究DC在誘導母胎免疫耐受中的作用打下良好的基礎。方法1選用孕齡68D的C57BL6孕鼠蛻膜組織，采用胰蛋白酶、膠原酶、透明質(zhì)酸酶混合消化，進行蛻膜基質(zhì)細胞體外培養(yǎng)。倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)學變化；催乳素PRL免疫組織化學染色進行細胞鑒定；RTPCR檢測DSC表達的細胞因子和趨化因子。2應用粒細胞巨噬細胞集落刺激因子GMCSF和白細胞介素4IL4誘導培養(yǎng)小鼠骨髓細胞，相差顯微鏡觀察形態(tài)學變化；FACS檢測細胞表面分子；3HTDR摻入法檢測DC刺激同種異體或同體T細胞增殖能力；ELISA檢測其分泌的細胞因子。3采用小鼠子宮DSC和成熟DC共培養(yǎng)技術(shù)，建立細胞共培養(yǎng)模型，觀察DSC對DC增殖的影響。結(jié)果1小鼠子宮DSC在接種24H后大部分已貼壁，貼壁生長的細胞成纖維母細胞狀，57D后細胞融合成單層。每45D傳代1次，傳代的細胞形態(tài)無明顯變化，而傳代培養(yǎng)極性漸不明顯。PRL免疫組化顯示體外培養(yǎng)傳代后95％陽性細胞為蛻膜基質(zhì)細胞，細胞大小形狀均一，染色特點為胞質(zhì)內(nèi)可見細小的棕色顆粒，且越近胞核染色越深。RTPCR檢測DSC表達GMCSF、血管內(nèi)皮生長因子VEGF、白介素2IL2、白介素10IL10等細胞因子；表達單核細胞趨化蛋白2MCP2、單核細胞趨化蛋白3MCP3、胸腺活化相關(guān)的趨化性因子TRAC等趨化因子。2用GMCSFIL4細胞因子聯(lián)合培養(yǎng)3D后，有細胞集落形成；培養(yǎng)第5D開始，一部分細胞從集落脫落，懸浮于培養(yǎng)基中，呈現(xiàn)樹枝狀不規(guī)則變化；脂多糖LPS誘導后，成簇的細胞散開，大量的細胞脫落，多數(shù)為圓形或不規(guī)則形，表面有豐富的伸長毛刺的低密度大細胞。成熟DC高表達DC相對特異性標志CD11C、共刺激分子CD80、CD86、MHCII分子IA和I類分子H2KB。DC具有強烈的激活T細胞增殖的能力；1000個DC，即可有效激發(fā)T細胞增殖。LPS刺激成熟8DDC與未經(jīng)LPS刺激5DDC，其刺激同種異體或同體T細胞增殖能力明顯增高，結(jié)果比較差異有統(tǒng)計學意義。并且在各組中隨著DCT比例增加，其刺激T細胞增殖能力增強，結(jié)果比較差異有統(tǒng)計學意義。經(jīng)LPS刺激的成熟DC分泌細胞因子IL12P70、IL6、TNFA和IL1B的水平明顯升高，與未經(jīng)LPS刺激的PBS組結(jié)果比較差異有統(tǒng)計學意義。3成熟DC能在DSC單層上繼續(xù)生長，沒有隨著培養(yǎng)時間的延長而走向自然凋亡，第15D鏡下觀察形成細胞集落，發(fā)生了克隆性增殖。結(jié)論1建立的混合酶消化全組分蛻膜的方法，簡化了DSC的提純程序，能獲得高純度的合乎實驗要求的DSC，具有經(jīng)濟、實用、方便、可靠的特點。2細胞因子組合GMCSFIL4LPS在體外具有誘導小鼠骨髓來源的單核細胞分化為成熟DC的作用，建立的體外誘導小鼠骨髓單核細胞的方法可以獲得形態(tài)、表型和功能都非常典型的成熟DC，方法簡便。3小鼠子宮DSC組成的微環(huán)境能逆轉(zhuǎn)成熟DC的自然凋亡，使其重新獲得增殖的能力。

簡介：目的NK細胞是天然免疫系統(tǒng)的主要效應細胞，具有廣泛的生物學功能，位于機體抵抗腫瘤和病毒感染的第一道防線；不需要預先刺激即可識別并殺傷腫瘤和病毒感染的細胞，同時又能通過早期分泌多種細胞因子如IFΓ、GMCSF和TNFΒ和趨化因子來調(diào)節(jié)獲得性免疫應答，因此，是連接天然免疫和獲得性免疫的橋梁。NK細胞及其分泌的細胞因子不僅參與調(diào)節(jié)天然免疫和獲得性免疫，而且參與調(diào)節(jié)造血系統(tǒng)的功能，在血液系統(tǒng)疾病，尤其是異基因骨髓移植中，在抑制和預防GVHD，促進GVT效應和促進血液和免疫系統(tǒng)重建方面起重要作用。同時，NK細胞對自身免疫性疾病的調(diào)節(jié)亦引起了人們的重視。因此，盡管關(guān)于NK細胞的發(fā)育分化和識別功能的研究遠遠滯后于T細胞和B細胞，近年來，關(guān)于NK細胞功能和調(diào)節(jié)的研究引起了人們極大的興趣，并有了突飛猛進的發(fā)展，成為免疫學研究的一大熱點。近期的研究發(fā)現(xiàn)，NK細胞表面存在識別靶細胞表面分子的活化受體和抑制性受體，NK細胞的效應功能取決于活化信號與抑制性信號的綜合。抑制性受體能特異性識別靶細胞表面的MHCⅠ類分子并保護正常細胞不被殺傷，人的NK細胞抑制性受體主要有殺傷細胞免疫球蛋白樣受體KILLERCELLIGLIKERECEPTS，KIR和凝集素樣受體CD94NKG2A，在調(diào)節(jié)NK細胞功能方面起重要作用?；罨荏w識別經(jīng)典、非經(jīng)典的MHCⅠ類分子或MHCⅠ類相關(guān)分子，在NK活化的啟動方面起關(guān)鍵作用，其中尤為引人注目的是NKG2D，NKG2D的配基為非經(jīng)典的MHC樣分子MICAMHCCLASSⅠCHAINRELATEDA、MICBMHCCLASSⅠCHAINRELATEDB及ULBPUL16BINDINGPROTEIN，這些分子在許多上皮及非上皮來源的腫瘤細胞、病毒感染細胞和受到“應激性刺激”的細胞均有表達或上調(diào)。研究表明，NKG2D的單獨活化即足以刺激NK細胞的活化，并能克服抑制性受體的強勢信號，因此，在NK細胞活化過程中起著舉足輕重的作用。而NKG2D配體的表達水平，可能決定著NKG2D的活化與否。目前世界上有六株細胞系被確認具有典型NK細胞標志，它們是YT、NK92、NKL、HANK1、KHYG1和NKYS。這些細胞系的免疫表型為CD1CD2CD3CD4CD5CD7CD8。CD16CD56CD57，具有NK活性，有無ADCC效應。在這些細胞系中，YT細胞，來自一急性淋巴母細胞淋巴瘤和和胸腺瘤患者，1985年建系，為IL2非依賴或低依賴細胞系，具有NK細胞的典型表面標志，但由于長期在實驗室傳代培養(yǎng)，只能檢測到NKG2B和NKG2D的MRNA表達，而不能檢測到其蛋白的表達。YT細胞相對于NK92和NKL細胞而言，其殺傷活性相對較地低。該研究選用YT細胞作為NKG2B和NKG2D轉(zhuǎn)染細胞的受體，來探討NKG2B和NKG2D分子的作用機制。方法1NKG2B和NKG2D克隆載體的構(gòu)建。從NK細胞系NK92細胞中經(jīng)RTPCR技術(shù)獲得NKG2BCDNA和NKG2DCDNA，與PGEMTEASY連接及轉(zhuǎn)化大腸桿菌后，構(gòu)建NKG2B和NKG2D克隆載體，進行DNA序列測定2NKG2B和NKG2D真核表達載體的構(gòu)建。應用限制性內(nèi)切酶將NKG2B和NKG2D基因從克隆載體上切下來，連接到熒光真核表達載體PEGFPN1上，構(gòu)建PGEMTEASYNKG2B和PGEMTEASYNKG2D真核表達載體3真核表達載體在CHO細胞中的表達及鑒定。將篩選出的PEGFPN1NKG2B和PEGFPN1NKG2D質(zhì)粒通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染到CHO細胞中，經(jīng)G418篩選，克隆，RTPCR鑒定NKG2B和NKG2DMRNA的表達，熒光顯微鏡、WESTERNBLOT和免疫組化方法鑒定NKG2B和NKG2D蛋白的表達4真核表達載體轉(zhuǎn)染YT細胞及對YT細胞生物學功能影響。將PEGFPN1NKG2B和PEGFPN1NKG2D質(zhì)粒通過脂質(zhì)體分別轉(zhuǎn)染到Y(jié)T細胞中，MTT方法檢測YT細胞轉(zhuǎn)染前后的增殖情況與對OMDA231、PG、HEP2和RAJI腫瘤細胞的殺傷情況，RTPCR技術(shù)檢測殺傷相關(guān)分子中，抗病毒分子IFNΓ、細胞增殖分子IL2、溶膜分子PERFIN和誘導細胞凋亡分子家族TNF超家族TNFΑ、FASFASL、TRAIL、TWEAK的轉(zhuǎn)錄水平，并同時設置ΒACTIN為RTPCR系統(tǒng)的內(nèi)參照。結(jié)果一、NKG2B和NKG2D全長CDNA的克隆提取新鮮培養(yǎng)的NK92細胞的總RNA，取5UG總RNA為模板，以OLIGODT為引物進行逆轉(zhuǎn)錄反應。然后用NKG2B和NKG2D的特異引物進行PCR反應，PCR產(chǎn)物經(jīng)電泳鑒定和與PGEMTEASY載體連接、酶切鑒定后測序，證實已獲得的CDNA為NKG2B和NKG2D的全長CDNA，結(jié)果與文獻報道一致。二、PEGFPN1NKG2B和PEGFPN1NKG2D重組表達載體的構(gòu)建用PSTⅠ和XHOⅠ從克隆載體PGEMTEASYNKG2B切下NKG2B片段，與經(jīng)相同雙酶切的PEGFPN1質(zhì)粒進行粘端連接；同樣用ECⅠ和BAMHⅠ從克隆載體PGEMTEASYNKG2D切下NKG2D片段，與經(jīng)相同雙酶切的PEGFPN1質(zhì)粒進行粘端連接。產(chǎn)物轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸桿菌HB101，利用PCR篩選陽性克隆，提取純化PCR陽性重組質(zhì)粒進行雙酶切鑒定，經(jīng)PCR和雙酶切鑒定陽性的克隆即為構(gòu)建好的PEGFPN1NKG2B和PEGFPN1NKG2D重組表達載體。三、NKG2B和NKG2D在CHO細胞中的表達應用脂質(zhì)體法將構(gòu)建好的PEGFPN1NKG2B和PEGFPN1NKG2D重組表達質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染CHO細胞，G418篩選培養(yǎng)基培養(yǎng)后，挑選抗性克隆，RTPCR鑒定MRNA的表達，熒光顯微鏡下觀察有綠色熒光發(fā)出、WESTERNBLOT和免疫組化方法鑒定蛋白的表達。結(jié)果顯示構(gòu)建的PEGFPN1NKG2B和PEGFPN1NKG2D質(zhì)粒能夠轉(zhuǎn)染CHO細胞并且有NKG2B和NKG2D的蛋白表達。四、NKG2B和NKG2D真核表達載體轉(zhuǎn)染YT細胞及對其生物學功能影響應用脂質(zhì)體法將構(gòu)建好的PEGFPN1NKG2B和PEGFPN1NKG2D重組表達質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染YT細胞，MTT方法測定轉(zhuǎn)染前后的細胞增殖效應和對OMDA231、PG、HEP2和RAJI腫瘤細胞的殺傷情況，RTPCR技術(shù)檢測殺傷功能相關(guān)分子的變化。結(jié)果顯示YT細胞轉(zhuǎn)染前后增殖效應沒有變化；NKG2B轉(zhuǎn)染YT細胞后對OMDA231、PG、HEP2細胞殺傷活性無變化，而對RAJI有增強作用，殺傷相關(guān)分子IFNΓ、FASL、TRAIL有明顯降低。NKG2D轉(zhuǎn)染YT細胞后對OMDA231、PG、HEP2和RAJI細胞殺傷活性均有增強作用，殺傷相關(guān)分子IFNΓ、IL2、TNFΑ、PERFIN、TWEAK有明顯增強。結(jié)論1通過基因工程技術(shù)獲得了全長的NKG2B和NKG2D基因片段，并且測序正確，成功構(gòu)建了PEGFPN1NKG2B和PEGFPN1NKG2D真核表達載體。2經(jīng)轉(zhuǎn)染CHO細胞后，能夠在熒光顯微鏡下發(fā)出綠色熒光，RTPCR檢測出MRNA的表達，WESTERNBLOT和免疫組化方法鑒定蛋白的表達。3轉(zhuǎn)染YT細胞，轉(zhuǎn)染前后增殖效應沒有變化；NKG2B轉(zhuǎn)染YT細胞后對OMDA231、PG、HEP2細胞殺傷活性無變化，而殺傷相關(guān)分子IFNΓ、FASL、TRAIL有明顯降低。NKG2D轉(zhuǎn)染YT細胞后對OMDA231、PG、HEP2和RAJI細胞殺傷活性均有增強作用，殺傷相關(guān)分子IFNΓ、IL2、TNFΑ、PEFFIN、TWEAK有明顯增強。4NKGB和NKG2D基因修飾YT細胞為使用NK細胞系進行細胞治療奠定了理論和技術(shù)基礎。研究表明，YT細胞一方面可以作為基礎研究的工具，用于研究NK細胞分化發(fā)育和對腫瘤細胞殺傷機理的探討，闡明NKG2受體對NK細胞活性的調(diào)節(jié)機制，另一方面，通過基因修飾，可以有目的、有針對性地對NK細胞進行修飾，使得NK細胞更適合臨床過繼免疫治療腫瘤的應用。

簡介：安徽醫(yī)科大學碩士學位論文安徽醫(yī)科大學ANHUIMEDICALUNIVERSITY碩士學位論文非小細胞肺癌患者DAPK基因甲基化研究與去甲基化對肺癌細胞生物學行為的影響STUDIESOFNONSMALLCELLLUNGCANCERPATIENTSWITHDAPKGENEMETHYLATIONTHEEFFECTOFDEMETHYLATIONONTHEBIOLOGICALBEHAVIOFLUNGCARCINOMACELLS宋超指導教師指導教師薛紹禮薛紹禮教授教授學科學科專業(yè)專業(yè)生物化學與分子生物學生物化學與分子生物學研究方向研究方向肺癌基因血清學指標的研究肺癌基因血清學指標的研究論文工作時間論文工作時間2011年3月至月至2013年3月2013年4月安徽醫(yī)科大學碩士學位論文目錄中文摘要1英文摘要3前言5第一部分摘要（中文）6摘要（英文）7引言8材料和方法8結(jié)果14討論16結(jié)論19參考文獻20第二部分摘要（中文）22摘要（英文）23引言25材料和方法25結(jié)果32討論39結(jié)論41參考文獻42

簡介：成人骨髓間充質(zhì)干細胞生物學特性及體外誘導分化為神經(jīng)元樣細胞的實驗研究THEEXPERIMENTALSTADY砸璜嘶IGICALCH甜幻時碗BANDDIFLLACMIATIONINTOSTEMEELSILIV舢學科門類醫(yī)學學科、專業(yè)外科學骨外科研究方向年級研究生姓名導師姓名起止日期脊柱脊髓損傷與修復2006級胡資兵曾榮教授200710200809廣東醫(yī)學院附屬醫(yī)院骨外科2009年5月學位論文獨創(chuàng)性聲明9IIIIIIIIIIIJIIIIJIIIIIIIIIIII10Y2013073本人呈交的學位論文系在導師指導下所取得的研究成果。除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果，也不包含為獲得廣東醫(yī)學院或其他教育機構(gòu)的學位或證書所使用過的材料。作者簽名彈三壘蘭日期蘭墨壘學位論文知識產(chǎn)權(quán)聲明本人在就讀研究生期間所完成的學位論文及其相關(guān)成果，知識產(chǎn)權(quán)歸屬學校。本人在畢業(yè)離校前會將有關(guān)的研究資料和結(jié)果全部上交導師，離校后發(fā)表或使用學位論文或與該論文直接相關(guān)的學術(shù)論文或成果時，署名單位仍然為廣東醫(yī)學院。學?？梢詫W位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編學位論文，可以公布包括刊登論文的全部或部分內(nèi)容。導師享有發(fā)表學位論文、申請成果和專利的權(quán)利。注保密的學位論文在解密后適用本聲明。作者簽名導師簽名硼竣乎諺學日期日期竺竺蘭蘭

簡介：中國人民解放軍軍醫(yī)進修學院中國人民解放軍總醫(yī)院碩士學位論文源于健康人與肝癌患者CIK細胞的生物學特性及抗癌活性的對比研究姓名劉巖青申請學位級別碩士專業(yè)肝膽外科指導教師董家鴻王悅?cè)A20080529軍醫(yī)進修學院碩士學位論文殖活性；在流式細胞儀上做動態(tài)培養(yǎng)物的表型分析；并用MTT法檢測兩種來源CIK細胞殺傷SMMC一7721肝癌細胞的活性。結(jié)果1．兩種來源CIK細胞的增殖性能無明顯區(qū)別，PO．05。CIK細胞具有培養(yǎng)方法簡易、擴增迅速，兩種來源CIK細胞前后擴增分別達到152．667107、143．500X107。2．以SMMC7721肝癌為靶細胞，在1．25I10L的效靶比范圍內(nèi)，兩種來源的CIK細胞的殺傷活性均無明顯差異。但對SMMC一7721肝癌細胞殺傷明顯。兩種來源CIK細胞在效靶比為101時對肝癌細胞的殺傷率最高，分別為0．262、0．260。3．兩種來源CIK細胞表面分子CD3CD56、CD45RA的變化無明顯差異，源于肝癌患者CIK細胞的CD8的陽性率與源于健康人CIK細胞的CD8的陽性率有明顯差異，前者高于后者；但隨著培養(yǎng)時間的延長，兩種來源CIK細胞中CD3CD56雙陽性細胞和CD8細胞的百分含量逐漸升高，而CD45RA細胞的百分含量逐漸減少。結(jié)論源于健康人CIK細胞與源于肝癌患者CIK細胞的生物學特性、增值活性及細胞毒活性均無明顯差異；源于肝癌患者CIK細胞的CD8陽性率高于健康人來源的CIK細胞CD8陽性率，CD3CD56、CD45RA的陽性率無明顯差異。CIK細胞培養(yǎng)簡易、擴增迅速。對肝癌細胞SMMC一7721殺傷率高。具有良好的臨床應用前景。第二部分CIK細胞聯(lián)合化療的抗腫瘤研究目的觀察CIK細胞表型、體外增殖活性和細胞毒活性變化，并探討CIK細胞對化療的輔助治療作用。方法提取健康供血者的PBMC，常規(guī)誘導出CIK細胞，動態(tài)觀察培養(yǎng)物增殖活性和表型變化；并用MTT法測定其體外細胞毒活性；在BALB／C裸鼠皮下接SMMC7721肝癌細胞，化療后應CIK細胞進行免疫治療，分成對照組、4

簡介：中山大學碩士學位論文低分子肝素及肝素結(jié)合型表皮生長因子對人早孕期滋養(yǎng)細胞生物學功能的影響姓名吳曉霞申請學位級別碩士專業(yè)婦產(chǎn)科學指導教師張建平20070520◇之童碩士論文中文摘要2、探討LMWH是否可以對體外培養(yǎng)的滋養(yǎng)細胞產(chǎn)生作用，影響其增殖、侵襲及分化能力。3、LML|『H、HBEGF單獨或共同作用于滋養(yǎng)細胞，觀察Ⅲ州和HBFM；F是否存在對滋養(yǎng)細胞影響的相互作用。研究方法1滋養(yǎng)細胞的分離、培養(yǎng)及鑒定人早孕期絨毛組織取自復旦大學附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院5～10孕周行人工流產(chǎn)的正常妊娠婦女。按照胰蛋白酶／DNA酶I消化和密度梯度離心兩步法分離滋養(yǎng)細胞。分離后的細胞用免疫細胞化學法鑒定細胞及其純度。20％胎牛血清的叫跚高糖培養(yǎng)液體外培養(yǎng)。2姍H對人早孕期滋養(yǎng)細胞生物學功能的影響21實驗分組LMWH組成分為ENOXAPARIN，藥物終濃度為0025IU／M1、025IU／M1、25IU／ML、25IU／M1、250IU／M1，對照組即蹦蹦培養(yǎng)液組。22枷嚇增殖試驗研究不同濃度LMWH對滋養(yǎng)細胞增殖能力的影響作用。將人早孕滋養(yǎng)細胞加入預先包被MATRIGEL的96孔培養(yǎng)板，培養(yǎng)過夜。在培養(yǎng)液中添加各種處理因素，繼續(xù)培養(yǎng)48H。行W丌比色試驗檢測細胞增殖情況。23TRANSWELL侵襲試驗研究不同濃度LMWH對滋養(yǎng)細胞侵襲能力的影響作用。預先將TRANSWELL板包被MATRIGEL備用。往上室加入滋養(yǎng)細胞懸液，并分別加入各種處理因素；下室加入叫聊高糖培養(yǎng)液，37℃，5％C0培養(yǎng)箱中孵育48H。棉簽輕輕拭去上室濾膜內(nèi)面的細胞，保留定向遷移至濾膜下表面的細胞，多聚甲醛固定，蘇木素染色，中性樹膠封片，高倍顯微鏡200倍下每孔隨機選擇5個視野計數(shù)細胞。24HCG分泌試驗研究不同濃度LMWH對滋養(yǎng)細胞分化能力的影響作用。將滋養(yǎng)細胞加入24孔培養(yǎng)板，培養(yǎng)過夜。在培養(yǎng)液中添加各種處理因素，繼續(xù)培養(yǎng)48H。收集各孔的培養(yǎng)上清液，儲存于一20℃?zhèn)溆?，采用化學發(fā)光法測定BHOG濃度。

簡介：華中科技大學博士學位論文LRIG2對膠質(zhì)母細胞瘤細胞系GL15生物學特性的影響及其分子生物學機制研究姓名王寶峰申請學位級別博士專業(yè)外科學（神經(jīng)外科）指導教師雷霆20090501華中科技大學博士學位論文華中科技大學博士學位論文3第二部分第二部分LRIG2基因短發(fā)夾基因短發(fā)夾RNA表達穩(wěn)定株的建立及下調(diào)表達穩(wěn)定株的建立及下調(diào)LRIG2對EGFR信號通路的影響信號通路的影響目的目的構(gòu)建針對LRIG2基因的短發(fā)夾RNASHRNA的表達載體，建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細胞株觀察目的基因表達的變化及其對EGFR信號通路的影響。方法方法根據(jù)GENBANK中LRIG2基因序列設計2條RNA干擾序列，命名LRIG2SHRNA1、LRIG2SHRNA2，同時設計1條非特異性序列作為陰性對照。據(jù)此設計合成各自的寡核苷酸鏈，退火后連接入PGENESIL2載體，轉(zhuǎn)化擴增后進行序列測定。用不同濃度的G418作用于GL15細胞，得到G418對于GL15細胞的篩選濃度。3種重組表達載體轉(zhuǎn)染膠質(zhì)瘤細胞系GL15細胞，用G418篩選后挑單克隆后擴增獲得穩(wěn)定株。逆轉(zhuǎn)錄RTPCR和WESTERN印跡法分別在MRNA和蛋白水平上檢測LRIG2的表達。用表皮生長因子EGF100NGML體外干預得到的穩(wěn)定細胞株，WESTERNBLOT測定EGFR和磷酸化EGFR水平的變化。結(jié)果結(jié)果3種重組表達載體PGENESIL2LRIG2SHRNA1、PGENESIL2LRIG2SHRNA2和PGENESIL2NEGATIVESHRNA經(jīng)限制性酶切及DNA測序分析證明序列插入正確。G418對于GL15細胞的篩選濃度為600GML，篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染三種質(zhì)粒的GL15細胞，轉(zhuǎn)染PGENESIL2LRIG2SHRNA2組細胞LRIG2MRNA和蛋白表達明顯低于轉(zhuǎn)染PGENESIL2NEGATIVESHRNA組PGENESIL2LRIG2SHRNA1組LRIG2蛋白無明顯變化。EGF刺激5分鐘和30分鐘后，PGENESIL2LRIG2SHRNA2組細胞EGFR和PEGFR蛋白水平均低于對照組。結(jié)論結(jié)論成功構(gòu)建了針對LRIG2基因的SHRNA表達載體PGENESIL2LRIG2SHRNA2，轉(zhuǎn)染細胞后可抑制LRIG2基因表達，LRIG2與LRIG1作用相反，下調(diào)LRIG2可減少EGF誘導的EGFR磷酸化，促進EGFR降解。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞富含亮氨酸重復序列免疫球蛋白樣蛋白2；RNA干擾；短發(fā)夾RNA；EGFR

簡介：南京醫(yī)科大學碩士學位論文大鼠頜骨與髂骨來源骨髓基質(zhì)干細胞體外生物學特性的比較研究姓名許艷彬申請學位級別碩士專業(yè)口腔臨床醫(yī)學指導教師陶震江20080510南京醫(yī)科大學碩士學位論文論文獨創(chuàng)性聲明本論文壘太鼠題置量壁量塞遮置煎基廈王細胞佳之I生物堂掛眭的出筮巫究竺是我個人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。論文中除了特別加以標注和致謝的地方外，不包含其他人或機構(gòu)已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。其他同志對本研究的啟發(fā)和所做的貢獻均在論文中作了明確的聲明并表示了謝意。專業(yè)一作者簽名料日期出己論文使用授權(quán)聲明本人完全了解南京醫(yī)科大學有關(guān)保留、使用學位論文的規(guī)定，即學校有權(quán)保留送交論文的復印件，允許論文被查閱和借閱；學校可以公布論文的全部或部分內(nèi)容，可以采用影印、縮印或其它復制手段保存論文。保密的論文在解密后遵守此規(guī)定。作者簽名導師虢繼日期壟疊蘭受‘

簡介：蘭州大學碩士學位論文PPARΓ和CTGF對人胃癌BGC823細胞生物學行為的影響及機制的研究姓名張芳申請學位級別碩士專業(yè)病理學與病理生理學指導教師李敏王金穗20080501蘭州大學碩士學位論文510MG／LCTGFMAB處理組BGC823細胞其侵襲穿膜細胞數(shù)為79941608，遷移穿膜細胞數(shù)為6674士512，與對照組比較差異均有統(tǒng)計學意義尸O05。6PRAR，L蛋白在BGC823細胞中有表達，RSG處理組PRARL染色陽性強度強于對照組PRART染色氏O05。7CTGF蛋白在BGC823細胞中有表達，RSG處理組、CTGFMAB處理組CTGF染色陽性強度均弱于對照組CTGF染色尸O01。8COX2。蛋白在BGC823細胞中有表達，RSG處理組、CTGFMAB處理組COX02染色陽性強度均弱于對照組COX2染色氏O01。9LVILVLP2蛋白在BGC823細胞中有表達，RSG處理組、CTGFMAB處理組MMP2染色陽性強度均弱于對照組MMP2染色尸O01。10501TMOL／LRSG處理組BGC823細胞，其CTGFMRNA、COX2MRNA和MMP2MRNA相對光密度值均顯著低于對照組相對光密度值，差異有統(tǒng)計學意義尸‘005或P001。1110MG／LCTGFMAB處理組BGC823細胞，其COX2MRNA和MMP2MRNA相對光密度值均顯著低于對照組相對光密度值，差異有統(tǒng)計學意義PO01。結(jié)論1PPAR7激動劑RSG能抑制BGC823細胞增殖，并且在一定范圍內(nèi)呈劑量時間依賴性。RSG可明顯抑制細胞的侵襲和遷移。提示RSG的作用可能與激活PPAR7介導的信號途徑有關(guān)I2CTGFMAB能夠抑制BGC823細胞增殖，同時能夠降低BGC823細胞的侵襲和遷移能力。提示CTGF可能促進BGC823細胞的增殖、侵襲和遷移。3RSG、CTGFMAB均能誘導BGC一823細胞形態(tài)的改變。4RSG、CTGFMAB分別下調(diào)BGC823細胞COX2和MMP2表達，提示RSG、CTGFMAB對于BGC823細胞生物學行為的影響，可能是通過負性調(diào)控COX2和MMP2而實現(xiàn)的。5RSG下調(diào)BGC823細胞CTGF表達，提示活化的PPARY對BGC一823細胞的抑制作用可能是通過部分下調(diào)CTGF的表達而實現(xiàn)的。關(guān)鍵詞人胃癌細胞系BGC823；過氧化物酶體增生物激活受體丫；羅格列酮；結(jié)締組織生長因子Ⅱ

簡介：溫州醫(yī)學院碩士學位論文冬凌草甲素對人胰腺癌細胞PATU8988生物學特性影響及機制的研究姓名朱延安申請學位級別碩士專業(yè)普通外科學指導教師董米連20081101溫州醫(yī)學院硬士學位論文BD2、STAT3、VEGF、MMP9的表達變化。三、結(jié)果MYR結(jié)果顯示隨著冬凌草甲素藥物濃度的增加2，4。8，16，32，64，128MG／L和作用時間的延長，PATU8988細胞的增殖明顯受到抑制。光學顯微鏡觀察，隨著冬凌草甲素藥物濃度的增加出現(xiàn)凋亡細胞的典型形態(tài)學特征改變表現(xiàn)為胞漿空泡，核染色質(zhì)向核一側(cè)固縮呈現(xiàn)半月形，并可見凋亡小體，細胞體積縮小。在2MG／L作用24H基本無凋亡，8MG／L作用24H可見部分凋亡，至72H內(nèi)，凋亡現(xiàn)象明顯。128MG／L作用8H即開始呈現(xiàn)凋亡，作用2411開始出現(xiàn)壞死。流式細胞儀分析測定ANNEXIN、PI。細胞率，發(fā)現(xiàn)冬凌草甲素O，8，16，32，64RAG／L作用24小時后，PATU8988細胞凋亡比率隨冬凌草甲素誘導濃度升高而增加。FACS測定PATU8988細胞線粒體膜電位，發(fā)現(xiàn)線粒體膜電位降低PO．05。冬凌草甲素4，8，16，32，64RAG／L誘導PATU8988細胞24H后，半定量分析刪8988細胞P53、1K12、S尉函3、VEGF、MMP9MRNA表達水平。未處理的PA弧，8988細胞均有BD．2、S“M3、VEGF、MMP9的MRNA表達，加入冬凌草甲素后，1K12、STAT3、VEGF、MMP9的表達隨藥物濃度增加表達下降，而P53的MRNA表達水平，隨藥物濃度增加而上升，也呈劑量依賴。四、結(jié)論1．冬凌草甲素能抑制P棚78988細胞的生長，具有一定的濃度和時間依賴性。2．能誘導PATE8988細胞凋亡，經(jīng)冬凌草甲素處理后PATU8988細胞表現(xiàn)出凋亡細胞典型的形態(tài)學特征改變，流式細胞儀分析測定ANNEXINV陽性細胞率，發(fā)現(xiàn)冬凌草甲素作用24小時后，PATU8988細胞凋亡比率隨藥物濃度升高而增加。線粒體膜電位降低也說明細胞的凋亡。誘導細胞凋亡是其主要細胞毒作用之一。3．能抑制VEGF、MMP．9的MRNA表達，從而可能降低PATU8988細胞的侵襲性。抑制STAT3的表達，抑制增殖作用可能與此有關(guān)。4．在細胞凋亡過程中抑癌基因P53基因上調(diào)，而抗凋亡基因BCL．2基因下調(diào)，可能是其誘導細胞凋亡的機制之一。關(guān)鍵詞人胰腺癌細胞凋亡冬凌草甲素P53IKL2STAT3VEGFM【MP．93

簡介：目的研究人MIRNA10B（HASMICRNA10B，微小RNA10B）在胰腺癌細胞系PANC1中的表達情況及其對胰腺癌細胞系PANC1生物學功能的影響。方法采用實時熒光定量PCR檢測MIRNA10B在胰腺癌細胞系PANC1中的表達情況。通過化學合成成熟型人MIRNA10B模擬體，瞬時轉(zhuǎn)染至PANC1細胞中，實時熒光定量PCR檢測進行鑒定，檢測MIRNA10B的表達量。采用MTT法檢測MIRNA10B對PANC1細胞增殖的影響，流式細胞儀檢測對PANC1細胞凋亡的影響，TRANSWELL小室檢測對PANC1細胞的侵襲功能的影響，細胞劃痕實驗檢測對PANC1細胞遷移功能的影響，以探討表達上調(diào)的MIRNA10B對胰腺癌細胞系PANC1所起的生物學作用。結(jié)果實時熒光定量PCR顯示MIRNA10B在PANC1中相對表達量為（3606±0423），（P005）。MTT法檢測轉(zhuǎn)染后24H、48H、72H和96H時間點三組細胞的增值活性無明顯差別（P005）。流式細胞儀檢測轉(zhuǎn)染后MIRNA10B轉(zhuǎn)染組凋亡率為（1231±310），陰性對照組和空白對照組細胞凋亡率分別為（1376±313）、（1628±419），（P005）。TRANSWELL小室侵襲實驗結(jié)果顯示MIRNA10B轉(zhuǎn)染組PANC1細胞穿膜數(shù)為（713±53）個，陰性對照組（301±34）個，空白對照組（292±52）個，MIRNA10B轉(zhuǎn)染組穿膜細胞數(shù)明顯多于對照組（P結(jié)論MIRNA10B在胰腺癌細胞系PANC1中明顯高表達。化學合成的成熟型MIRNA10B可以轉(zhuǎn)染入PANC1細胞，能顯著提高轉(zhuǎn)染細胞中MIRNA10B的表達量，并有效發(fā)揮上調(diào)作用。轉(zhuǎn)染MIRNA10B后對PANC1細胞的體外侵襲和遷移能力有顯著的促進作用，但對PANC1細胞的增殖和早期凋亡無明顯影響。

簡介：前言FABRCA通路是正常細胞參與DNA修復、細胞周期與凋亡調(diào)控、解毒功能調(diào)節(jié)、生命信號轉(zhuǎn)導等必需的。如果該通路受損會導致細胞染色體不穩(wěn)定以及對DNA損傷劑高度敏感。FA復合體的穩(wěn)定和FANCD2的泛素化激活是FABRCA通路的關(guān)鍵步驟，而FANCF在此過程中發(fā)揮著重要作用。FANCF蛋白低表達或功能缺失會干擾FABRCA通路的正常功能，進而參與腫瘤發(fā)生及耐藥性的形成。目前，已在多種實體腫瘤中證實FANCF蛋白低表達或功能缺失，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及耐藥性的形成相關(guān)。而關(guān)于FANCF是否參與乳腺癌發(fā)生發(fā)展及耐藥性的產(chǎn)生與調(diào)控尚未見報道。本實驗研究FANCF基因沉默對乳腺癌MCF7細胞生物學特性的影響，并檢測相關(guān)指標的變化，探討FANCF基因是否參與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展及耐藥性的形成。實驗方法本實驗分為三部分1、FANCFSHRNA表達質(zhì)粒的構(gòu)建根據(jù)相關(guān)文獻報道，使用AMBION公司的在線設計軟件，設計并合成能夠編碼針對FANCF基因的小發(fā)夾RNAFANCFSHRNA的DNA模板，將其插入到PSLIENCERTM41CMVNEO表達質(zhì)粒中，形成PSLIENCERTM41CMVFANCFSHRNA重組質(zhì)粒；將該重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到ECOLI感受態(tài)細胞JM109中，通過氨芐青霉素抗藥性篩選出成功轉(zhuǎn)化的陽性克隆，并進行擴增；通過PCR及基因測序方法篩選出插入正確的FANCFSHRNA表達質(zhì)粒；2、MCF7FANCFRNAI細胞模型的建立堿裂解法提取質(zhì)粒，脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染人乳腺癌MCF7細胞，RTPCR法檢測FANCF基因MRNA表達水平，確認FANCF基因沉默；3、相關(guān)指標檢測分別采用MTT法、流式細胞儀PI單染法及FITCPI雙染法檢測FANCF基因沉默前后細胞增殖、周期及凋亡等生物學特性的變化；RTPCR法檢測FANCF基因沉默前后耐藥相關(guān)基因BCRP、PGP、MRP、LRPMRNA表達水平的變化。離體水平探討FANCF與乳腺癌生物學特性及耐藥性形成的相關(guān)性。實驗結(jié)果1、成功構(gòu)建FANCFSHRNA表達質(zhì)粒含有重組質(zhì)粒的陽性克隆菌液PCR擴增片段約為250BP，并且其基因測序結(jié)果顯示插入片段堿基排列順序正確，沒有突變，說明FANCFSHRNA表達質(zhì)粒構(gòu)建成功；2、成功建立MCF7FANCFRNAI細胞模型與陰性對照組相比，轉(zhuǎn)染FANCFSHRNA質(zhì)粒后第2天、第3天、第5天和第7天，F(xiàn)ANCF基因MRNA表達水平均明顯減低，表達抑制率分別為3651％±684％、3703％±661％、5303％±933％和3951％±1013％，說明FANCF基因沉默，MCF7FANCFRNAI細胞模型成功建立；3、FANCF基因沉默對人乳腺癌MCF7細胞生物學特性的影響與陰性對照組相比，F(xiàn)ANCF基因沉默可抑制MCF7細胞增殖轉(zhuǎn)染后48H和72H的抑制率分別為1265％±124％和2964％±087％，促進細胞凋亡轉(zhuǎn)染后48H和72H的凋亡率分別為2895％±181％和4900％±232％，并使細胞周期阻滯于S期轉(zhuǎn)染后48H，S期細胞比率為3338％±068％；4、FANCF基因沉默對人乳腺癌MCF7細胞耐藥性的影響與陰性對照組相比，F(xiàn)ANCF基因沉默后，BCRPMRNA表達水平明顯降低，轉(zhuǎn)染后第3天、第5天和第7天的表達抑制率分別為3514％±871％、3839％±838％和2723％±698％；PGPMRNA表達水平略有降低，轉(zhuǎn)染后第7天表達抑制率為2998％±342％；MRP和LRPMRNA表達無明顯變化。結(jié)論1、FANCF基因沉默可抑制人乳腺癌MCF7細胞增殖，促進細胞凋亡，并使細胞周期阻滯于S期；2、FANCF基因沉默可抑制BCRP等耐藥相關(guān)基因的MRNA表達，參與乳腺癌細胞耐藥性的調(diào)控。