大鼠頜骨與髂骨來源骨髓基質(zhì)干細(xì)胞體外生物學(xué)特性的比較研究.pdf

1、因創(chuàng)傷、感染、腫瘤及先天性疾病等造成的頜骨缺損十分常見，目前針對頜骨缺損的主要修復(fù)方法是自體骨移植，其中以髂骨作為骨供體最為常見。胚胎學(xué)研究表明大部分顱頜面骨發(fā)生于顱神經(jīng)嵴來源外胚間充質(zhì)，而軀干四肢骨來源于中胚層；從成骨方式而言頜骨為膜內(nèi)成骨，髂骨則為軟骨內(nèi)成骨。大量臨床與動物實驗表明截斷性頜骨缺損采用頜骨供體比其他部位骨供體成功率更高，主要表現(xiàn)為移植供體存活率更高，遠(yuǎn)期吸收率更低。 這些已有的臨床、實驗室、生物學(xué)研究提示我們在

2、不同部位骨骨髓內(nèi)的骨祖細(xì)胞可能具有各自生物學(xué)特特生；而關(guān)于骨組織修復(fù)的細(xì)胞學(xué)模型主要來自長骨，對頜骨來源骨髓細(xì)胞的針對性研究甚少。為此，我們采用大鼠頜骨與髂骨來源骨髓基質(zhì)干細(xì)胞(Bone Marrow Stromal Cells，BMSCs)進(jìn)行體外擴(kuò)增培養(yǎng)，通過相應(yīng)的誘導(dǎo)條件，觀察這兩種不同來源的BMSCs各自在細(xì)胞增殖，集落形成，分化成骨，礦化形成及分化成脂方面是否存在差異，希望借此為進(jìn)一步探索頜骨在發(fā)生、修復(fù)上是否具有其獨特生物學(xué)

3、機(jī)制提供一定的依據(jù)和參考。 目的：從大鼠的頜骨與髂骨骨髓中運(yùn)用全骨髓細(xì)胞貼壁培養(yǎng)法分別培養(yǎng)出兩位點BMSCs，為探討頜骨與髂骨來源BMSCs的生物學(xué)特性是否具有位點性差異提供細(xì)胞模型。 方法：取4～6周齡150克±10克雄性SD大鼠，首先解剖分離出下頜骨及髂骨，無菌條件下培養(yǎng)基沖出骨髓細(xì)胞制成細(xì)胞懸液，采用全骨髓貼壁法培養(yǎng)細(xì)胞，相差顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況及特點。結(jié)果：原代細(xì)胞接種24h后鏡下可見瓶底有細(xì)胞貼壁，首次換液

4、去除大部分外周血細(xì)胞后可見散在的梭形細(xì)胞聚集；隨反復(fù)換液，瓶內(nèi)未貼壁細(xì)胞逐步被清除，細(xì)胞生長形成典型的成纖維細(xì)胞樣-集落形成單位(colony-forming unit-fibroblast，CFU-F)。細(xì)胞首次傳代約需2周左右，傳代細(xì)胞于第6代(髂骨)-第9代(頜骨)前細(xì)胞增殖能力比較旺盛，以后細(xì)胞活力逐漸減弱，出現(xiàn)不同的分化傾向，部分細(xì)胞胞漿中出現(xiàn)空泡及顆粒樣物質(zhì)，最終死亡。 結(jié)論：全骨髓細(xì)胞貼壁培養(yǎng)法能夠培養(yǎng)出滿足實驗要

5、求的BMSCs。 目的：探討體外環(huán)境下大鼠頜骨與髂骨來源BMSCs體外生物學(xué)性狀是否存在差異，為進(jìn)一步深入體內(nèi)研究提供依據(jù)。 方法：取第二代正常生長的頜骨與髂骨BMSCs，分別從細(xì)胞增殖活性，誘導(dǎo)成骨，礦化及成脂能力等多方面比較兩者的體外生物學(xué)特性的差異。 結(jié)果：頜骨來源的BMSCs與髂骨相比，在低濃度接種條件下具有更強(qiáng)的增殖能力，誘導(dǎo)成骨后更高的堿性磷酸酶陽性表現(xiàn)，礦化誘導(dǎo)后形成更多的鈣結(jié)節(jié)；而髂骨來源BMSC