簡介：學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得直昌太堂或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名手寫又P事簽字日期弘哆年‘月7日LD／，學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解南昌大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)南昌大學(xué)可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編本學(xué)位論文。同時(shí)授權(quán)中國科學(xué)技術(shù)信息研究所和中國學(xué)術(shù)期刊光盤版電子雜志社將本學(xué)位論文收錄到中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫和中國優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫中全文發(fā)表，并通過網(wǎng)絡(luò)向社會(huì)公眾提供信息服務(wù)。保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書學(xué)位論文作者簽名手寫只P毒導(dǎo)師簽名手寫I幽彳弓卜，7簽字日期刃FJ年6月／日簽字日期加F7年占月一7日ABSTRACTABSTRACTOBJECTIVETOINVESTIGATETHEIMPACTOFUPREGIDATINGMIR21ONTHEBIOLOGICALBEHAVIORSOFHT29CANCERCELLSANDOBSERVETHECHANGESOFSENSITIVITYTO5FUANDRADIOTHERAPYMETHODWEFIRSTTRANSFECTEDWITHLENTIVIRALVECTORPREMIR21ASTHEEXPERIMENTALGROUP，THENWETRANSFECTEDTHENONSENSESEQUENCELENTIVIRALVECTORNCANDLENTIVIRALVECTORU6ASTHENEGATIVECONTROLGROUPS，ANDUTILIZEDTHEHT29CELLASTHEMOCKGROUPWEDEVELOPEDALENTIVIRALVECTORFORTHEOVEREXPRESSIONOFPREMIR21ANDEVALUATEDTHETRANSFECTIONEFFECIENCYUNDERAFLUORESCENCEMICROSCOPETHEMIR21EXPRESSIONWASMEASUREDBYTAQMANREALTIMEPCR，THECELLPROLIFERATIONCAPACITYWASDETECTEDBYCCK一8；THECOLONYFORMATIONCAPACITYWASDETECTEDBYTHECOLONYFORMATIONASSAY；CELLAPOPTOSISANDCELLCYCLEDISTRIBUTIONWASANALYZEDWITLLFLOWCYTOMETRY；TRANSWELLCHAMBERASSAYWASUSEDTOOBSERVETHECELLMIGRATIONABILITYCHEMOTHERAPYSENSITIVITYTO5一FUWASDETECTEDBYCCK一8ANDCALCPLATEDTHEHALFOFTHEINHIBITIONIC50TO5FU；THERADIATIONSENSITIVITYWASDETECTEDBYMTTEACHTESTWASREPEATEDTHREETIMESRESPLTSREALTIMEPCRRESP1TSHOWEDTHATTHEMIR21EXPRESSIONINTHELENTIVIRALVECTORPREMIR一21GROUPINCREASED4228TIMESP001COMPAREDWI也THECONTROLGROUPANDTWONEGATIVECONTROLGROUPS，THEUPREGPLATINGINTHEEXPRESSIONOFMIR21SIGNIFICANTLYPROMOTEDTHEPROLIFERATIONOFHT29CELLSP001，ANDSIGNIFICANTLYINCREASEDCOLONYFORMINGABILITY559士19VS37567士2101PO01INHIBITEDAPOPTOSISP005，EARLYAPOPTOTIC11士026VS667081％，LATEAPOPTOTICANDDEADCELLS133士085VS553111％；FURTHERMORE，UPREGGLATINGOFMIR21REDISTRIBUTEDTHECELLCYCLEANDPROMOTEDG1／SCELLCYCLETRANSITION，LEADINGTOTHEPROPORTIONOFG0／G1PHASECELLSREDUCED3653士092VS6018士093％001ANDTHEPROPORTIONOFSPHASECELLSINCREASED568T02VS3301101％0001G2／MPHASECELLSWASNOSIGNIFICANTDIFFERENCE；THEINVASIONABILITYINVITROWASENHANCEDINVASIONCELLS1048士672VS342士259PO01ANDREDUCEDIII

簡介：目的研究一氧化氮（NO）對(duì)兔纖維環(huán)細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及其相關(guān)機(jī)制。方法構(gòu)建兔纖維環(huán)細(xì)胞凝膠培養(yǎng)模型并將其為7組，分別向培養(yǎng)基內(nèi)加入不同濃度的NO供體硝普鈉（SNP）及INOS抑制劑煙酰胺和1400W進(jìn)行干預(yù)。干預(yù)3天后分別采用MTT法、ANNEXINVPI染色、線粒體膜電位JC1染色和RTPCR檢測各組纖維環(huán)細(xì)胞增殖活力、細(xì)胞凋亡狀況、細(xì)胞線粒體膜電位及細(xì)胞聚集蛋白多糖（AGGRECAN、Ⅰ和Ⅱ型膠原基因表達(dá)。結(jié)果①M(fèi)TT檢測顯示第3、4組吸光度值（A）較正常對(duì)照組明顯下降（P結(jié)論NO對(duì)兔纖維環(huán)細(xì)胞生物學(xué)行為有較強(qiáng)的干擾作用，可能在纖維環(huán)損傷機(jī)制中扮演著重要角色。INOS抑制劑可以有效抑制NO對(duì)兔纖維環(huán)細(xì)胞生物學(xué)行為的干擾，具備用于椎間盤退變防治的良好潛力。

簡介：汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文2汕頭大學(xué)碩士學(xué)位論文汕頭大學(xué)碩士學(xué)位論文白藜蘆醇（RESVERATROL）對(duì)食管癌EC109細(xì)胞白藜蘆醇（RESVERATROL）對(duì)食管癌EC109細(xì)胞生物學(xué)作用的初步研究生物學(xué)作用的初步研究研究生孫雪平研究生孫雪平導(dǎo)師李冠武副教授導(dǎo)師李冠武副教授專業(yè)生物化學(xué)與分子生物學(xué)專業(yè)生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究方向腫瘤分子生物學(xué)研究方向腫瘤分子生物學(xué)培養(yǎng)單位汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院培養(yǎng)單位汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院入學(xué)時(shí)間2004年9月入學(xué)時(shí)間2004年9月論文完成時(shí)間2007年4月論文完成時(shí)間2007年4月※本項(xiàng)目得到李嘉誠汕頭大學(xué)研究發(fā)展基金資助（項(xiàng)目編號(hào)2001022）

簡介：目的鑒定組織塊培養(yǎng)法體外培養(yǎng)人胚胎生殖腺嵴和背側(cè)腸系膜所獲得的細(xì)胞為未分化的人胚胎生殖細(xì)胞人EG細(xì)胞；嘗試不同時(shí)間和不同方法對(duì)人EG細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)，探討最佳傳代時(shí)機(jī)和傳代方法；并確定傳代培養(yǎng)的細(xì)胞仍為未分化的人EG細(xì)胞。方法取5～10周人胚胎生殖腺嵴和背側(cè)腸系膜，用源于自身胚胎組織的成纖維細(xì)胞作為飼養(yǎng)層，在不添加任何細(xì)胞因子條件下進(jìn)行組織塊培養(yǎng)。以免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測培養(yǎng)細(xì)胞中SSEA1、SSEA3、OCT4、端粒酶的表達(dá)；利用流式細(xì)胞術(shù)檢測所得細(xì)胞中人EG細(xì)胞的比例。對(duì)原代培養(yǎng)第八天和第16天的細(xì)胞采用挑出傳代法、消化傳代法傳代培養(yǎng)，其中消化傳代法使用的三種消化液分別是025％胰蛋白酶、05％胰蛋白酶和025％胰蛋白酶002％EDTA。檢測傳代培養(yǎng)后細(xì)胞中SSEA1、SSEA3、OCT4、端粒酶的表達(dá)。結(jié)果原代培養(yǎng)的細(xì)胞生長良好，免疫細(xì)胞化學(xué)檢測顯示，位于飼養(yǎng)層上的細(xì)胞及細(xì)胞集落陽性表達(dá)SSEA1、SSEA3、OCT4、端粒酶；流式細(xì)胞術(shù)檢測表明，培養(yǎng)體系中人EG細(xì)胞比例約為13％。原代培養(yǎng)至第八天時(shí)，細(xì)胞生長最旺盛，適合于傳代；第16天時(shí)，很多人EG細(xì)胞集落已分化或消散，喪失了傳代的能力。使用胰蛋白酶EDTA作為消化液消化傳代人EG細(xì)胞所得的集落最多，效果最佳。通過免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測表明，傳代培養(yǎng)第五代細(xì)胞仍保持SSEA1、SSEA3、OCT4、端粒酶的陽性表達(dá)。結(jié)論組織塊培養(yǎng)法原代培養(yǎng)人胚胎生殖腺嵴和背側(cè)腸系膜所獲得的細(xì)胞為未分化的人EG細(xì)胞。最適宜的傳代時(shí)間是原代培養(yǎng)后第八天，最佳的傳代方法是胰蛋白酶EDTA消化法，且傳代培養(yǎng)后的細(xì)胞仍為未分化的人EG細(xì)胞。

簡介：目的①小鼠骨髓間充質(zhì)干祖細(xì)胞體外培養(yǎng)體系的優(yōu)化及相關(guān)生物學(xué)研究；②MIL10重組復(fù)制缺陷型腺病毒載體的構(gòu)建制備及轉(zhuǎn)染MMSCMPC表達(dá)；③MIL10基因轉(zhuǎn)染修飾骨髓間充質(zhì)干／祖細(xì)胞在H2單倍型骨髓移植AGVHD模型中的生物免疫學(xué)效應(yīng)。方法⑴無菌剝離SPF級(jí)雌性C57BL6小鼠股骨與脛骨，以培養(yǎng)基反復(fù)強(qiáng)力沖洗并刮擦髓腔內(nèi)膜后收集沖洗液，加入碎骨片振蕩沖洗，過200目濾網(wǎng)制備為單細(xì)胞懸液。分別以3種完全培養(yǎng)基（低糖DMEM完全培養(yǎng)基，低糖DMEMMCDB201完全培養(yǎng)基，MESENCULT完全培養(yǎng)基）重懸，以1106C㎡的密度接種于25C㎡濾膜培養(yǎng)瓶，轉(zhuǎn)細(xì)胞培養(yǎng)箱，37℃，5CO2，100飽和濕度條件下培養(yǎng)。24小時(shí)后全量換液，去除未貼壁細(xì)胞，此后每3日換液一次。鏡下貼壁細(xì)胞約7080匯合時(shí)消化，以25～5103C㎡密度接種傳代。對(duì)不同代數(shù)的培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行如下檢測倒置顯微鏡下形態(tài)學(xué)特點(diǎn)觀察；不同培養(yǎng)體系小鼠成纖維細(xì)胞樣集落形成單位（CFUF）的檢測；計(jì)數(shù)繪制細(xì)胞生長曲線及倍增時(shí)間；流式細(xì)胞儀細(xì)胞周期檢測；流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面標(biāo)記；體外定向誘導(dǎo)向成骨、成脂肪分化，鑒定多向分化潛能；RTPCR法檢測細(xì)胞MIL10MRNA；雙抗體夾心ELISA法檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清中MIL10。采用SPSS115FWINDOWS統(tǒng)計(jì)處理軟件分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)Α005。⑵以PF5MIL10質(zhì)粒為模板，PCR擴(kuò)增回收MIL10CDNA，經(jīng)一系列酶切和連接反應(yīng)，將其定向插入腺病毒載體PSGCMV中，構(gòu)建PSGCMVMIL10質(zhì)粒；此質(zhì)粒與5型腺病毒質(zhì)粒PBGHE3通過脂質(zhì)體LIPOFECTAMINE2000共轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞，經(jīng)胞內(nèi)同源重組產(chǎn)生重組復(fù)制缺陷型腺病毒AD5MIL10；經(jīng)純化后的AD5MIL10在HEK293細(xì)胞中大量擴(kuò)增，并通過氯化銫密度梯度離心法純化，制備病毒液，50組織培養(yǎng)感染劑量法（TCID50）測定病毒滴度；以AD5EGFP腺病毒確定轉(zhuǎn)染MMSCMPC的最宜感染復(fù)數(shù)（MOI），AD5MIL10腺病毒體外轉(zhuǎn)染MMSCMPC；RTPCR法檢測AD5MIL10轉(zhuǎn)染MMSCMPC后MIL10的MRNA表達(dá)，ELISA法檢測AD5MIL10轉(zhuǎn)染MMSCMPC培養(yǎng)上清中MIL10。⑶以雌性C57BL6小鼠為供鼠，雄性F1（CB6F1）小鼠為受鼠，建立H2單倍型骨髓移植AGVHD模型對(duì)受鼠進(jìn)行直線加速器6MVX射線一次性全身照射，總劑量12GY，劑量率100CGYMIN。制備供鼠10，11，12，13四種比例的骨髓單個(gè)核細(xì)胞（MNC）／脾MNC混合懸液（骨髓MNC取1107只），每比例為一實(shí)驗(yàn)組（N15）。受鼠于照射后4小時(shí)內(nèi)經(jīng)尾靜脈回輸相應(yīng)混合懸液，移植后進(jìn)行一般情況觀察，定期體重監(jiān)測、外周血象及嵌合體測定，GVHD臨床綜合評(píng)分，組織病理學(xué)半定量評(píng)分，以綜合評(píng)判各組AGVHD效應(yīng)，最終確定引出理想AGVHD狀態(tài)的相關(guān)參數(shù)，建立H2單倍型骨髓移植AGVHD模型；選擇1105只和5105只兩個(gè)劑量梯度作為MSCMPC移植劑量，在H2單倍型骨髓移植AGVHD模型中，分別以MSCMPC及MIL10基因轉(zhuǎn)染修飾的MSCMPC進(jìn)行共移植實(shí)驗(yàn)，對(duì)相應(yīng)的4個(gè)共移植實(shí)驗(yàn)組及AGVHD對(duì)照組進(jìn)行移植后一般情況觀察，定期體重監(jiān)測，外周血象及嵌合體測定，GVHD臨床綜合評(píng)分，組織病理學(xué)半定量評(píng)分，對(duì)各組GVHD狀況進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，并選擇移植后14天、28天、35天、60天及瀕死前等不同的時(shí)間點(diǎn)，采集制備各組實(shí)驗(yàn)鼠血清，以ELISA法進(jìn)行MIL10、MIL4、MINFΓ及MTNFA定量檢測。采用SPSS115FWINDOWS統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)Α005。結(jié)果①收集經(jīng)骨片沖洗的小鼠骨髓沖出液接種培養(yǎng)，經(jīng)傳代培養(yǎng)3代以上后細(xì)胞呈現(xiàn)為均質(zhì)性較好的短梭形細(xì)胞，漩渦或放射狀生長；優(yōu)化選擇MESENCULT完全培養(yǎng)基為MSCMPC培養(yǎng)體系；細(xì)胞可傳代生長10代以上保持生物學(xué)特性穩(wěn)定，選擇P3代培養(yǎng)細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞；對(duì)數(shù)生長期的群體倍增時(shí)間（TD）為311±06小時(shí)；細(xì)胞匯合8090時(shí)G0G1期細(xì)胞百分率803，G2期細(xì)胞12400，S期細(xì)胞73；P3代細(xì)胞表面抗原高表達(dá)CD29、CD44、CD105、SCA1，極低表達(dá)CD45，低到中度表達(dá)CD31；P3代細(xì)胞經(jīng)體外定向誘導(dǎo)培養(yǎng)，可分化為成骨及脂肪細(xì)胞，證實(shí)所培養(yǎng)細(xì)胞具備多向分化潛能；RTPCR法檢測培養(yǎng)細(xì)胞MIL10MRNA，雙抗體夾心ELISA法檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清中MIL10，均未能證實(shí)MMSCMPC體外表達(dá)分泌MIL10。②擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)酶切鑒定、PCR擴(kuò)增、DNA測序均證實(shí)為小鼠白介素10；構(gòu)建制備的重組腺病毒AD5MIL10經(jīng)PCR鑒定正確，滴度達(dá)251010PFUML；AD5MIL10以最宜MOI值200轉(zhuǎn)染MMSCMPC時(shí)能獲得高效穩(wěn)定的體外表達(dá)，符合體內(nèi)實(shí)驗(yàn)要求。③雄性F1（CB6F1）小鼠為受鼠，經(jīng)直線加速器6MVX射線一次性全身照射（總劑量12GY，劑量率100CGYMIN），接受雌性C57BL6供鼠1107骨髓MNC3107脾MNC（每只）聯(lián)合輸注時(shí)，可在相對(duì)集中的時(shí)間內(nèi)（24D～28D）穩(wěn)定地引出典型AGVHD，臨床及病理程度較一致，死亡時(shí)間相對(duì)集中（27D～33D），以此為參數(shù)建立H2單倍型骨髓移植AGVHD模型；體內(nèi)共移植實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示以1105只MSCMPC共移植時(shí)可降低AGVHD的發(fā)生及嚴(yán)重程度（P005）；同細(xì)胞劑量的MIL10基因轉(zhuǎn)染修飾MSCMPC共移植能更為顯著地減低AGVHD的發(fā)生及嚴(yán)重程度（P005）。細(xì)胞因子檢測顯示MSCMPC共移植在14D明顯上調(diào)受鼠體內(nèi)IL4水平（P005），同時(shí)明顯減低INFΓ和TNFA水平（P均005）；MIL10基因轉(zhuǎn)染修飾的MSCMPC共移植較MSCMPC更高地上調(diào)了受鼠體內(nèi)IL10水平（P001），同時(shí)協(xié)同上調(diào)IL4水平（P005），更顯著地減少了INFΓ生成（P001），但I(xiàn)L10水平的上升可能也增加了受鼠發(fā)生及加重CGVHD的風(fēng)險(xiǎn)。結(jié)論⑴成功分離、培養(yǎng)了正常C57BU6小鼠的骨髓間充質(zhì)干祖細(xì)胞，生物學(xué)特性穩(wěn)定，具有良好的增殖能力和向成骨、脂肪細(xì)胞的分化潛能，可用于進(jìn)行基因轉(zhuǎn)染修飾及應(yīng)用于動(dòng)物模型。⑵成功構(gòu)建了重組AD5MIL10復(fù)制缺陷型腺病毒載體系統(tǒng)，并證實(shí)對(duì)MMSCMPC具有較高的轉(zhuǎn)染效率并獲得高效穩(wěn)定的體外表達(dá)。⑶成功建立了雌性C57BL6小鼠→F1（CB6F1）雄性小鼠方向的H2單倍型骨髓移植AGVHD模型。1105／只MSCMPC共移植可降低AGVHD的發(fā)生及嚴(yán)重程度，提高細(xì)胞劑量（5105只）并不能增強(qiáng)效應(yīng)。不同程度地上調(diào)受鼠IL4水平（但對(duì)IL10影響不顯著），同時(shí)明顯減低INFΓ和TNFA水平，這可能是MSCMPC移植減輕AGVHD的機(jī)制之一。1105只MIL10基因轉(zhuǎn)染修飾MSCMPC共移植能更顯著地減低AGVHD的發(fā)生及嚴(yán)重程度，但并不能降低甚至可能會(huì)加重CGVHD的發(fā)生及嚴(yán)重程度，提高細(xì)胞劑量其效應(yīng)無顯著差別；MIL10基因轉(zhuǎn)染修飾MSCMPC較未修飾者更高地上調(diào)了受鼠IL10水平，同時(shí)協(xié)同上調(diào)體內(nèi)IL4水平，更為顯著地減少INFΓ生成，可能是最終顯著降低AGVHD發(fā)生及嚴(yán)重程度的原因，但I(xiàn)L10水平上調(diào)也增加了受鼠發(fā)生及加重CGVHD的風(fēng)險(xiǎn)。

簡介：第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文人毛乳頭細(xì)胞生長相關(guān)蛋白生物學(xué)活性的初步研究姓名羅洋申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)皮膚病與性病學(xué)指導(dǎo)教師郝飛20040501第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文8收集凝集性生長人毛乳頭細(xì)胞培養(yǎng)液上清制備成條件培養(yǎng)基分別作用于傳代培養(yǎng)后失去凝集性生長特性的毛乳頭細(xì)胞和臨床斑禿患者用來闡明毛乳頭細(xì)胞生長相關(guān)蛋白對(duì)活力較弱毛乳頭細(xì)胞的影響和對(duì)毛囊生長周期的調(diào)節(jié)作用以期為臨床治療禿發(fā)性疾病探索一種新的治療途徑在本研究中我們首先從人頭皮毛囊分離培養(yǎng)人毛乳頭細(xì)胞這些細(xì)胞具有周期性凝集性生長特性而且這種特性隨著傳代次數(shù)的增多而逐步喪失凝集性生長作為毛乳頭細(xì)胞的固有特性與其生物學(xué)功能密切相關(guān)我們收集凝集性生長人毛乳頭細(xì)胞培養(yǎng)液上清制備成條件培養(yǎng)基培養(yǎng)9代毛乳頭細(xì)胞發(fā)現(xiàn)其能將非凝集性生長的毛乳頭細(xì)胞轉(zhuǎn)化為凝集性生長狀態(tài)我們又將條件培養(yǎng)基培養(yǎng)的9代毛乳頭細(xì)胞與基礎(chǔ)養(yǎng)基培養(yǎng)的9代毛乳頭細(xì)胞分別作細(xì)胞計(jì)數(shù)發(fā)現(xiàn)條件培養(yǎng)基有明顯促進(jìn)高傳代毛乳頭細(xì)胞增殖的能力我們再將2代毛乳頭細(xì)胞與9代毛乳頭細(xì)胞共培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)9代毛乳頭細(xì)胞有向低傳代毛乳頭細(xì)胞轉(zhuǎn)化的趨勢而2代毛乳頭細(xì)胞未出現(xiàn)向高傳代轉(zhuǎn)化的趨勢這些結(jié)果表明凝集性生長毛乳頭細(xì)胞所分泌的生長相關(guān)蛋白與毛乳頭細(xì)胞的凝集性生長等生物學(xué)特性有關(guān)我們應(yīng)用3HTDR摻入技術(shù)發(fā)現(xiàn)基礎(chǔ)培養(yǎng)基培養(yǎng)的毛乳頭細(xì)胞其3HTDR摻入值隨著細(xì)胞傳代增高而降低而對(duì)應(yīng)的條件培養(yǎng)基培養(yǎng)的高傳代毛乳頭細(xì)胞其3HTDR摻入值是相對(duì)較高的這表明條件培養(yǎng)基可促進(jìn)活力較弱的高傳代毛乳頭細(xì)胞的增殖我們應(yīng)用RTPCR技術(shù)觀察分泌性蛋白血管內(nèi)皮生長因子MRNA的表達(dá)狀況發(fā)現(xiàn)基礎(chǔ)培養(yǎng)基培養(yǎng)的毛乳頭細(xì)胞其血管內(nèi)皮生長因子MRNA的表達(dá)隨著細(xì)胞傳代增多而降低而對(duì)應(yīng)的條件培養(yǎng)基培養(yǎng)的高代毛乳頭細(xì)胞其血管內(nèi)皮生長因子的表達(dá)是相對(duì)較高的這表明條件培養(yǎng)基可促進(jìn)活力較弱的毛乳頭細(xì)胞的分泌性蛋白的基因表達(dá)我們再在電鏡下觀察條件培養(yǎng)基培養(yǎng)的高代毛乳頭細(xì)胞發(fā)現(xiàn)其細(xì)胞核靠邊細(xì)胞內(nèi)核糖體較多內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分泌成池呈圓形和橢圓形而用基礎(chǔ)培養(yǎng)基培養(yǎng)的高傳代毛乳頭細(xì)胞其電鏡下可見其細(xì)胞核居中細(xì)胞內(nèi)核糖體較少內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分泌成星形或條索狀這表明條件培養(yǎng)基可促進(jìn)活力較弱的高傳代毛乳頭細(xì)胞的分泌這些結(jié)果表明凝集性生長毛乳頭細(xì)胞所分泌的生長相關(guān)蛋白可促進(jìn)活力較弱高傳代毛乳頭細(xì)胞的增殖和分泌性蛋白的表達(dá)和分泌我們收集凝集性生長人毛乳頭細(xì)胞培養(yǎng)液上清制備成毛乳頭細(xì)胞條件培養(yǎng)液凍干粉經(jīng)熱源試驗(yàn)急性毒性試驗(yàn)細(xì)菌培養(yǎng)真菌培養(yǎng)等檢查無異常經(jīng)查排除人免疫缺陷病毒乙型肝炎病毒丙型肝炎病毒梅毒螺旋體感染經(jīng)本院倫理委員會(huì)討論同意臨床使用并征得患者同意且簽署知情同意書的情況下應(yīng)用于斑禿患者我們發(fā)

簡介：學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得直昌太堂或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名手寫字日期刃F許多月易日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解南昌大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)南昌大學(xué)可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編本學(xué)位論文。同時(shí)授權(quán)中國科學(xué)技術(shù)信息研究所和中國學(xué)術(shù)期刊光盤版電子雜志社將本學(xué)位論文收錄到中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫和中國優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫中全文發(fā)表，并通過網(wǎng)絡(luò)向社會(huì)公眾提供信息服務(wù)。保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書J學(xué)位論文作者簽名鵝穢囊乒鋤簽名手寫球陟?！獿，，簽字日期矽F’年易月抄日簽字日期矽房年Z月占日摘要肉瘤細(xì)胞系U2OS細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移，為下一步實(shí)驗(yàn)打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞脂肪酸合成酶；RNAI干擾；骨肉瘤；侵襲；遷移

簡介：目的（1）運(yùn)用貼壁法與流式細(xì)胞分選方法分離提純?nèi)怂韬碎g充質(zhì)干細(xì)胞（NUCLEUSPULPOSUSMESENCHYMALSTEMCELLS，NPMSCS）。（2）從細(xì)胞形態(tài)、增殖特點(diǎn)、免疫免疫表型、三系分化等方面比較兩種方法獲得的髓核間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)活性。方法收集腰椎間盤突出癥患者的退變髓核組織（PFIRRMANN分級(jí)均為Ⅳ級(jí)），利用酶消化法分離細(xì)胞。分別采用兩種方法分離提純NPMSCS，一組細(xì)胞采用貼壁法培養(yǎng)，另一組通過流式細(xì)胞分選技術(shù)利用NPMSCS表面陽性標(biāo)志物CD73、CD90、CD105獲得NPMSCS。將兩種方法獲得的NPMSCS進(jìn)行體外培養(yǎng)擴(kuò)增，分別進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察，CCK8檢測增殖能力。向成骨、成脂、成軟骨誘導(dǎo)分化，誘導(dǎo)28天后分別進(jìn)行茜素紅染色觀察其成骨能力、油紅O染色觀察其成脂能力、甲苯胺藍(lán)染色觀察其成軟骨能力，利用IMAGJ軟件計(jì)算染色區(qū)域所占的面積百分比。比較兩組NPMSCS在形態(tài)學(xué)，免疫表型以及增殖和分化能力的差異。結(jié)果（1）流式細(xì)胞分選儀以PECD73、APCCD90、V450CD105作為表面陽性標(biāo)志，分選出CD73、CD90、CD105三陽性的髓核間充質(zhì)干細(xì)胞，平均獲得數(shù)為353±078106個(gè)，其比例約（8967±252）％。貼壁法獲得的髓核間充質(zhì)干細(xì)胞CD73、CD90、CD105的陽性表達(dá)率，分別為（8979±240），（9407±231），（9049±163）。（2）經(jīng)酶消化后的原代細(xì)胞在接種后57H貼壁，原代細(xì)胞呈長短不一的短梭形，待細(xì)胞生長達(dá)8090融合時(shí)，可見旋渦狀生長或者以組織塊為中心的漩渦形成，排列整齊。流式細(xì)胞分選方法獲得的髓核間充質(zhì)干細(xì)胞在接種后46H觀察到貼壁生長，主要以旋渦狀生長為主，少見散在的單個(gè)貼壁生長細(xì)胞，1215天細(xì)胞可達(dá)到8090融合。（3）在培養(yǎng)4H1D，流式組NPMSCS的增殖活力明顯低于貼壁組NPMSCS（P005）。在第5D13D，流式組NPMSCS增殖能力明顯高于貼壁組NPMSCS（P（4）流式組NPMSCS流式細(xì)胞儀免疫表型的檢測結(jié)果顯示，CD73的表達(dá)率為9855±035，CD90的表達(dá)率為9847±057，CD105的表達(dá)率為9820±124，表達(dá)率明顯高于貼壁組NPMSCS。流式組NPMSCS造血干細(xì)胞標(biāo)志物CD45、CD34及HLADR等的表達(dá)率均低于4。（5）成骨誘導(dǎo)分化兩組NPMSCS經(jīng)誘導(dǎo)28天后，顯微鏡下可見細(xì)胞內(nèi)有黑色不透光區(qū)域，經(jīng)茜素紅染色后可見細(xì)胞表面存在大量紅染的鈣鹽沉積，肉眼觀可見流式組NPMSCS紅染面積多于貼壁組NPMSCS，應(yīng)用IMAGJ軟件進(jìn)行圖像分析，測得流式組NPMSCS紅染面積的比例明顯高于貼壁組NPMSCS（P結(jié)論本實(shí)驗(yàn)利用流式細(xì)胞分選技術(shù)從人退變髓核組織中獲得較高純度的NPMSCS，并能進(jìn)行后續(xù)培養(yǎng)擴(kuò)增。與貼壁法獲得的NPMSCS相比，流式分選的NPMSCS具有更強(qiáng)的增殖與分化能力。流式細(xì)胞分選方法為研究NPMSCS的生物學(xué)特性提供了可靠的細(xì)胞分離與純化方法。流式組獲得的NPMSCS能夠貼壁生長、完成三系分化誘導(dǎo)，提供了人髓核組織中存在間充質(zhì)干細(xì)胞的依據(jù)。

簡介：第一軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文肝癌干細(xì)胞生物學(xué)特征及個(gè)體化化療應(yīng)用研究姓名周思朗申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師張積仁20060510物學(xué)特征。以此探討肝癌干細(xì)胞的存在和可能生物學(xué)特征。最后利用腫瘤干細(xì)胞與成體干細(xì)胞關(guān)系，研究間充質(zhì)干細(xì)胞在針對(duì)肝癌干細(xì)胞、個(gè)體化的藥物敏感實(shí)驗(yàn)應(yīng)用前景。具體包括以下幾方面1研究化療藥物連續(xù)刺激下，不同藥物間肝癌細(xì)胞耐藥及增殖相關(guān)蛋白表達(dá)的相關(guān)性，探討肝癌個(gè)體化化療的必要性。2根據(jù)腫瘤干細(xì)胞來源于相應(yīng)成體干細(xì)胞的規(guī)律，通過肝癌干細(xì)胞的對(duì)應(yīng)成體干細(xì)胞肝卵圓細(xì)胞表面標(biāo)記分選肝癌細(xì)胞，找出高致瘤能力的肝癌干細(xì)胞樣細(xì)胞，并進(jìn)一步研究其生物學(xué)特征。3研究骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與肝癌細(xì)胞藥敏與肝癌細(xì)胞成瘤能力的相關(guān)性，了解間充質(zhì)干細(xì)胞在個(gè)體化的藥物敏感實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用前景。第一部分持續(xù)化療肝癌細(xì)胞耐藥蛋白、增殖蛋白表達(dá)規(guī)律目的研究不同常規(guī)化療藥物連續(xù)刺激下，肝癌細(xì)胞株耐藥及增殖相關(guān)蛋白表達(dá)的變化的相關(guān)性。方法HEPG2細(xì)胞株經(jīng)阿霉素ADM、氟尿嘧啶5FU、順鉑DDP、聯(lián)合化療刺激。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)分別檢測耐藥相關(guān)蛋白MDRL、MRP以及LRP與增殖相關(guān)蛋白ERBB．2和C．MYC的陽性細(xì)胞數(shù)及平均熒光強(qiáng)度，以此推算出不同藥物連續(xù)作用細(xì)胞株后各耐藥相關(guān)蛋白與增殖蛋白總表達(dá)量。分析不同化療藥物持續(xù)作用6個(gè)刺激周期后，耐藥相關(guān)蛋白與增殖蛋白總表達(dá)量變化的相關(guān)性。結(jié)果各化療藥物組以及聯(lián)合化療藥物組連續(xù)刺激細(xì)胞株6個(gè)周期，表達(dá)的ERBB．2、C．MYC、MDRL、MRP以及LRP抗體總量變化未發(fā)現(xiàn)明顯規(guī)律。將各藥物組不同周期表達(dá)的抗體總量進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果如下1應(yīng)用不同藥物刺激HEPG2細(xì)胞6個(gè)周期，對(duì)MDRL抗體表達(dá)總量進(jìn)行相關(guān)性分析ADM組與5FU組，相關(guān)系數(shù)R一0．512，P0．299ADM組與DDP組，相關(guān)系數(shù)R0．783，P0．066；ADM組與聯(lián)合組，相關(guān)系數(shù)I一0．446，P0375；5FU組與DDP組，相關(guān)系數(shù)R一0．491，P0．323；5FU組與聯(lián)合組，相關(guān)系數(shù)I一0．046，P0．931；DDP組與聯(lián)合組，相關(guān)系數(shù)F．0．549，P0．259。II

簡介：分類號(hào)分類號(hào)R7353R7353學(xué)校代碼學(xué)校代碼10392學(xué)科專業(yè)代碼學(xué)科專業(yè)代碼100210100210學(xué)號(hào)號(hào)2111003128福建醫(yī)科大學(xué)碩士研究生畢業(yè)論文X線照射對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞線照射對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞SW480的上皮間質(zhì)化及其的上皮間質(zhì)化及其生物學(xué)特性影響的研究物學(xué)特性影響的研究THEINFLUENCEOFXRAYRADIATIONONEPITHELIALTOMESENCHYMALTRANSITIONINSW480COLORECTALCARCINOMACELLSANDITSBIOLOGICALCHARACTERISTICS學(xué)位類型型學(xué)術(shù)型碩士學(xué)術(shù)型碩士所在學(xué)院院第一臨床第一臨床醫(yī)學(xué)院學(xué)院研究生生王罡學(xué)科學(xué)科、專業(yè)專業(yè)外科學(xué)（普外）外科學(xué)（普外）導(dǎo)師師戴起寶戴起寶副教授教授陳紹勤陳紹勤副教授教授研究起止日期研究起止日期2013年3月至月至2014年1月答辯日期答辯日期2014年6月目錄英語縮略詞表1中文摘要2英文摘要4引言6材料與方法8結(jié)果22討論30結(jié)論33參考文獻(xiàn)34綜述37致謝43

簡介：點(diǎn)擊查看更多環(huán)孢素A對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞生物學(xué)功能及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的調(diào)節(jié)作用.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：Y994758學(xué)校代碼10610學(xué)號(hào)S032789四川大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文黏著斑激酶對(duì)高轉(zhuǎn)移性腺樣囊論文題目性癌細(xì)胞生物學(xué)特性影響的初步研究作指導(dǎo)教師姓名／職稱何志秀教授二OO六年五月四川丈學(xué)華西口腔醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)住論乏縮略詞EAKACCACCMBPAS0DNEDLAMTTDMSOBSA0DR1二PCRTUNELFCMDEPCI叮ENECMFNBM縮略詞表英文全稱FOCALADHESIONKINASEADENOIDCYSTICCARCINOMAADENNOIDCYSTICC∞CINOMAMBASEPAIRANTISENSEOLIGODEOXYNUCLEOTIDEETHYLENEDIAMINETETRAACETILALID345DIMETHYLTHIAZOL一2一Y02，5DIPHENYLTETRAZOLIAMBROMIDEDIMETHYLSULFOXIDEBOVINESELAMALBUMINOPTICALDENSITYREVERSETRANSCRIPTIONPOLYMERASECHAINREACTION1DT曲EDIATEDDUTPNICKENDLABELFLOWCYTOMETRYDIETHYPYROCARBONATEPHOSPHATASEANDTENSINHOMOLOGDELETED0NCHROMOSOMETENEXTRACELLULARMATRIXFIBRONE斌INBASEMENTMEMBRANE中文名稱黏著斑激酶腺樣囊性癌腺樣囊性癌M細(xì)胞系堿基對(duì)反義寡核苷酸乙二胺四乙酸四甲基偶氮唑藍(lán)二甲亞砜小牛血清吸光度或光密度逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)TDT介導(dǎo)的DUTP缺口末端標(biāo)記技術(shù)流式細(xì)胞術(shù)焦碳酸二乙脂蛋白酪氨酸磷酸酶基因細(xì)胞外基質(zhì)纖維粘連蛋白基底膜

簡介：復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文GNMT的表達(dá)及調(diào)控對(duì)人前列腺癌細(xì)胞系LNCAP和PC3生物學(xué)特性的影響IMPACTOFGNMTEXPRESSIONANDREGULATIONONTHEBIOLOGICALCHARACTERISTICSOFHUMANPROSTATECANCERCELLLINESLNCAPANDPC3院系專業(yè)姓名指導(dǎo)教師導(dǎo)師組成員華山醫(yī)院。外科學(xué)童仕俊丁強(qiáng)教授方祖軍教授姜吳文教授孫劍良副教授完成日期2014年3月18K7目錄中文摘要1英文摘要5前言9日U舌9第一部分GLUT在人前列腺癌細(xì)胞系LNCAP和PC3中的表達(dá)研究內(nèi)容LL實(shí)驗(yàn)方法LL實(shí)驗(yàn)結(jié)果16討念20結(jié)論21第二部分GNMT的體外調(diào)控對(duì)人前列腺癌細(xì)胞系LNCAP和PC3生物學(xué)特性的影響研究內(nèi)容22實(shí)驗(yàn)方法22實(shí)驗(yàn)結(jié)果26討念49結(jié)論53第三部分GNMT的體內(nèi)調(diào)控對(duì)人前列腺癌細(xì)胞系PC3成瘤作用的影響研究內(nèi)容54實(shí)驗(yàn)方法54實(shí)驗(yàn)結(jié)果58討侖62結(jié)念63研究總結(jié)64參考文獻(xiàn)65文獻(xiàn)綜述GNMT在腫瘤中的多功能作用68致謝81

簡介：點(diǎn)擊查看更多再生障礙性貧血患者骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性及成脂分化異常研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：干細(xì)胞是指具有高度增殖和自我更新能力并可分化為多種不同類型組織細(xì)胞的一類細(xì)胞該文是研究利用MSCS進(jìn)行創(chuàng)傷促愈項(xiàng)目的一部分在建立小鼠骨髓MSCS體外分離培養(yǎng)體系的基礎(chǔ)上研究尾靜脈移植的骨髓MSCS在創(chuàng)傷小鼠體內(nèi)的分布定位情況該文采用密度為1082的細(xì)胞分離液PERCOLL通過密度梯度分離小鼠的單個(gè)核細(xì)胞利用MSCS早期貼壁的特點(diǎn)24小時(shí)內(nèi)換液去掉造血細(xì)胞分離培養(yǎng)骨髓MSCS研究其在體外傳代培養(yǎng)中的生長曲線、貼壁率及細(xì)胞周期等細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)和超微結(jié)構(gòu)并通過間接手段誘導(dǎo)向成骨細(xì)胞和成脂細(xì)胞分化來驗(yàn)證分離獲得的MSCS是否具有多向分化的能力