簡介：背景激活的肝星狀細胞（HSC）是肝纖維化發(fā)生發(fā)展的中心環(huán)節(jié)其最顯著的特征之一是胞質(zhì)內(nèi)維生素A類明顯減少或消失維甲酸（RA）是維生素A類重要衍生物通過其核內(nèi)受體（RARS）調(diào)節(jié)細胞的增殖、分化和凋亡已有報道在實驗性肝纖維化發(fā)生過程中HSC胞質(zhì)內(nèi)全反式維甲酸（ATRA）和9順式維甲酸（9CISRA）的含量明顯減少維甲酸核內(nèi)受體（RARΒ、RXRΑ）的表達也大幅下降補充外源性RA可明顯減輕致癌劑導致的肝纖維化在體外還可拮抗TGFΒ、PDGF刺激HSC增殖及誘導Ⅰ型前膠原MRNA水平升高的作用提示RA和RA核內(nèi)受體的相互作用是維持HSC于靜息狀態(tài)或調(diào)節(jié)HSC某些功能的重要環(huán)節(jié)PDGF是HSC的強有絲分裂原這種作用主要通過細胞內(nèi)MAPK信號轉導途徑介導也可通過SAPKJNK途徑活化JNK上調(diào)AP1活性AP1與相應的DNA序列結合調(diào)節(jié)靶基因如Ⅰ型前膠原（Α1）和TGFΒ等的轉錄水平結論1RXRΑ、RARΒ受體轉染可顯著回升PDGF激活后HSC內(nèi)下降的RXRΑ、RARΒ受體水平給予相應配體后受體的高表達可維持一段時間2RXRΑ、RARΒ受體轉染并給予相應配體可抑制活化HSC的增殖3RXRΑ、RARΒ受體轉染并給予相應配體可明顯下調(diào)活化HSC的ΑSMA、DESMIN蛋白表達水平4RARΒ受體轉染并給予相應配體ATRA后活化HSC的Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型膠原及FN蛋白表達水平及Ⅰ、Ⅲ型膠原、FNMRNA水平明顯降低RXRΑ受體轉染并給予相應配體9CISRA后活化HSC的Ⅰ型膠原、FN蛋白表達及MRNA水平明顯降低但對Ⅲ、Ⅳ型膠原蛋白表達及Ⅲ型膠原MRNA水平無明顯影響5RXRΑ、RARΒ受體轉染并給予相應配體可明顯抑制PDGF上調(diào)的MEK1、ERK蛋白表達及MRNA水平ERK、JNK磷酸化水平AP1的結合活性

簡介：點擊查看更多一 心肌梗死后骨髓干細胞動員作用的實驗研究;二 冠心病人骨髓間充質(zhì)干細胞生物學特性及分化.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：點擊查看更多急性髓性白血病間充質(zhì)干細胞生物學特性的研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：南昌大學醫(yī)學院碩士學位論文人胃癌細胞中熱休克蛋白（HSP）GP96和NM23表達的生物學意義及相關性研究姓名邵龍華申請學位級別碩士專業(yè)內(nèi)科學（消化內(nèi)科）指導教師熊鋒寶20080601摘要P0．05；侵犯深度中MPSO64．3％與MPSL．357．7％的差異性無統(tǒng)計學意義X2O．1648，P0．05。結論L、胃癌組織細胞中熱休克蛋白GP96表達明顯高于慢性胃炎及消化性潰瘍，這提示了熱休克蛋白GP96參與胃癌的發(fā)生。而在低分化胃癌的組織中的表達明顯高于中高分化胃癌；有淋巴結轉移的胃癌組織中的表達明顯高于無淋巴結轉移者；TNM分型中HIIV組織中的表達明顯高于IⅡ型，說明了它與腫瘤的浸潤轉移密切相關；而不同大體形態(tài)及侵犯深度中，熱休克蛋白GP96表達存在差異，這也從另一個側面反應了熱休克蛋白GP96在腫瘤大體形態(tài)及侵犯深度中的作用機制可能不同。2、胃癌組織細胞中RIM23表達明顯低于慢性胃炎及消化性潰瘍，這提示了NM23與胃癌的形成有關。而在低分化胃癌的組織中的表達明顯低于中高分化胃癌；有淋巴結轉移的胃癌組織中的表達明顯低于無淋巴結轉移者；TNM分型中HIIV組織中的表達明顯低于III型，說明了它與腫瘤的浸潤轉移密切相關；而不同大體形態(tài)及侵犯深度中，NM23表達存在差異，這也從另一個側面反應了NM23在腫瘤大體形態(tài)及侵犯深度中的作用機制可能不同。3、在胃癌的形成中，與熱休克蛋白GP96表達呈正相關，而與RIM23的表達呈負相關；在胃癌不同的臨床病理分期中，熱休克蛋白GP96與分化程度、淋巴結轉移，TNM分型表達呈正相關而NM23與之相反。試驗表明熱休克蛋白GP96及NM23在胃癌的形成和浸潤轉移中存在著協(xié)同作用。因而熱休克蛋白GP96及NM23可作為胃癌的早期診斷、判斷腫瘤預后的指標檢測，其表達強度的高低有望成為指導臨床治療的一個手段。關鍵詞胃癌免疫組織化學熱休克蛋白GP96RIM23III

簡介：血管平滑肌細胞（VULARSMOOTHMUSCLECELLSVSMCS）是血管壁主要細胞成分之一，它由收縮表型向合成表型去分化（DEDIFFERENTIATION）是血管重建（REMODELING）發(fā)生發(fā)展過程中的重要事件。VSMCS的細胞外基質(zhì)（EXTRACELLULARMATRIX，ECM）合成參與調(diào)控細胞增殖和遷移，對維持血管壁彈性和功能穩(wěn)定具有重要作用。血液動力學因素和生長因子是引起VSMCS表型轉化和細胞外基質(zhì)合成的重要因素。在體VSMCS主要受到脈動血流產(chǎn)生的機械張應力的作用，轉化生長因子Β1（TRANSFMINGGROWTHFACTΒ1，TGFΒ1）是調(diào)控VSMCS表型轉化和ECM合成的重要生長因子之一。研究周期性張應變和TGFΒ1對VSMCS分化和ECM的影響及其機制，對于探討血管重建機制有重要的意義。本文應用FX4000T細胞張應變加載系統(tǒng)，對體外培養(yǎng)的大鼠VSMCS施加10％周期性張應變，頻率為125HZ，加載時間為24H，以未加載張應變的靜態(tài)VSMCS為對照組。采用WESTERNBLOTTING檢測組蛋白去乙?；窼IRT1和SIRT2以及收縮表型標志分子Α肌動蛋白（ΑACTIN）、調(diào)寧蛋白（CALPONIN）和肌動蛋白相關蛋白（SM22?。┑鞍姿降淖兓灰种苿㏒ALERE抑制SIRT1和SIRT2表達，基因芯片篩查SALERE干預下周期性張應變加載VSMCS的差異表達基因，以研究SIRT1和SIRT2在生理范圍周期性張應變對VSMCS表型分化中的影響及其分子機制。使用10NGML濃度的TGFΒ1重組蛋白對體外培養(yǎng)的VSMCS刺激24H，以未加刺激的VSMCS為對照組，采用WESTERNBLOTTING檢測SIRT1、SIRT2，收縮表型標志分子CALPONIN、SM22Α，ECMCOLLAGENI、ELASTIN、COLLAGENIII蛋白水平的變化；抑制劑SALERE或SIRNA干擾抑制SIRT1和SIRT2表達，以研究SIRT1和SIRT2在TGFΒ1對VSMCS表型分化和細胞基質(zhì)合成中的影響及其分子機制。結果顯示①施加10125HZ周期性張應變誘導VSMCS收縮表型標志分子ΑACTIN、CALPONIN和SM22Α的表達增加；②周期性張應變誘導SIRT1和SIRT2的蛋白表達增加；③SIRT1和SIRT2抑制劑SALERE抑制周期性張應變誘導的SIRT1和SIRT2的表達，同時顯著抑制VSMCS收縮表型標志分子的表達；④基因芯片篩選121個差異表達基因，可能受SIRT1和SIRT2調(diào)控，參與包括分化在內(nèi)的多種生物過程。⑤10NGML濃度的TGFΒ1重組蛋白刺激24H，誘導VSMCS收縮表型標志分子CALPONIN、SM22Α和ECMCOLLAGENI、ELASTIN、COLLAGENIII的表達上升；⑥TGFΒ1誘導SIRT1和SIRT2的蛋白表達增加；⑦SALERE抑制TGFΒ1誘導的SIRT1和SIRT2的表達，同時顯著抑制VSMCS收縮表型標志分子CALPONIN、SM22Α和ECMCOLLAGENI、ELASTIN的表達，但是對COLLAGENIII無顯著影響；⑧SIRT1和SIRT2的SIRNA干擾抑制TGFΒ1誘導的SIRT1和SIRT2表達，顯著抑制VSMCS收縮表型標志分子CALPONIN、SM22Α的表達。⑨SALERE抑制TGFΒ1誘導的SMAD5、AKT、ERK磷酸化，但是對CTGF無影響。上述結果表明，周期性張應變和TGFΒ1可誘導體外培養(yǎng)的合成型VSMCS分化為收縮表型，TGFΒ1可誘導VSMCSECMCOLLAGENI和ELASTIN合成，其機制都與SIRT1和SIRT2信號通路相關。結果提示，在體情況下血管正常范圍的張應變以及TGFΒ1刺激，能防止VSMCS由收縮表型向合成表型去分化，促進ECM合成，維持血管結構和功能的穩(wěn)定。

簡介：中國協(xié)和醫(yī)科大學博士學位論文胎兒多種組織間充質(zhì)干細胞生物學特征及胎兒骨髓血液血管干細胞特性的研究姓名郭虹申請學位級別博士專業(yè)病理學與病理生理學指導教師趙春華200341中國協(xié)和醫(yī)科大學中國醫(yī)學科學院博士研究生學位論文染色鈣鹽塵積的成骨細胞分化，說明都能向脂肪細胞和成骨細胞分化。另外，我們分離的闖充質(zhì)干細胞在誘導分化成為脂肪細胞后CDL05的表達明顯下降、有的脂肪細咆甚至丟失提示CDL05可能在維持間充質(zhì)干細胞的干細胞特性上起關鍵作用，進一步證明了CDL05是間充質(zhì)干細胞的重要表型。以上結果說明從心、肝、肺、主動脈血管、真皮和骨骼肌分離的CDL05成纖維樣的細胞具有問充質(zhì)干細胞的特征，提示分布于各組織器官的CDL05的細胞含有問充質(zhì)干細胞?？赡芘c所在的組織和器官損傷后的細胞再生與修復有關。第二部分我們分析了從多種組織和器官分離的間充質(zhì)干細胞在向脂肪細胞和成骨細胞分化時的特征并討論了與某些疾病潛在的關系。在向脂肪細胞分化時，地塞米松可以促進脂肪的分化，透射電鏡結果顯示誘導的脂肪細胞胞漿內(nèi)外可見有胞膜的脂滴，培養(yǎng)液中甘油三酯的含量增高。另外，在向成骨細胞誘導分化時，細胞內(nèi)和細胞外均可見鈣鹽沉積。此結果說明分布于各組織的間充質(zhì)干細胞在脂肪細胞誘導條件下，可以產(chǎn)生含有甘油三酯的脂滴并溢出細胞外，并且地塞米松促進脂肪的分化；在向成骨細胞誘導條件下，在胞漿內(nèi)形成鈣鹽沉積并分泌至細胞外。提示多種組織和器官的間充質(zhì)干細胞向脂肪和成骨細胞異常分化，可能會影響脂類的代謝或細胞的正常功能，可能與動脈粥樣硬化，高脂血癥和硬化病等疾病有關。因此，對間充干細胞的增殖和分化的調(diào)控研究將可能提供治療與之相關的疾病的新的方法。第三部分我們進一步探討了TGF3I對間充質(zhì)干細胞分化與增殖的影響。CDL05作為TGFB1的III型受體，可以與I和II組成功能性的受體復合物。為此，我們在間充質(zhì)干細胞分化時加入TGFPI觀察其對細胞增殖與分化的影響。結果顯示CDL05的間充質(zhì)干細胞誘導成的脂肪細胞，CDL05表達明顯降低，有的細胞甚至不表達CDL05。在向脂肪分化的過程中，加入150NG／ML的TGFPI后，一直無充滿大脂滴的脂肪細胞出現(xiàn)，在成骨誘導過程中，加入TGFIBI大于20NG／ML，鈣化基質(zhì)沉淀明顯降低。而CDL05在細胞有絲分裂時表達明顯高于非分裂相的細胞，在脂肪誘導環(huán)境中，MTT染色檢測TGFBI對細胞的增殖有促進作用PO05。2

簡介：第四軍醫(yī)大學碩士學位論文人肝癌細胞系FHCC98的建立及其生物學特性研究與體外藥理實驗姓名樓朝陽申請學位級別碩士專業(yè)腫瘤學指導教師馮英明20040501第四軍醫(yī)大學碩士學位論文縮略語HCCHABL8GCDL47PBSSDSSPHELFHABL8PAGETEMEDPICKLDHHE5FUMDRSAPKERKMMPSFCSFBSSCGECONASPFELISANBTNAD縮略語表莢文壘稱HEPATOCE|LULARCARCINOMAHEPATOMAANTIBODY18ASSOCIATEDANTIGENCLUSTEROFDIFFERENTIATION147PHOSPHATEBUFIEREDSALINESODIUMDODECYLSULFATESTREPAVIDINPEROXIDASEHUMANEMBRYONICLUNGFIBROBLASTMONOCLONALANTIBODYAGAINSTHUMANHEPATOMAL8POLYACRYLAMIDEGELELECTROPHORESISN，N，N’，N’TETRAMETHYLETHYLENEDIAMINEPROPIDIUMIODIDECYTOKERATINLACTICDEHYDROGENASEHEMATOXYLINANDEOSINSTAINING5FLIOROURACILMULTIDRUGRESISTANCESTRESSACTIVATEDPROTEINKINASEEXTRACELLULARREGULATIONKINASEMATRIXMETALLOPROTEINASESPETALCALFSERUMFETALBOVINESERUMSINGLECELLGELELECTROPHORESISASSAYCONCANAVALINASPECIFICPATHOGENFREEENZYMELINKEDIMMUNOSORBENTASSAYNITROBENZENETHIOCYANATENICOTINANIDEADENINEDINUCLEOTIDEFOXIDEDL第1頁中文全稱肝細胞肝癌肝癌單抗HABL8相關抗原白細胞分化抗原147磷酸鹽緩沖液十二烷基磺酸鈉鏈霉素抗生物素一過氧化物酶人胚胎肺成纖維細胞抗人肝癌單克隆抗體18聚丙烯酰銨凝膠電泳N，N，N’，N1一四甲基乙二胺碘化丙啶細胞角蛋白乳酸脫氫酶同工酶蘇木素伊紅染色5氟脲嘧啶多耐藥性應激活化的蛋白激酶細胞外信號調(diào)節(jié)激酶基質(zhì)金屬蛋白酶小牛血清胎牛血清單細胞凝膠電泳技術刀豆球蛋白A無特定病原體酶聯(lián)免疫吸附實驗氯化硝基四氯唑藍氧化型輔酶I

簡介：山東大學碩士學位論文人牙髓細胞體外培養(yǎng)模型的建立及生物學特性研究姓名張春艷申請學位級別碩士專業(yè)口腔臨床醫(yī)學（口內(nèi)）指導教師孫善珍20030422山東太學碩士學位論文久牙髓纓腱囂多}培莽模鍪鰉建變愛生物學特毪研究?牙髓干細胞定位的初步探討研究生張春艷導師孫謄珍教授中文摘要囂豹邋過建立囂麓、穰髓纓魅熬體羚培養(yǎng)模鱉，研究斃較幫贛粒體癸生長特性、堿性磷酸酶活性以及礦化結節(jié)形成的能力；并引入礦化小結作為牙黼干細胞體鈴分化的標記，初步探討牙髓干細胞在瓣髓、根髓中的存在情況，為牙髓予緇瑰靜迸一移琴}究羹定墓獺。方法采用臨床因正畸或阻生拔除的第三磨牙，于無菌條件下分別取出冠髓、根髓1用組織塊法和組織塊酶解法分鄹進行冠、根髓的原代培養(yǎng)。2繪裁生長魏線；采靂黼疆酉睦釜滾溺定鬃爨璜熬活毪；考罵麓亮夔法測定細胞器白質(zhì)含量。3體外持續(xù)培養(yǎng)冠髓、檄髓細胞并分別設對照組和實驗組，對照綴用正常培養(yǎng)滾，實驗組在囊鬻培莽滾熱入10NMOL／L遮褰張撿、TOMMOL／L§一甘油磷酸鈉、50MG／L，維生素C。分別于培養(yǎng)的5、LO、15天時進行堿性磷酸酶染色，對冠髓和根髓細胞的ALP活性以及鼴組的ALP活性分蘩送行魄鞍。4冠髓、根髓細胞體外持續(xù)培養(yǎng)，用蔭索紅和VONKOSSA兩種染甑方法觀察冠、檄髓細胞礦化縭節(jié)形成情況。

簡介：研究目的1體外建立K562IMATINIB耐藥細胞株并對其生物學特性初步探討。2研究其可能的耐藥機制，為腫瘤耐藥的研究提供實驗室條件。研究方法1K562耐藥細胞耐藥克隆建立以伊馬替尼IMATINIB濃度梯度遞增法誘導K562細胞耐藥。極限稀釋法克隆篩選，建立耐藥細胞株。2K562R的生物學特性分析24孔板培養(yǎng)K562R和K562S，繪制細胞生長曲線。MTT法檢測不同濃度組的伊馬替尼對K562S和K562R耐藥性。3K562R耐藥機制的初步分析PCR技術擴增BCRABL融合基因及MDRL多藥耐藥基因。測序分析ABL酪氨酸激酶區(qū)有無點突變。流式細胞術檢測PGP表達。研究結果1KS62R的克隆純化和生物學特性分析極限稀釋法成功克隆篩選出6株K562IMATINIB純化細胞株，其能長期存活于5ΜMOLL的伊馬替尼培養(yǎng)液中。細胞生長曲線顯示5ΜMOLL伊馬替尼作用于K562R細胞120H，活細胞數(shù)量與0H活細胞數(shù)量相比呈指數(shù)遞增。6個濃度梯度的伊馬替尼0、025、05、075、10、20ΜMOLL作用于K562S細胞24H，發(fā)現(xiàn)所有濃度0濃度除外伊馬替尼均可明顯抑制K562S細胞的生長，24H細胞活力幾乎為零。MTT法抑制率測定K562S細胞IC50為067±009ΜMOLL，K562R細胞約為1017±085ΜMOLL，耐藥倍數(shù)約為15倍，細胞耐藥性明顯增加，各耐藥細胞株間IC50無顯著性差異。2K562R耐藥機制的初步分析巢式PCR檢測K562R及K562S細胞株均有1579BP及863BP大小BCRABL融合基因表達，863BP目的基因序列測定未發(fā)現(xiàn)點突變。RTPCR檢測發(fā)現(xiàn)一株耐藥細胞MDR1表達陽性，流式細胞術檢測其PGP弱陽性，兩者具有一致性。結論1體外成功建立K562IMATINIB耐藥細胞株6株，平均耐藥濃度為1017±085ΜMOLL，耐藥倍數(shù)約為15倍，耐藥性明顯增加。各耐藥細胞株間IC50無顯著性差異。2多藥耐藥基因MDRL及其編碼蛋白PPG參與了K562R6的耐藥機制。3BCRABL激酶區(qū)序列測定未發(fā)現(xiàn)點突變，其耐藥機制有待于更進一步的研究。

簡介：分類號密級尺1夠．轉么千L單位代碼10422學號P小夠3Z⑧∥蔡辦I碩士學位論文論文題目THESISFORMASTERDEGREE朋2刮匡瑾繃胞對人乞舌，絢岔勿施厶協(xié)忱怕歷訝坦翮影_向．EFF彩。7肌M叩諏叭召C．口幻，以渺PF以～二鋤樅咖胖批銣厶L／，作者學院專業(yè)指導合作姓名名稱名稱教師導師墊疊匡辱}鉑園九殳副彀數(shù)為節(jié)年歲月2日目錄中文摘要?????????????????????????1英文摘要?????????????????????????4符號說明?????????????????????????71LJL一日U舌???????????????????????????9實驗材料和方法????????????????????????15實驗結果????????????????????????29討論??????????????????????????34參考文獻????????????????????????37致謝??????????????????????????43攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文???????????????44

簡介：第四軍醫(yī)大學碩士學位論文凝血酶對人牙髓成纖維細胞的生物學效應及其受體在人牙髓組織中表達的研究姓名王美霞申請學位級別碩士專業(yè)口腔科學口內(nèi)指導教師張郁200051第四軍醫(yī)大學碩士學位論文，觀察凝血酶作用后HDPF超微結構的變化。F結果與對照組相比較，凝血酶1～25U／M1刺激48H后，HDPF明顯向周圍伸展，體積變大，突起增多、伸長，變得粗大，核仁突出，核質(zhì)比增加，胞漿豐富，可見較豐富的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和大量核糖體，高爾基復合體發(fā)達，呈典型的生長合成旺盛像。提示凝血酶可能通過改變HDPF的超微結構，而增加細胞遷移、游走能力，促使細胞分裂增殖、合成膠原等細胞外基質(zhì)?！?凝血酶受體TR在人牙髓組織和培養(yǎng)的HDPF中的表達為了探討凝血酶對牙髓的作用機理，采用免疫組化方法觀察了TR在人牙髓組織和培養(yǎng)的HDPF中表達的研究。結果體外培養(yǎng)的TDPF呈強陽性染色，經(jīng)凝血酶作用的HDPF，與對照組相比，染色強度無明顯差異正常及炎癥的牙髓組織中成牙本質(zhì)細胞層、牙髓細胞及血管內(nèi)皮細胞呈廣泛的陽性表達；炎癥牙髓組織中可見炎癥浸潤區(qū)的淋巴細胞、單核細胞染色為陽性。提示HDPF的TR表達水平不受凝血酶濃度調(diào)控，凝血酶對牙髓的作用，可能與其表達TR密切相關。斗關鍵詞凝血酶受體人牙髓成纖維細胞人牙髓

簡介：華中科技大學同濟醫(yī)學院碩士學位論文異位子宮內(nèi)膜細胞的生物學特性研究姓名錢坤申請學位級別碩士專業(yè)婦產(chǎn)科學指導教師何福仙200251蘭型墊奎蘭旦塑墨蘭墮』生竺型I蘭一6．23／一0．64PO．O1。4、異位內(nèi)膜ECADHERIN表達積分為3．45／1．45顯著低于正常內(nèi)日苴RR50／．089OO1、。、L一1廠一“P膜8．O01廣Y。結論1、異位內(nèi)膜細胞并非高度增殖而是表現(xiàn)為抗凋亡、侵襲性。2、本實驗提示異位內(nèi)膜細胞的細胞周期受到了正常的調(diào)控。3、異位內(nèi)膜細胞的生物學特性在EM的病因及病理生理中起著重要作用。關鍵詞子宮內(nèi)膜異位癥鈣粘素．E●KI。67細胞周期細胞凋亡

簡介：研究背景銀屑病PSIASIS是一種常見的慢性炎癥性皮膚病，病情頑固，且發(fā)病率在逐年增高。該病組織病理改變主要為表皮角質(zhì)形成細胞KERATINOCYTE，KC過度增殖和分化異常，真皮乳頭毛細血管增生、擴張，以及真表皮內(nèi)炎癥細胞浸潤。近年來，銀屑病發(fā)病的免疫機制備受關注，對銀屑病患者皮損處T細胞的特性及其產(chǎn)生細胞因子功能的研究發(fā)現(xiàn)，一種新的調(diào)節(jié)性T細胞即TH17細胞及其活化后產(chǎn)生的細胞因子INTERLEUKIN17AIL17A、IL17F和IL22在銀屑病的發(fā)病中具有重要作用。一個重要發(fā)現(xiàn)是在銀屑病患者的皮損及血漿中IL22表達均顯著增加。研究表明，IL22阻礙KC的終末分化，誘導KC的促炎基因表達和KC的遷移。然而目前并不十分明確IL22介導的KC效應的細胞分子機制。GRB2相關結合蛋白12GRB2ASSOCIATEDBINDER12，GAB12是一類腳手架接頭蛋白，主要參與膜表面受體酪氨酸激酶和非受體酪氨酸激酶的信號轉導。磷酸化的GAB1通過與含有2個SRC同源結構域SH2的蛋白酪氨酸磷酸酶SRCHOMOLOGY2DOMAINCONTAININGTYROSINEPHOSPHATASE，SHP2相互作用，具有調(diào)節(jié)表皮細胞生長因子誘導的表皮生長和分化，但尚不清楚GAB1以及同樣高表達于KC細胞上的GAB2在IL22誘導的KC增殖、遷移和分化中是否發(fā)揮作用銀屑病屬于中醫(yī)“白疕”、“蛇虱”、“松皮癬”等范疇。清熱解毒，涼血活血是中醫(yī)治療本病的重要治則。紫草味甘、咸，性寒，有涼血、活血、清熱、解毒透疹等功效。紫草素SHIKONIN為紫草中的主要有效成分之一，具有多種藥用價值，包括抗腫瘤、抗菌、抗病毒、抗炎、鎮(zhèn)靜、清熱解毒、免疫調(diào)節(jié)以及促進傷口愈合等。在對紫草素誘導腫瘤細胞凋亡機制的研究中發(fā)現(xiàn)，紫草素可調(diào)節(jié)促分裂原活化蛋白激酶激酶MITOGENATIVATEDPROTEINKINASEKINASE，MAPK通路的活性，降低ERK，JNK，STAT3磷酸化水平，從而抑制腫瘤細胞生長、增殖、存活。臨床發(fā)現(xiàn)紫草素治療銀屑病具有較好的療效，但其機制尚有待探討。我們提出一假設，即紫草素通過拮抗IL22刺激皮膚角質(zhì)形成細胞引起的GAB12的磷酸化，進一步抑制其下游ERKMAPK信號通路的活化，從而抑制KC增殖，影響KC分化及遷移等。本文的研究目的第一部分研究紫草素對IL22刺激HACAT細胞生物學行為影響1觀察紫草素對IL22刺激HACAT細胞增殖、遷移的影響2觀察紫草素對IL22刺激HACAT細胞分泌S100A7，S100A8、S100A9的影響。第二部分紫草素對IL22刺激HACAT細胞生物學行為改變的機制研究1研究IL22刺激HACAT細胞中JAK1TYK2STAT，ERKMAPK信號通路中相關蛋白表達2研究IL22刺激GAB1和GAB2突變體（SHP2結合缺陷型）感染的HACAT細胞中ERKMAPK信號通路中相關蛋白表達3研究IL22刺激GAB1和GAB2基因沉默的HACAT細胞中ERKMAPK信號通路中相關蛋白表達4探討GAB1和GAB2是否共同參與IL22誘導的細胞增殖和遷移以及對細胞分化的影響5研究IL22刺激HACAT細胞后GAB1、GAB2以及ERK12磷酸化水平及紫草素干預后的變化。研究方法1WST1法檢測細胞增殖2TRANSWELL法檢測細胞遷移3REALTIMEPCR法檢測基因MRNA表達4WESTERNBLOT法檢測相關蛋白的表達5免疫沉淀技術檢測特定蛋白間的相互作用6構建SHP2結合缺陷型GAB1和或GAB2以及GAB1和GAB2SIRNA干擾的重組腺病毒7統(tǒng)計學分析采用SPSS170統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，P＜005時差異有統(tǒng)計學意義。研究結果1紫草素抑制HACAT細胞的生長不同濃度的紫草素對HACAT細胞的生長有一定的抑制作用，但低濃度時（濃度為01和025ΜGML），紫草素本身不影響細胞活性，對HACAT細胞無損傷及毒性作用。2紫草素抑制IL22介導的HACAT細胞增殖和遷移實驗分組未處理（未加紫草素和IL22）組、IL22刺激24H組、IL22紫草素24H組，IL22刺激48H組、IL22紫草素48H組。紫草素作用濃度選擇為025ΜGML，IL22推薦工作濃度為100NGML，IL22刺激HACAT細胞24H和48H后可促進細胞增殖和遷移，與未處理組相比，P均＜005加入紫草素組，IL22誘導的HACAT細胞增殖和遷移作用被抑制，P均＜005。3紫草素可下調(diào)IL22誘導的促炎癥因子S100A7、S100A8MRNA表達REALTIMEPCR檢測紫草素對IL22刺激HACAT細胞分泌促炎癥因子S100A7、S100A8，S100A9MRNA影響，根據(jù)擴增曲線由公式得出2△CT值（即實驗組目的基因的表達相對于對照組基因的變化倍數(shù)），IL22刺激S100A7S100A8MRNA表達與未處理組相比其差別倍數(shù)（2△△CT）均大于2，而加入紫草素組與IL22組相比其差別倍數(shù)均小于1，表明IL22可明顯刺激HACAT細胞分泌S100A7，S100A8，而紫草素可下調(diào)IL22誘導的S100A7S100A8MRNA表達，但對S100A9MRNA的影響不明顯。4IL22誘導HACAT細胞JAK1TYK2STAT通路、MAPK通路的活化HACAT細胞饑餓處理1618H后，加入IL22100NGML刺激10MIN、20MIN、30MIN、60MIN以及120MIN，提取總蛋白，WESTERNBLOT檢測到IL22刺激10MIN后即可見JAK1TYK2STAT通路中STAT3TYR705位酪氨酸磷酸化、STAT3SER727位絲氨酸磷酸化、JAK1以及TYK2磷酸化MAPK通路中ERK12和P38磷酸化。MEK抑制劑PD9805910ΜM預處理HACAT細胞1H，然后再用IL22刺激，則ERK12活化被抑制，同時PD98059預處理后IL22誘導的HACAT細胞的增殖及遷移亦被抑制（P分別＜001和＜005），而KC細胞分化標志性蛋白LICRM在IL22刺激72H后仍未檢測到表達，但PD98059預處理后再用IL22刺激則LICRIN表達明顯增加。5IL22刺激HACAT細胞引起GAB1和GAB2磷酸化，并進一步活化ERK12IL22刺激饑餓處理后的HACAT細胞，10MIN后裂解細胞，采用免疫共沉淀技術及免疫印跡技術檢測IL22刺激后，GAB1和GAB2磷酸化水平明顯升高，SHP2結合增強。以表達SHP2結合缺陷型GAB1和GAB2重組腺病毒ADGAB1FF、ADGAB2F以及野生型GAB1和GAB重組腺病毒ADGAB1WT、ADGAB2WT感染HACAT檢測IL22刺激引起的ERK12以及STAT3TYR795蛋白活化水平，結果發(fā)現(xiàn)，ERK12磷酸化水平在ADGAB1FFHACAT、ADGAB2FHACAT組明顯降低，STAT3TYR795磷酸化水平在缺陷型組及野生型組基本沒有變化IL22刺激SIRNA沉默GAB1和或GAB2腺病毒感染的HACAT細胞ADGAB1SIRNAHACAT、ADGAB2SIRNAHACAT、ADGAB1SIRNAADGAB2SIRNAHACAT，檢測ERK12以及STAT3TYR795蛋白活化水平，結果發(fā)現(xiàn)，ERK12磷酸化水平在基因沉默組中明顯降低，磷酸化STAT3TYR795水平依然沒有變化。6GAB1和GAB2影響IL22誘導的HACAT細胞增殖、細胞遷移及分化與SHP2相關IL22刺激ADGAB1WTHACAT、ADGAB2WTHACAT、ADGAB1FFHACAT、ADGAB2FHACAT，24H和48H后分別檢測細胞增殖率及細胞遷移，結果ADGAB1FFHACAT、ADGAB2FHACAT組細胞增殖率減低（P均＜001），遷移細胞數(shù)減少（P均＜001）IL22刺激ADGAB1SIRNAHACAT、ADGAB2SIRNAHACAT、ADGAB1SIRNAADGAB2SIRNAHACAT，24H和48H后檢測細胞增殖率和遷移，與感染空載體HACAT細胞相比，細胞增殖率減低P＜005，P＜001，細胞遷移數(shù)減少（P均＜005）。IL22刺激重組腺病毒感染的HACAT的細胞72H后，檢測LICIN蛋白的表達，結果發(fā)現(xiàn)，與野生型組相比，基因突變和沉默組細胞LICIN的表達量均明顯增加。7紫草素拮抗IL22刺激皮膚角質(zhì)細胞引起的GAB1，GAB2以及ERK12的磷酸化IL22刺激經(jīng)紫草素025ΜGML預處理HACAT細胞，檢測GAB1和GAB2以及ERK12磷酸化水平，與未經(jīng)紫草素處理組相比，明顯減低。研究結論1紫草素能夠抑制IL22誘導的HACAT細胞的增殖和遷移，并下調(diào)IL22誘導的HACAT細胞S100A7，S100A8MRNA表達。2IL22誘導JAK1TYK2STAT及MAPK通路在HACAT細胞中的活化，介導細胞增殖、遷移和分化。3GAB1和GAB2共同參與IL22誘導的HACAT細胞中的ERKMAPK信號通路的活化，并共同參與IL22介導的細胞增殖、遷移和分化。SHP2與GAB1和GAB2結合是IL22介導的效應所必需的。4紫草素抑制IL22誘導的GAB1，GAB2以及ERK12磷酸化，從而推論紫草素治療銀屑病機制可能與抑制IL22引起的GAB1、GAB2磷酸化，進一步抑制ERK12MAPK通路活化有關。

簡介：南方醫(yī)科大學2009級博士學位論文食管癌外周血循環(huán)腫瘤細胞檢測方法和生物學特征的研究T1’’1‘‘‘‘‘‘‘‘●●LNENTILLCATMNMETHODSANDDIOL02ICALCHARACTERISTICS0T■L‘●L●L●_CIRCULATINGTLLMORCELLSINESOPHAGEALSQNAMOUSCELLCARCINOMA課題來源國際科技合作與交流專項食管癌癌變分子機理研究編號2008DFA31130和國家重點基礎研究發(fā)展計劃項目973課題腫瘤微環(huán)境分泌蛋白質(zhì)介導的上皮細胞癌變的機制研究編號2011CB910703專業(yè)名稱學位申請人指導教師答辯委員會主席答辯委員會成員臨床檢驗診斷學喬媛嬡趙曉航教授段蘊鈾教授萬成松教授徐東剛教授宋亞軍教授周春華教授王偉主任醫(yī)師周麗君研究員論文評閱人楊曄教授虞積耀教授馬驄主任技師王嘉璽研究員2012年5月3日廣州摘要大的瀑布反應。目前腫瘤的發(fā)現(xiàn)和診斷仍主要依賴于影像學檢查及腫瘤特異性血清標志物的檢測，不能及時發(fā)現(xiàn)腫瘤的轉移和復發(fā)。由于腫瘤細胞經(jīng)過血液循環(huán)系統(tǒng)轉運播散至遠端器官并且形成的明顯轉移灶是惡性腫瘤最主要的死亡原因，因此CTCS檢測能夠為腫瘤早期發(fā)現(xiàn)及轉移復發(fā)監(jiān)測提供一種有效手段。研究表明，CTCS數(shù)量及表型的改變可作為了解惡性腫瘤生物學特征及腫瘤進展的窗口，經(jīng)過非侵入性的檢測方法檢測CTCS，為腫瘤早期篩查、腫瘤治療的療效評價、轉移復發(fā)監(jiān)測和預后判斷等提供必要的信息，然而常規(guī)的檢測手段很難發(fā)現(xiàn)這些細胞。目前，采用何種方法鑒定外周血中的CTCS，以及如何找到更多的CTCS特異性標志物，以提高CTCS檢測的敏感性和特異性，成為該領域研究人員關注的焦點。本研究首先采用基于免疫磁珠的負性篩選食管癌外周血中CTCS的方法，分析CTCS與食管癌進展的關系?？偨Y了CTCS與食管癌分期、腫瘤體積大小、淋巴結轉移、遠端轉移以及患者生存時間等的聯(lián)系。研究發(fā)現(xiàn)，細胞分化程度越差、TNM分期越高，外周血CTCS檢出數(shù)量越多。CTCS水平高可能提示預后不良。外周血CTCS的檢出率，有淋巴結轉移的高于無淋巴結轉移的，腫瘤浸潤程度高的高于浸潤程度低的，腫瘤分期高的高于腫瘤分期低的，分化程度差的高于分化程度好的。術前CTCS分組以5為界值及淋巴結轉移是影響預后的顯著因素，術前CTC≥5組和CTC5組相比，病人死亡的風險為3078倍；淋巴結轉移組和淋巴結未轉移組相比，病人死亡的風險為3331倍。同時，追蹤了一例ESCC病例，動態(tài)監(jiān)測不同治療階段患者外周血中CTCS細胞形態(tài)特征及數(shù)量變化，結合影像學及血清學標志，探討其與治療療效及腫瘤進展的關系，進一步證實了CTCS對于腫瘤診斷和預后的價值。由于腫瘤具有異質(zhì)性，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中腫瘤細胞會發(fā)生上皮間葉轉變EPITHELIALMESENCHYMALTRANSFCIRMATION，EMT及間葉上皮轉變MESENCHYMALEPITHELIALTRANSITION，MET等過程，細胞的各種標志會隨著腫瘤的發(fā)生發(fā)展而改變。CTCS脫離原發(fā)灶后，在隨后的變異中有部分細胞獲得了高

簡介：背景與目的內(nèi)毒素休克等重癥感染性疾病的發(fā)病過程中，由于多種因素的作用，患者會發(fā)生絕對或相對腎上腺功能不全，導致臨床搶救成功率下降。TNFΑ是一種重要的前炎癥介質(zhì)，是內(nèi)毒素休克等重癥疾病發(fā)生發(fā)展過程中主要的炎癥介質(zhì)，可作用于下丘腦垂體腎上腺軸（HPA軸）的各個環(huán)節(jié)，影響腎上腺皮質(zhì)的功能。本課題組通過檢測TNFΑ對小鼠腎上腺皮質(zhì)Y1細胞凋亡以及皮質(zhì)醇合成的影響，應用RTPCR和免疫細胞化學方法觀察Y1細胞的TNF受體亞型的分布應用小RNA干擾法下調(diào)Y1細胞中陽性表達的TNF受體，探討TNFΑ對干擾后Y1細胞凋亡以及皮質(zhì)醇合成的影響從而明確小鼠腎上腺皮質(zhì)Y1細胞表面是否存在TNFΑ受體，存在何種受體，以及TNFΑ對Y1細胞的作用是否通過該受體發(fā)揮作用初步探討TNFΑ對Y1細胞凋亡和皮質(zhì)醇合成影響及其作用機理。研究結果可為臨床內(nèi)毒素休克等重癥感染性疾病的救治提供一定的實驗依據(jù)和理論基礎。方法1、應用流式細胞儀檢測TNFΑ在不同劑量、不同作用時間對Y1細胞凋亡的影響，同時應用酶標法檢測CASPASE8和CASPASE3的變化，探討其對細胞凋亡通路的影響2、應用放免法檢測一定濃度的TNFΑ或和ACTH作用Y1細胞不同時間后對皮質(zhì)醇合成的影響3、應用RTPCR檢測一定濃度的TNFΑ或和ACTH作用Y1細胞不同時間后對皮質(zhì)醇合成限速酶類固醇激素合成急性調(diào)節(jié)蛋白STAR表達的影響4、應用RTPCR和免疫細胞化學技術在MRNA和蛋白水平檢測Y1細胞表面TNF受體類型5、小RNA干擾法下調(diào)Y1細胞中陽性表達的TNF受體，QPCR法和WESTERNBLOT法檢測干擾效果6、應用流式細胞儀檢測TNFΑ在不同劑量、不同作用時間對TNFRMIRNAY1細胞凋亡的影響，同時應用酶標法檢測CASPASE8和CASPASE3的變化，觀察其在劑量、時間上對凋亡通路的影響7、應用放免法檢測一定濃度的TNFΑ或和ACTH作用TNFRMIRNAY1細胞不同時間后對其皮質(zhì)醇合成的影響。結果1、Y1細胞在100～250UML的TNFΑ作用不同時間后，細胞凋亡率明顯增加P＜005，同時CASPASE8和CASPASE3的表達增強，呈劑量、時間依賴性P＜005）2、TNFΑ單獨作用對Y1細胞皮質(zhì)醇合成的抑制不明顯P＞005，ACTH可明顯促進Y1細胞皮質(zhì)醇的合成P＜005，TNFΑ與ACTH共同作用后，可明顯抑制Y1細胞由于ACTH介導的皮質(zhì)醇合成的增加P＜0053、RTPCR結果顯示TNFΑ單獨作用對Y1細胞的STAR抑制作用不顯著（P＞005），ACTH單獨作用后STAR表達顯著上升P＜005）。而TNFΑ和ACTH共同作用Y1細胞STAR的表達受到抑制P＜0054、RTPCR和免疫細胞化學結果顯示Y1細胞TNFR1MRNA和蛋白表達陽性，TNFR2MRNA和蛋白表達陰性5、檢測小RNA抑制TNFR1后的TNFRMIRNAY1細胞干擾效率為7174％，WESTERNBLOT顯示TNFRMIRNAY1細胞TNFR1表達水平明顯下降6、TNFΑ對TNFRMIRNAY1細胞凋亡無明顯促進作用P＞005，對CASPASE83活性也無明顯影響P＞0057、放免結果顯示ACTH可明顯促進TNFRMIRNAY1細胞皮質(zhì)醇的合成P＞005，TNFΑ與ACTH共同作用后，對TNFRMIRNAY1細胞ACTH介導的皮質(zhì)醇合成的無明顯影響P＞005。結論1、TNFΑ能夠誘導Y1細胞的凋亡，并呈劑量時間依賴關系這種凋亡誘導作用可能是通過激活CASPASE8和CASPASE3通路實現(xiàn)的2、TNFΑ單獨作用對Y1細胞的皮質(zhì)醇合成和STAR的影響不顯著ACTH單獨作用能夠促進Y1細胞皮質(zhì)醇的合成和STAR的表達TNFΑ與ACTH共同作用可能通過下調(diào)STAR的表達而抑制Y1細胞ACTH介導的皮質(zhì)醇的合成3、從蛋白、MRNA水平證實，Y1細胞以表達TNFR1為主4、TNFΑ對干擾后的TNFRMIRNAY1細胞凋亡及凋亡相關激酶CASPASE8和CASPASE3無明顯影響同時TNFΑ與ACTH共同作用對TNFRMIRNAY1細胞的皮質(zhì)醇的合成影響不顯著，提示TNFΑ對Y1細胞的作用是通過TNFR1介導而實現(xiàn)的。