簡(jiǎn)介：第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文N乙酰半胱氨酸防治糖尿病性白內(nèi)障的動(dòng)物和細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)研究姓名張曙申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)眼科學(xué)指導(dǎo)教師嚴(yán)宏20070401第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文2N乙酰半胱氨酸防治糖尿病性白內(nèi)障的乙酰半胱氨酸防治糖尿病性白內(nèi)障的動(dòng)物和細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)研究動(dòng)物和細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)研究碩士研究生張曙導(dǎo)師嚴(yán)宏教授主任醫(yī)師第四軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院眼科，西安710038摘要摘要目的目的通過(guò)觀察N乙酰半胱氨酸（NACETYLCYSTEINE，NAC）滴眼液對(duì)鏈脲佐菌素（STREPTOZOTOCIN，STZ）誘導(dǎo)的糖尿病性白內(nèi)障大鼠的晶狀體混濁程度進(jìn)展的影響以及NAC對(duì)高糖（HIGHGLUCOSE，HG）誘導(dǎo)的人晶狀體上皮細(xì)胞凋亡的作用，來(lái)探討NAC對(duì)糖尿病性白內(nèi)障的作用及其機(jī)制。方法方法1對(duì)85只大鼠行裂隙燈檢查，排除晶狀體病變。隨機(jī)抽取10只大鼠作為正常對(duì)照組，其余大鼠接受1％STZ（65MGKG）枸櫞酸緩沖液（20MMOLL，PH45）腹腔注射，72H后血糖值＞14MMOLL的大鼠作為糖尿病大鼠。治療組大鼠分別給予NAC（001％和005％）磷酸鈉緩沖液（25MMOLL，PH74）滴眼，3次D；其余組相應(yīng)給予磷酸鈉緩沖液（25MMOLLPH74）滴眼，3次D。英國(guó)國(guó)際合作研究項(xiàng)目基金NO070667Z03國(guó)家教育部留學(xué)回國(guó)人員啟動(dòng)基金HG2507陜西省科技攻關(guān)項(xiàng)目2004K16G72

簡(jiǎn)介：南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文反義P44探討P44XPD亞復(fù)合物對(duì)人肝癌細(xì)胞SMMC7721的生物學(xué)影響姓名熊高飛申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師熊向陽(yáng)張吉翔20080101ABSTRACTOBJECTIVETOINVESTIGATETHEEFFECTSOFP44ONTHECELLCYCLEANDITSINTERACTIONWITHXPD，CDK7，CDK2，CDC25AC‘MYCMETHODSANTISENSEOLIGONUCLEOTIDESOFP44GENEWASTRANSFECTEDINTOSMMC7721CELLS；CELLLINESFORCOMPARISONWEREMATCHEDONTHESAMEGENETLCBACKGROUNDANDPASSAGETHEEXPRESSIONOFWILDTYPEXPD，CDK7，CDK2，CDC25AANDCMVCWEREDETECTEDBYRTPCRANDWESTERNBLOTTHECELLGROWTHANDTHECELLCYCLEWEREEXAMINEDBYMTFANDFLOWCYTOMETRYRESULTSAFTERTRANSFECTIONOFSMMC一7721WITHANTISENSEOLIGONUCLEOTIDESOFP44，THEEXPRESSIONOFXPDMRNAWASDECREASEDSIGNIFICANTLYTHEREWERERELATIVECHANGESWITHMOLECULARNETWORKINHEPATOMA；THEEXPRESSIONOFCELLCYCLEREGULATORYGENESINCLUDINGCDK7，CDK2，CDC25AANDCMYCWEREINCREASED；THEINHIBITORYEFFECTSOFXPDONCELLGROWTHWEREDECREASEDANDTHEHEPATOMACELLSGROWFASTCONCLUSIONXPDGENEISREGULATEDBYITSUPSTREAMREGULATORYGENE，P44，ANDITSFHNCTIONREQUIRETHEINTERACTIONOFXPDWITHP44，WHICHCOULDRESULTINTHECHANGEOFCDK7，CDK2，CDC25AANDCMYCGENESEXPRESSIONKEYWORDSHEPATOMA；P44；XPD；CELLCYCLEREGULATORYGENES111

簡(jiǎn)介：第二軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文12號(hào)染色體三體慢性淋巴細(xì)胞白血病的臨床及生物學(xué)特征研究姓名裘哲君申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)內(nèi)科學(xué)（血液?。┲笇?dǎo)教師王健民20080401獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作。除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示謝意。本人承擔(dān)本聲明的法律責(zé)任。學(xué)位論文作者簽名裘哲君彰一再簽字日期方年』一月1日學(xué)位論文使用授權(quán)書聲明本人完全了解第二軍醫(yī)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)第二軍醫(yī)大學(xué)可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書連、伽靂學(xué)位論文作者簽名裘哲君蘇‘々盧導(dǎo)師簽名王健民簽字日期，礦年R月∥／日簽字日期年月日

簡(jiǎn)介：中南大學(xué)博士學(xué)位論文IL24對(duì)上皮性卵巢癌SKOV3細(xì)胞株生物學(xué)的影響研究（臨床前研究）姓名馬水根申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師朱付凡20080501博士學(xué)位論文中文摘要第一部分目的IL24真核表達(dá)載體PCDNA31MYCHISBIL廣24的構(gòu)建及鑒定。方法分離人外周血淋巴細(xì)胞，提取細(xì)胞總RNA，自行設(shè)計(jì)特異性引物，對(duì)II廣24編碼序列進(jìn)行克隆，通過(guò)基因重組，連接到PCDNA31MYCHISB載體上，構(gòu)建IL24真核表達(dá)載體PCDNA31MYCHISBIL24，用PCR、酶切鑒定和序列狽定證實(shí)序列無(wú)誤后，大量擴(kuò)增。結(jié)果1、正常人外周血淋巴細(xì)胞中提取的總RNA質(zhì)量檢測(cè)從正常人外周血淋巴細(xì)胞中提取的總RNA，經(jīng)1％瓊脂糖凝膠電泳，可見28S、18S、5S三條帶，且28S的光密度值是18S的兩倍，表示該RNA樣品完整性好，降解少2、總RNA經(jīng)RTPCR擴(kuò)增IL24基因以總RNA為模板，RTPCR擴(kuò)增Ⅱ，24EDNA，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳擴(kuò)增出約為600BP大小的特異性條帶，與預(yù)期設(shè)計(jì)的IL24EDNA大小相符。3、PCR鑒定以構(gòu)建的真核表達(dá)載體PEDNA31MYCHISBIL24為模板，PCR擴(kuò)增II廠24DNA，經(jīng)1％瓊脂糖凝膠電泳，擴(kuò)增出約為600BP大小的特異性條帶，與預(yù)期設(shè)計(jì)的II廣24DNA大小相符。4、酶切鑒定經(jīng)藍(lán)白篩選后，挑取數(shù)個(gè)單菌落擴(kuò)增，提取質(zhì)粒，用BAMHI和HINDIII雙酶切，1％瓊脂糖凝膠電泳，可見被酶切的質(zhì)粒出現(xiàn)兩條帶，約54KB、600BP大小，分別與PCDNA31一MYCHISB和II廣24基因片段大小一致。PCDNA31MYCHIS一B上有兩個(gè)XBAI酶切位點(diǎn)，用XBAI單酶切后，1％瓊脂糖凝膠電泳，可見被酶切的質(zhì)粒出現(xiàn)兩條帶，約54KB、600BP大小，分別與PCDNA31MYCHIS一B和兒24基因片段大小一致。5、質(zhì)粒的測(cè)序結(jié)果對(duì)經(jīng)上述鑒定后符合要求的質(zhì)粒交INVITROGEN公司進(jìn)行序列測(cè)定，經(jīng)NCBI提供的BLAST程序分析對(duì)比，結(jié)果顯示本實(shí)驗(yàn)獲得的IL24序列與GENEBANK公布的IL24基因序列完全一致，符合預(yù)期結(jié)果。

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多正常人群與慢性肝病患者脂肪干細(xì)胞的生物學(xué)特性、可塑性及成肝分化的比較.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文5氮雜2′脫氧胞苷對(duì)人紅白血病K562細(xì)胞系生物學(xué)活性及DNA結(jié)合抑制因子4基因表達(dá)的影響姓名王利芳申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)內(nèi)科學(xué)（血液?。┲笇?dǎo)教師李登舉201105華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文3EFFECTOF5AZACDRONTHEBIOLOGICALACTIVITYINHIBITOFDNABINDING4ID4GENEEXPRESSIONOFHUMANERYTHROMYELOBLASTOIDLEUKEMIACELLLINEK562ABSTRACTOBJECTIVETOSTUDYTHEEFFECTOF5AZACDRONTHEBIOLOGICALACTIVITYOFHUMANERYTHROMYELOBLASTOIDLEUKEMIACELLLINEK562THEEXPRESSIONOFINHIBITOFDNABINDING4ID4TOSEARCHTHENEWTARGETOFGENETHERAPYMETHODS1TODETECTTHESITUATIONOFID4METHYLATIONINK562CELLLINEBYMETHYLATIONSPECIFICPCRMSPCR2TOANALYZETHEEXPRESSIONLEVELSOFID4MRNAINK562CELLLINEWITHTHETREATMENTOFDIFFERENTCONCENTRATIONSOF5AZACDR052510ΜMAFTER48HBYRQPCR3AFTERTREATEDBYDIFFERENTCONCENTRATIONSOF5AZACDR，K562CELLSWERESTAINEDWITHFITCLABELEDANNEXINVPROPIDIUMIODIDEANNEXINVFITCPITHECHANGEOFAPOPTOSISRATECELLCYCLEOFWEREANALYZEDBYFLOWCYTOMETRYRESULTSTHEK562CELLSEXISTID4GENEMETHYLATIONAFTER5AZACDRISADDEDTOTHEMEDIUMTHEREISADOSEDEPENDENTUPREGULATIONOFTHEGENEID4MRNAEXPRESSIONTHEDIFFERENCESOFTHEGENEID4MRNALEVELAMONGEXPERIMENTALGROUPSAREOBVIOUSP0015AZACDRCANALSOINDUCETHEAPOPTOSISOFK562THEAPOPTOSISRATESOFK562CELLSAREOFTIMEDOSEDEPENDENT5ΜM5AZACDRRESULTSIN15363K562CELLSAPOPTOSISAT24H48H72HRESPECTIVELYTHEAPOPTOSISRATESOFK562CELLSARE69663RESPECTIVELYAFTERTREATEDWITHDIFFERENTCONCENTRATIONSOF5AZACDR052510ΜMF48HOURSCOMPAREDWITHTHECONTROLGROUP0ΜMTHEREISASIGNIFICANTDIFFERENCEP005THECHANGEOFCELLCYCLEOFK562CELLSALSOAREOFDOSEDEPENDENTTREATMENTOFK562CELLSWITH5AZACDR25ΜMF48HCAUSEDA127FOLD154FOLDINCREASEINK562CELLSTHATARRESTING0G1PHASEINCOMPARISONWITHCONTROL

簡(jiǎn)介：肺癌是一種常見惡性腫瘤，發(fā)病率高，嚴(yán)重影響人們的生活質(zhì)量。20世紀(jì)80年代以來(lái)，肺癌的治療取得了較大的進(jìn)展，手術(shù)、放療、化療和免疫治療的聯(lián)合應(yīng)用，大大提高了患者的5年生存率。但手術(shù)、放療和化療并發(fā)癥多、毒副作用大。尋找新的有效、簡(jiǎn)便、毒副作用小的治療方法成為醫(yī)務(wù)工作者關(guān)注的焦點(diǎn)。目前方興未艾的基因治療可能成為很有前景的腫瘤治療方式之一，RNA干擾屬于基因治療的一種新的方式。RNA干擾RNAINTERFERENCERNAI現(xiàn)象發(fā)現(xiàn)于1995年，迅速引起研究者的重視。RNAI是由雙鏈RNA介導(dǎo)的、在轉(zhuǎn)錄后水平封閉或沉默相應(yīng)基因表達(dá)的基因阻斷技術(shù)，其原理是小片段RNASIRNA依據(jù)堿基互補(bǔ)的原理，特異性地結(jié)合癌基因的MRNA，干擾其翻譯、轉(zhuǎn)錄形成蛋白質(zhì)的功能，阻抑癌蛋白的生成，抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)或誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，從而達(dá)到抑制腫瘤細(xì)胞增殖的目的。RNA干擾已經(jīng)廣泛應(yīng)用于基因功能和各種腫瘤的治療的研究中。腫瘤實(shí)質(zhì)上是一種細(xì)胞周期調(diào)控紊亂性疾病。細(xì)胞周期的調(diào)控是一個(gè)及其復(fù)雜的過(guò)程，涉及到多因子、在多層次上的作用，在細(xì)胞周期調(diào)控中正性調(diào)控因子和負(fù)性調(diào)控因子之間的平衡失調(diào)將導(dǎo)致細(xì)胞周期出現(xiàn)紊亂，而泛素蛋白酶體系統(tǒng)通過(guò)對(duì)多種類型的短壽命周期調(diào)控因子的降解，保持細(xì)胞周期運(yùn)行中正負(fù)調(diào)控因子之間的平衡，保證細(xì)胞周期的順利運(yùn)行，在細(xì)胞周期調(diào)控中發(fā)揮重要作用。SKP2屬于泛素蛋白酶體系統(tǒng)中FBOX蛋白家族中一員，在泛素化降解蛋白質(zhì)過(guò)程中負(fù)責(zé)對(duì)底物蛋白的特異性識(shí)別，通過(guò)對(duì)多種靶蛋白的泛素化降解參與細(xì)胞周期調(diào)控。S期激酶相關(guān)蛋白2SKP2是ZHANG等人于1995年發(fā)現(xiàn)的一種蛋白質(zhì)，因最初發(fā)現(xiàn)它在S期與細(xì)胞周期蛋白結(jié)合的一種蛋白質(zhì)，所以命名為S期激酶相關(guān)蛋白。SKP2是泛素蛋白連接酶SCFSKP2的特異性識(shí)別底物的亞單位，屬于FBOX的家庭成員。SKP2參與了對(duì)細(xì)胞周期依賴性激酶抑制因子P27、P21、P57、130PRB2、E2F1、CYCLINE和HCLP等細(xì)胞周期因子的泛素化降解過(guò)程。SKP2通過(guò)促進(jìn)細(xì)胞周期蛋白酶抑制物P27、P21的降解，推動(dòng)細(xì)胞周期從G期向S期轉(zhuǎn)換。研究發(fā)現(xiàn)SKP2過(guò)表達(dá)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、預(yù)后密切相關(guān)，近年來(lái)許多研究表明SKP2蛋白在許多惡性腫瘤組織及腫瘤細(xì)胞的表達(dá)增高，而P27蛋白表達(dá)是降低的，兩者存在明顯的負(fù)相關(guān)。許多研究都證實(shí)SKP2具有癌基因的特性，SKP2的表達(dá)水平及活性與淋巴瘤，口腔鱗狀細(xì)胞癌，膠質(zhì)母細(xì)胞瘤，淋巴瘤，乳房癌，結(jié)腸癌，肺癌，胃癌的惡性程度、侵襲性、轉(zhuǎn)移、預(yù)后密切相關(guān)。SKP2雖與細(xì)胞周期密切相關(guān)，但它調(diào)控細(xì)胞增殖以及在腫瘤中的發(fā)病機(jī)制仍不清楚。通過(guò)抑制SKP2表達(dá)，研究其對(duì)腫瘤細(xì)胞生物學(xué)活性的影響，了解與細(xì)胞周期調(diào)控因子之間的關(guān)系，對(duì)于揭示SKP2在細(xì)胞周期中的功能、在腫瘤中的發(fā)病機(jī)制及作為腫瘤治療的靶點(diǎn)的可行性都具有重要意義。已有大量研究證實(shí)采用SIRNA表達(dá)載體的方法能達(dá)到高效、特異抑制目的基因表達(dá)的效果，并且能延長(zhǎng)對(duì)靶基因的抑制作用時(shí)間。因此本研究采用與SIRNA表達(dá)載體相關(guān)的干擾技術(shù)，旨在探討SKP2SIRNA表達(dá)載體對(duì)肺癌細(xì)胞內(nèi)源性SKP2基因的沉默作用?；赗NA干擾技術(shù)原理，構(gòu)建SKP2SIRNA質(zhì)粒質(zhì)粒載體，采用脂質(zhì)體包裹技術(shù)，將構(gòu)建的SKP2SIRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染SPCA1肺癌細(xì)胞系，通過(guò)沉默肺癌細(xì)胞內(nèi)SKP2基因的表達(dá)，采用不同技術(shù)方法檢測(cè)構(gòu)建的SKP2SIRNA干擾質(zhì)粒對(duì)肺癌細(xì)胞增殖、生長(zhǎng)、凋亡的影響，以及對(duì)接種的裸鼠腫瘤生長(zhǎng)的抑制情況，探討SKP2SIRNA表達(dá)載體作為肺癌基因治療新策略的可行性以及SKP2在肺癌發(fā)生、發(fā)展中的機(jī)制。實(shí)驗(yàn)分三部分第一部分目的首先篩選出高表達(dá)SKP2基因的肺癌細(xì)胞，然后構(gòu)建SKP2SIRNA真核表達(dá)質(zhì)粒，為SKP2基因功能研究打下實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法首先篩選出高表達(dá)SKP2基因的肺癌細(xì)胞株，作為下一步RNAI基因沉默的研究對(duì)象。采用RTPCR和蛋白質(zhì)印跡技術(shù)檢測(cè)兩株A549、SPCA1肺癌細(xì)胞株和HELA細(xì)胞中內(nèi)源性SKP2基因及蛋白的表達(dá)，篩選出高表達(dá)SKP2基因的肺癌細(xì)胞株。然后依據(jù)RNA干擾原理，采用RNAIDNA載體技術(shù)，以SKP2基因?yàn)榘悬c(diǎn)，設(shè)計(jì)、構(gòu)建、篩選靶向SKP2基因的小干擾RNA。根據(jù)人SKP2基因序列及二級(jí)結(jié)構(gòu)特征，設(shè)計(jì)合成寡核普酸，將其插入PGENESIL質(zhì)粒載體，構(gòu)建針對(duì)SKP2基因的RNA干涉真核表達(dá)載體。電泳法初步篩選正確的重組克隆。DNA測(cè)序驗(yàn)證重組克隆插入序列的正確性。用構(gòu)建好的SKPZSIRNA表達(dá)載體脂質(zhì)體介導(dǎo)下轉(zhuǎn)染高表達(dá)SKP2的SPCA1肺癌細(xì)胞系，熒光鏡下檢測(cè)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率，G418篩選出陽(yáng)性細(xì)胞克隆。取穩(wěn)定建株的克隆細(xì)胞，RTPCR、WESTERNBLOT檢測(cè)轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的肺癌細(xì)胞內(nèi)SKP2MRNA及蛋白水平的變化。結(jié)果RTPCR、WESTEMBLOT檢測(cè)結(jié)果表明SPCA1肺癌細(xì)胞和HELA細(xì)胞高表達(dá)SKP2，而A549肺癌細(xì)胞未檢測(cè)到SKP2的表達(dá)。酶切電泳分析和DNA測(cè)序證實(shí)重組質(zhì)粒SKP2SIRNA構(gòu)建成功；SKP2SIRNA對(duì)內(nèi)源SKP2基因的表達(dá)有明顯的抑制作用，明顯高于對(duì)照組，抑制率達(dá)712±55％、653±48％；SKP2SIRNA對(duì)SKP2蛋白明顯抑制作用明顯，抑制率達(dá)741±63％、672±55％，與對(duì)照組及陰性質(zhì)粒對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論SPCA1肺癌細(xì)胞內(nèi)高表達(dá)SKP2；構(gòu)建的重組質(zhì)粒SKP2SIRNA能特異、高效抑制SPCA1細(xì)胞內(nèi)源性SKP2基因的表達(dá)，為下一步研究SIRNA對(duì)肺癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響打下實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。第二部分目的探討采用RNAI技術(shù)抑制SKP2基因表達(dá)后，SKP2SIRNA重組質(zhì)粒對(duì)肺癌細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖的抑制情況，以及對(duì)細(xì)胞周期信號(hào)因子P27、P21的影響。方法MTT、流式細(xì)胞儀檢測(cè)SKP2SIRNA重組質(zhì)粒細(xì)胞組和對(duì)照組SPCA1細(xì)胞細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期的變化。流式細(xì)胞學(xué)、TUNEL技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡。免疫組化、激光共聚焦、WESTERNBLOT檢測(cè)肺癌細(xì)胞內(nèi)P27、P21蛋白的表達(dá)改變。RTPCR檢測(cè)P27MRNA基因變化。結(jié)果SKP2SIRNA重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染肺癌SPCA1細(xì)胞后，細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖明顯被抑制，細(xì)胞凋亡增多。細(xì)胞周期檢測(cè)結(jié)果提示轉(zhuǎn)染SKP2SIRNA重組質(zhì)粒的細(xì)胞進(jìn)入S期的比例減少，而阻滯在G0G1期細(xì)胞比例增加。在轉(zhuǎn)染SKP2SIRNA重組質(zhì)粒的細(xì)胞細(xì)胞周期調(diào)控因子P27、P21蛋白表達(dá)增強(qiáng)，而對(duì)照組及陰性質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的肺癌細(xì)胞增殖及P27、P21蛋白末見明顯改變。結(jié)論SKP2SIRNA重組質(zhì)粒對(duì)肺癌細(xì)胞SPCA1的增殖有明顯抑制作用，并可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡增加，抑制細(xì)胞內(nèi)SKP2表達(dá)后能上調(diào)細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞周期調(diào)控因子P27、P21蛋白的表達(dá)。第三部分目的為探討構(gòu)建的SKP2SIRNA質(zhì)粒載體對(duì)體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)的影響，采用轉(zhuǎn)染SKP2SIRNA質(zhì)粒肺癌細(xì)胞建立肺癌動(dòng)物模型，觀察腫瘤生長(zhǎng)情況。方法以BALBC裸鼠為研究對(duì)象，采用皮下注射轉(zhuǎn)染SKP2SIRNA質(zhì)粒的SPCA1細(xì)胞和對(duì)照組細(xì)胞懸液，建立肺癌細(xì)胞的裸鼠動(dòng)物模型通過(guò)觀察腫瘤形成時(shí)間，測(cè)量腫瘤體積和重量方法觀察腫瘤形成和腫瘤的生長(zhǎng)狀況；采用免疫組織化學(xué)染色、WESTERNBLOT檢測(cè)腫瘤組織SKP2蛋白的表達(dá)。結(jié)果轉(zhuǎn)染SKP2SIRNA質(zhì)粒的肺癌細(xì)胞接種裸鼠皮下后，腫瘤生長(zhǎng)明顯減慢。與對(duì)照組相比，轉(zhuǎn)染SKP2SIRNA質(zhì)粒組腫瘤體積明顯縮小，SKP2蛋白下調(diào)7354±42％、673±32％，而腫瘤內(nèi)細(xì)胞周期調(diào)控因子P27、P21蛋白表達(dá)均明顯上調(diào)。結(jié)論RNAI技術(shù)沉默SKP2蛋白表達(dá)后，SKP2SIRNA明顯抑制了體內(nèi)腫瘤的生長(zhǎng)，上調(diào)P27、P21蛋白的表達(dá)。SKP2有望成為肺癌基因治療的靶點(diǎn)。

簡(jiǎn)介：分類號(hào)UDC不同來(lái)源間質(zhì)干細(xì)胞的分離及多種藥物因素對(duì)其生物學(xué)特性的影響ISOLATIONANDEFFECTSOFMULTIDRUGONTHEBIOLOGICALCHARACTERISTICSOFMESENCHYMALSTEMCELLSFROMDIFFERENTTISSUES作者姓名指導(dǎo)教師申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別孫曉春許化溪教授、許文榮教授博士學(xué)科專業(yè)臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)論文提交日期2010年11月論文答辯日期2010年12月學(xué)位授予單位和日期江蘇大學(xué)2010年12月評(píng)閱人PI，I●嗡孵一魯晨Y瀅瀛強(qiáng)國(guó)，聲明并表示謝意。、作者簽名EL期夕P、Y∥

簡(jiǎn)介：天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文人頰脂墊與傳統(tǒng)吸脂術(shù)脂肪干細(xì)胞生物學(xué)特性比較姓名張圣敏申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)口腔醫(yī)學(xué)；口腔臨床醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師陳剛201205天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文均呈陰性表達(dá)，結(jié)果顯示，ASCS具有間充質(zhì)干細(xì)胞的表型特征。3、經(jīng)成骨培養(yǎng)后，ASCS的增殖速度較未成骨培養(yǎng)前明顯減慢，經(jīng)成骨誘導(dǎo)后的兩組ASCS相比，在前3天，誘導(dǎo)后的ASCS的增殖速度與未誘導(dǎo)時(shí)ASCS差異不大；47天時(shí)，頰脂墊部位成骨誘導(dǎo)的ASCS的增殖速度顯著快于吸脂術(shù)來(lái)源的ASCS成骨誘導(dǎo)后的增殖速度。且PO05，兩者有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。4、人不同部位ASCS成骨培養(yǎng)3天后，堿性磷酸酶活性頰脂墊組為158125U／LOOML，吸脂術(shù)組為943165U／LOOML，ASCS成骨培養(yǎng)7天后，堿性磷酸酶活性頰脂墊組為3384744U／LOOML，吸脂術(shù)組為1866370U／LOOML，成骨培養(yǎng)14天時(shí)堿性磷酸酶活性頰脂墊組為6156543U／LOOM，吸脂術(shù)組為4503456U／LOOML，所有結(jié)果經(jīng)T檢驗(yàn)，均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異PO05。結(jié)論1、人頰脂墊部位來(lái)源的ASCS相比吸脂術(shù)來(lái)源的ASCS，單位體積組織內(nèi)可提取的ASCS密度更高；且頰脂墊來(lái)源ASCS增殖活性高于吸脂術(shù)來(lái)源ASCS，且具有更高的成骨活性。2、人頰脂墊脂肪易于獲得，供區(qū)提取造成的損傷小，無(wú)明顯術(shù)后并發(fā)癥；并且頰脂墊組織的血管豐富，不同人群頰脂墊組織的大小是相似的，它們獨(dú)立于體重和脂肪的分布，不會(huì)受到體重和脂肪分布的影響，是穩(wěn)定可靠的ASCS組織來(lái)源。3、頰脂墊有望成為未來(lái)口腔頜面部，乃至全身各處骨組織工程種子細(xì)胞的理想供源。關(guān)鍵詞脂肪干細(xì)胞頰脂墊細(xì)胞培養(yǎng)增殖潛能成骨II

簡(jiǎn)介：1RNA干擾EPCAM基因表達(dá)對(duì)膽囊癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響研究生賈興勝指導(dǎo)老師劉會(huì)春中文摘要目的利用RNA干擾技術(shù)沉默膽囊癌GBCSD細(xì)胞中上皮細(xì)胞黏附分子EPITHELIALCELLADHESIONMOLECULEEPCAM）基因的表達(dá)，探討沉默EPCAM基因表達(dá)對(duì)GBCSD細(xì)胞形態(tài)、增殖、凋亡及侵襲力的影響，為膽囊癌的基因治療提供一定的理論基礎(chǔ)和試驗(yàn)依據(jù)。方法1、根據(jù)GENEBANKACCESSIONNUMBERBC014785提供的基因序列，利用INVITROGEN公司的在線RNAI設(shè)計(jì)工具設(shè)計(jì)針對(duì)EPCAM基因不同位點(diǎn)的4個(gè)特異性MIRNA干擾序列；將選擇的序列和相應(yīng)的基因組數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行BLAST序列比對(duì)，確信所選擇的序列與其他的基因不具有同源性；以鼠MIR155為骨架構(gòu)建4個(gè)針對(duì)EPCAM基因的特異性MIRRNAI表達(dá)質(zhì)粒，并進(jìn)行DNA測(cè)序驗(yàn)證。2、用LIPOFECTAMINE2000介導(dǎo)分別將PCDNA62GWEMGFPMIREPCAM1、2、3、4轉(zhuǎn)染人膽囊癌GBCSD細(xì)胞株，試驗(yàn)另設(shè)陰性對(duì)照組（轉(zhuǎn)染PCDNA62GWEMGFPMIRNEG）及空白對(duì)照組（未轉(zhuǎn)染組），瞬轉(zhuǎn)48H后分別用RTPCR和WESTERNBLOT檢測(cè)各組GBCSD細(xì)胞中EPCAM的MRNA及蛋白的表達(dá)情況，篩選出干擾效率最強(qiáng)的一個(gè)MIRRNAI表達(dá)質(zhì)粒。3、用干擾效率最強(qiáng)的PCDNA62GWEMGFPMIR–EPCAM1轉(zhuǎn)染GBCSD細(xì)胞作為干擾組，觀察GBCSD細(xì)胞的生物學(xué)行為變化①顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化；②MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖的變化；③ANNEXINVPI雙染法流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡的變化；④TRANSWELL侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲力的變化。結(jié)果1、DNA測(cè)序分析證實(shí)，表達(dá)質(zhì)粒PCDNA62GWEMGFPMIREPCAM1、PCDNA62GWEMGFPMIREPCAM2、PCDNA62GWEMGFPMIREPCAM3、PCDNA62GWEMGFPMIREPCAM4中的插入片段序列均與設(shè)計(jì)的MIRNAOLIGO序列一致，4個(gè)針對(duì)EPCAM基因的MIRRNAI表達(dá)載體均構(gòu)建成功。2、轉(zhuǎn)染48H后，RTPCR結(jié)果顯示，PCDNA62GWEMGFPMIREPCAM1、PCDNA62GWEMGFPMIREPCAM2、PCDNA62GWEMGFPMIREPCAM3、PCDNA62GWEMGFPMIREPCAM4轉(zhuǎn)染組中EPCAMMRNA的相對(duì)表3EFFECTSOFEPCAMGENESILENCINGBYRNAINTERFERENCEONBIOLOGICALBEHAVISOFHUMANGALLBLADDERCANCERCELLSABSTRACTOBJECTIVETOOBSERVETHEEFFECTOFEPITHELIALCELLADHESIONMOLECULEEPCAM）GENESILENCINGBYRNAINTERFERINGTECHNOLOGYONTHESHAPEPROLIFERATIONAPOPTOSISINVASIVENESSOFGBCSDCELLSTOPROVIDETHEYEXPERIMENTALPROOFFGENETHERAPYOFGALLBLADDERNEOPLASMSMETHODS1ACCDINGTOTHESEQUENCEPROVIDEDBYGENEBANKACCESSIONNUMBERBC014785，F(xiàn)OURDIFFERENTPREMIRNAOLIGONUCLEOTIDESEQUENCESTARGETINGEPCAMWEREDESIGNEDBYUSINGINVITROGEN’SRNAIDESIGNERONLINE；THESESEQUENCESWHICHCRESPONDWITHMIRNAWEREBLASTANALYZEDTOMAKESURETHATTHEYWERENOTHOMOLOGYWITHGENOMEDATABASE；THEARTIFICIALMIRNAWHICHISBASEDONTHEMURINEMIR155WERECONSTRUCTEDTOPRODUCESILENCINGOFEPCAM2FOURRECOMBINANTPLASSTARGETINGHUMANEPCAMGENEWERERESPECTIVELYTRANSFECTEDINTOGBCSDCELLSBYLIPOFECTAMIM2000CELLSTRANSFECTEDWITHPCDNA62GWEMGFPMIRNEGWASASNCGROUPCELLSNONTRANSFECTEDWASASBLANKCONTROLGROUPRTPCRWESTERNBLOTWEREUSEDTODETECTTHEMRNAPROTEINEXPRESSIONOFEPCAMADOPTEDTOTHERECOMBINANTPLASWHICHSHOWEDTHEMOSTOPTIMALINHIBITIONEFFT3AFTERTRANFECTEDBYPCDNA62GWEMGFPMIREPCAM1WITHTHEHIGHESTINHIBITEDRATE①THECELLULARSHAPEOFGBCSDCELLWASOBSERVEDTHROUGHMICROSCOPY；②CELLPROLIFERATIONWASANALYZEDBYMTTASSAY；③CELLAPOPTOSISWASDETECTEDBYFLOWCYTOMETRY；④CELLINVASIVENESSWASDETERMINEDBYMATRIGELINVASIONASSAYSRESULTS1FOUREPCAMTARGETEDMICRNAMIRNA1234WERESUCCESSFULLYEDINTOTHEPLASVECTPCDNA62GWEMGFPMIR，THECODINGSEQUENCESOFTHEOBTAINEDMIRNAWERECONSISTENTWITHTHEDESIGNEDFRAGMENTS2THERECOMBINANTPLASSPCDNA62GWEMGFPMIREPCAM1、

簡(jiǎn)介：目的通過(guò)制作良性膽管狹窄（BENIGNBILIARYSTRICTURE，BBS）兔動(dòng)物模型，獲得膽管良性狹窄標(biāo)本并體外分離和培養(yǎng)良性狹窄膽管成纖維細(xì)胞。通過(guò)內(nèi)毒素（LIPOPOLYSACIDE，LPS）刺激實(shí)驗(yàn)，觀察LPS對(duì)體外培養(yǎng)的兔良性狹窄膽管組織中成纖維細(xì)胞的形態(tài)，增殖活性，Ⅰ、Ⅲ型膠原分泌和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子Β（TRANSFMINGGROWTHFACT，TGFΒ1）、干擾素Γ（INTERFERONΓ，IFNΓ）分泌的影響，探討LPS在早期膽管瘢痕愈合中的影響和其可能的作用機(jī)制。方法通過(guò)鉗夾法建立新西蘭大白兔膽管良性狹窄動(dòng)物模型1，造模后7天取出病變膽管，應(yīng)用胰蛋白酶消化法聯(lián)合組織塊法分離培養(yǎng)膽管成纖維細(xì)胞23，用含10％胎牛血清的改良培養(yǎng)基（DULBECCOMODIFIEDEAGLEMEDIUM，DMEM）進(jìn)行培養(yǎng)并傳代。倒置顯微鏡下觀察成纖維細(xì)胞形態(tài)。選用第35代膽管成纖維細(xì)胞隨機(jī)分為對(duì)照組和內(nèi)毒素刺激組，應(yīng)用四甲基偶氮唑鹽（METHYLTHIAZOLYLTETRAZOLIUM，MTT）法檢測(cè)不同濃度（005ΜGML，010ΜGML，025ΜGML，05％ΜGML，100ΜGML，200ΜGML）LPS溶液對(duì)兔膽管成纖維細(xì)胞增殖和活力的影響；應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ENZYMELINKEDIMMUNOSBENTASSAY，ELISA）檢測(cè)不同濃度內(nèi)毒素作用后成纖維細(xì)胞Ⅰ型、Ⅲ型膠原分泌的變化。除了上述指標(biāo)以外，還采用ELISA法檢測(cè)成纖維細(xì)胞培養(yǎng)上清液中TGFΒ1、IFNΓ的含量，探討LPS對(duì)成纖維細(xì)胞可能具有的作用機(jī)制。結(jié)果（1）鉗夾后的膽總管肉眼可見充血、水腫，術(shù)后7天再開腹取標(biāo)本時(shí)可見膽管周圍組織有比較明顯的粘連。肝臟可見輕度淤膽表現(xiàn)。粘連組織疏松，容易分離，分離粘連后見膽管仍有淤血和腫脹，近端膽管擴(kuò)張。（2）在倒置顯微鏡下觀察體外培養(yǎng)的細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形、多角形或不規(guī)則形，細(xì)胞質(zhì)透明；細(xì)胞核大，橢圓形，顏色淡。每個(gè)細(xì)胞通常含23個(gè)核。（3）LPS濃度在005050ΜGML時(shí)，促進(jìn)成纖維細(xì)胞增殖和Ⅰ、Ⅲ型膠原合成（P結(jié)論（1）兔膽總管鉗夾法可以作為一種獲取良性狹窄膽管成纖維細(xì)胞的方法。（2）胰蛋白酶消化法聯(lián)合組織塊法分離培養(yǎng)兔膽管成纖維細(xì)胞是一種較好的細(xì)胞培養(yǎng)方法。（3）在一定濃度的LPS刺激后對(duì)成纖維細(xì)胞的分裂和增殖等生物學(xué)特性有促進(jìn)作用，濃度達(dá)到峰值后開始出現(xiàn)抑制。表明在一定的濃度的LPS存在時(shí)可能促進(jìn)膽管損傷的修復(fù)，但是過(guò)度修復(fù)會(huì)造成膽管良性狹窄；過(guò)高的濃度可能會(huì)延遲甚至阻礙膽管損傷的修復(fù)。（4）LPS對(duì)良性狹窄膽管成纖維細(xì)胞作用機(jī)制可能與促進(jìn)TGFΒ1的分泌和抑制IFNΓ分泌有關(guān)。

簡(jiǎn)介：博士學(xué)位論文學(xué)校代碼學(xué)號(hào)L0023B2009003中國(guó)地區(qū)2371例淋巴組織腫瘤分布特點(diǎn)的分析及原發(fā)性腸道T細(xì)胞及NK細(xì)胞淋巴瘤的臨床病理及分子生物學(xué)特點(diǎn)的研究所院北京協(xié)和醫(yī)院似姓名孫健指導(dǎo)教師陳杰導(dǎo)師小組崔全才，盧朝輝學(xué)科專業(yè)病理學(xué)與病理生理學(xué)臨床型研究方向淋巴瘤的臨床病理及分子生物學(xué)特點(diǎn)完成日期2011年5月”圜醫(yī)學(xué)科學(xué)院、北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文2中文摘要第一部分中國(guó)地區(qū)2371例淋巴組織腫瘤分布特點(diǎn)的分析為了研究中國(guó)地區(qū)淋巴組織腫瘤的分布特征，我們收集了4家大型醫(yī)院20042008年明確診斷為淋巴組織腫瘤的2371例病例，對(duì)其按WHO組織學(xué)類型、性別、年齡及發(fā)生部位進(jìn)行了詳細(xì)分類及分析。在這2371例病例中，成熟B細(xì)胞腫瘤占6820％，成熟T／NK細(xì)胞腫瘤占2117％，霍奇金淋巴瘤占742％，前驅(qū)淋巴組織腫瘤占321％。依據(jù)WHO分型，所收集的病例中最常見的組織學(xué)類型為彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤3568％，其他常見的類型依次為結(jié)外邊緣區(qū)淋巴瘤9。62％，經(jīng)典型霍奇金淋巴瘤72L％，B細(xì)胞淋巴瘤，未分類582％，外周T細(xì)胞淋巴瘤，非特殊類型553％，T／NK細(xì)胞淋巴瘤，未分類544％及結(jié)外N科T細(xì)胞淋巴瘤502％。在大多數(shù)組織學(xué)類型的腫瘤中，男性所占比例明顯較女性高。所有腫瘤總的男／女為162。大多數(shù)成熟非霍奇金淋巴瘤發(fā)生于成年人，平均年齡為522歲，而前驅(qū)淋巴組織淋巴瘤則多發(fā)生于年輕人，平均年齡為253歲。綜上，我們的結(jié)果顯示，中國(guó)地區(qū)的淋巴組織腫瘤有著獨(dú)特的分布特點(diǎn)，這些特點(diǎn)多與西方國(guó)家不同，但與遠(yuǎn)東地區(qū)其他國(guó)家的分布特點(diǎn)相類似。第二部分原發(fā)性腸道T細(xì)胞及NK細(xì)胞淋巴瘤的臨床病理及分子生物學(xué)特點(diǎn)在西方國(guó)家，原發(fā)性腸道T細(xì)胞及NK細(xì)胞淋巴瘤的發(fā)生多與乳糜瀉相關(guān)，稱為經(jīng)典型腸病相關(guān)T細(xì)胞淋巴瘤I型EATL。乳糜瀉在亞洲地區(qū)罕見，此地區(qū)原發(fā)性腸道T細(xì)胞及NK細(xì)胞淋巴瘤見諸報(bào)道的組織學(xué)類型多為II型EARI，、原發(fā)性腸道NK細(xì)胞淋巴瘤、外周T細(xì)胞淋巴瘤等。為了研究中國(guó)地區(qū)原發(fā)性腸道T細(xì)胞及NK細(xì)胞淋巴瘤的臨床病理及分子生物學(xué)特征，我們收集了北京協(xié)和醫(yī)院病理科19992009年間原發(fā)性腸道T細(xì)胞及NK細(xì)胞淋巴瘤病例38例，通過(guò)BIOMED2TCR基因重排、EBER原位雜交、免疫組化及對(duì)相關(guān)I臨床病理特點(diǎn)進(jìn)行評(píng)估的方法，將此38例原發(fā)性腸道T細(xì)胞及NK細(xì)胞淋巴瘤病例進(jìn)行詳細(xì)分型，并比較各類型間的臨床病理差異?；贐IOMED2TCR重排檢測(cè)結(jié)果及其他指標(biāo)，我們首先將38例原發(fā)性腸道T細(xì)胞及NK細(xì)胞淋巴瘤病例分為NK細(xì)胞淋巴瘤組N6及T細(xì)胞淋巴瘤組N_32。NK細(xì)胞淋巴瘤組病人的平均年齡為37歲，所有的NK細(xì)胞淋巴瘤的腫瘤細(xì)胞EBER原位雜交均彌漫陽(yáng)性且BIOMED2TCR重排陰性。與T細(xì)胞淋巴瘤組病例相比，NK細(xì)胞淋巴瘤組病人總體預(yù)后明顯較差且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P00247。通過(guò)對(duì)乳糜瀉病史的采集及對(duì)腫物周邊腸黏膜是否存在腸病的組織形態(tài)的評(píng)估，32例T細(xì)胞淋巴瘤組病例被進(jìn)一步細(xì)分為II型EATL117，外周T

簡(jiǎn)介：蘇州大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所提交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不含其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果，也不含為獲得蘇州大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位證書而使用過(guò)的材料。對(duì)本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人承擔(dān)本聲明的法律責(zé)任。論文作者簽名聾贊塑ET期型L二壘二＆蘇州大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人完全了解蘇州大學(xué)關(guān)于收集、保存和使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)位論文著作權(quán)歸屬蘇州大學(xué)。本學(xué)位論文電子文檔的內(nèi)容和紙質(zhì)論文的內(nèi)容相一致蘇州大學(xué)有權(quán)向國(guó)家圖書館、中國(guó)社科院文獻(xiàn)信息情報(bào)中心、中國(guó)科學(xué)技術(shù)信息研究所含萬(wàn)方數(shù)據(jù)電子出版社、中國(guó)學(xué)術(shù)期刊光盤版電子雜志社送交本學(xué)位論文的復(fù)印件和電子文檔，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存和匯編學(xué)位論文，可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索。涉密論文口本學(xué)位論文屬在年一月解密后適用本規(guī)定。非涉密論文口論文作者簽名疊彰礁ET期拙二竺二壁導(dǎo)師簽名

簡(jiǎn)介：分類號(hào)R7351UDC密級(jí)重慶醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文論文題目過(guò)表達(dá)過(guò)表達(dá)BECLIN1對(duì)食管癌對(duì)食管癌ECA109細(xì)胞生物學(xué)行為的影響細(xì)胞生物學(xué)行為的影響作者姓名洪斌申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士學(xué)科、專業(yè)名稱外科學(xué)外科學(xué)論文答辯年月2013年5月2013年4月指導(dǎo)教師姓名（職稱、單位名稱）吳慶琛吳慶琛教授教授重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文1英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照英文縮寫英文縮寫英文全稱英文全稱中文全稱中文全稱AADENINE腺嘌呤APAMMONIUMPERSULFATE過(guò)硫酸銨BCABICINCHONINICACID二喹啉甲酸BPBASEPAIR堿基對(duì)CCYTOSINE胞嘧啶DDALTON道爾頓DAB33DIAMINOBENZIDINE二氨基聯(lián)苯胺DDH2ODOUBLEDISTILLEDWATER雙蒸水DEPCDIETHYLPYROCARBONATE焦碳酸二乙酯DMSODIMETHYLSULPHOXIDE二甲基亞砜ECLELECTROCHEMILUMINESCENCE電化學(xué)發(fā)光EDTAETHYLENEDIAMIETRAACETICACID乙二胺四乙酸GGUANINE鳥嘌呤H2O2HYDROGENPEROXIDE過(guò)氧化氫HRPHSERADISHPEROXIDASE辣根過(guò)氧化物酶KDKILODALTON千道爾頓MINMINUTE分鐘MLMILLILITER毫升NMNANOMETER納米ODOPTICALDENSITY光密度PAGEPOLYACRYLAEELECTROPHESIS聚丙烯酰胺凝膠電泳PCRPOLYMERASECHAINREACTION聚合酶鏈反應(yīng)PMSFPHENYLMETHANESULFONYLFLUIDE苯甲基磺酰氟PVDFPOLYVINYLIDENEFLUIDE聚偏二氟乙烯RNARIBONUCLEICACID核糖核酸RTPCRREVERSETRANIONPCR逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)

簡(jiǎn)介：目的探究新生大鼠肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞ALVEOLARTYPEⅡEPITHELIALCELLATⅡ的原代培養(yǎng)方法。通過(guò)脂多糖LIPOPOLYSACIDELPS制造細(xì)胞炎癥模型芪蛭皺肺顆粒給藥干預(yù)觀察其對(duì)致炎ATⅡ細(xì)胞形態(tài)學(xué)、生長(zhǎng)周期、線粒體活性、肺泡表面活性蛋白ASPA的影響。以探察其防治慢性阻塞性肺疾病CHRONICOBSTRUCTIVEPULMONARYDISEASECOPD的作用機(jī)制同時(shí)為開發(fā)研究芪蛭皺肺顆粒提供藥效學(xué)基礎(chǔ)。方法取SPF級(jí)新生WISTAR大鼠肺臟采用胰蛋白酶聯(lián)合膠原酶消化法分離ATⅡ細(xì)胞免疫黏附結(jié)合反復(fù)貼壁法純化細(xì)胞體外培養(yǎng)細(xì)胞透射電鏡鑒定細(xì)胞。細(xì)胞造模方法10組生長(zhǎng)狀態(tài)及數(shù)目接近的細(xì)胞2組不加LPS2組加5UGML的LPS2組加10UGML的LPS2組加20UGML的LPS2組加40UGML的LPS干預(yù)1天。第二天向用5種濃度LPS干預(yù)過(guò)的細(xì)胞其中一組加入100UGML的芪蛭皺肺顆粒干預(yù)2天同濃度的另一組作對(duì)照。觀察并檢測(cè)各組ATⅡ細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變板層小體、線粒體和生長(zhǎng)周期的變化以及SPA的表達(dá)。結(jié)果1原代培養(yǎng)的ATⅡ細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好。2電鏡下觀察到板層小體。LPS組板層小體數(shù)目減少芪蛭皺肺顆粒干預(yù)組其數(shù)目有所增加。3MTT顯示LPS組ATⅡ細(xì)胞出現(xiàn)異常增殖情況且其增殖率隨LPS濃度的升高而加強(qiáng)。芪蛭皺肺顆粒干預(yù)后細(xì)胞增殖受到了抑制增殖率有所下降。4細(xì)胞周期檢測(cè)結(jié)果顯示LPS組ATⅡ細(xì)胞的細(xì)胞周期處于G2期和S期的百分比較高。其增殖百分比隨著LPS濃度的升高而上升。芪蛭皺肺顆粒干預(yù)后G2期和S期的百分比有所下降。5激光共聚焦顯微鏡觀察線粒體羅丹明123染色結(jié)果顯示空白組細(xì)胞的線粒體活性強(qiáng)熒光亮度高。LPS組隨著其濃度的升高熒光強(qiáng)度逐漸減弱。加入芪蛭皺肺顆粒干預(yù)后熒光強(qiáng)度有所恢復(fù)。6SABC免疫組化法檢測(cè)SPA顯示①DAB顯色空白組的ATⅡ細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可以觀察到較多的棕黃色顆粒?？瞻准榆悟伟櫡晤w粒組細(xì)胞內(nèi)可見較空白組更多的棕黃色顆粒顏色較深。而LPS組細(xì)胞內(nèi)棕黃色顆粒明顯減少且LPS濃度越高其棕黃色顆粒越少、顏色越淺。芪蛭皺肺顆粒干預(yù)組的細(xì)胞內(nèi)棕色顆粒較之同濃度LPS誘導(dǎo)組有所增加且顏色有一定加深。②FITC熒光染色空白組的ATⅡ細(xì)胞熒光較強(qiáng)?？瞻准榆悟伟櫡晤w粒組細(xì)胞熒光強(qiáng)度較空白組更大。而LPS組細(xì)胞熒光強(qiáng)度減弱且隨著LPS濃度的增高熒光越來(lái)越淡芪蛭皺肺顆粒干預(yù)組細(xì)胞的熒光強(qiáng)度較之同濃度LPS誘導(dǎo)組有所增加。結(jié)論本次實(shí)驗(yàn)提取的原代ATⅡ細(xì)胞符合體外實(shí)驗(yàn)要求第2472H內(nèi)處于最佳生長(zhǎng)狀態(tài)是進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究的理想時(shí)間段。LPS可以促使ATⅡ細(xì)胞產(chǎn)生炎癥反應(yīng)而異常增殖并減弱ATⅡ細(xì)胞的SPA表達(dá)降低該細(xì)胞的生物學(xué)活性。芪蛭皺肺顆粒對(duì)LPS誘導(dǎo)致炎肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞的異常增殖有抑制作用可改善細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)促進(jìn)SPA表達(dá)有助于提高ATⅡ細(xì)胞的生物學(xué)活性。