人頰脂墊與傳統(tǒng)吸脂術(shù)脂肪干細(xì)胞生物學(xué)特性比較.pdf

1、目的:
　　對不同來源的人脂肪干細(xì)胞(ASCs)進(jìn)行體外增殖培養(yǎng)，對比其多種細(xì)胞生物學(xué)特征及增殖潛能。對人ASCs進(jìn)行體外成骨分化誘導(dǎo)培養(yǎng)，對比研究兩種來源的ASCs成骨活性的差異。探討頰脂墊作為潛在的富含ASCs的供體，在骨組織工程領(lǐng)域，尤其是應(yīng)用骨組織工程技術(shù)在口腔頜面外科骨缺損修復(fù)中的應(yīng)用價(jià)值。
　　材料與方法:
　　無菌條件下分別提取新鮮的超聲乳化負(fù)壓吸脂術(shù)所得腹部皮下脂肪和面部輪廓整形手術(shù)切取人頰脂墊脂肪各1

2、0ml，Ⅰ型膠原酶消化，離心后提取ASCs，原代培養(yǎng)14天時(shí)，對兩組細(xì)胞進(jìn)行消化，計(jì)數(shù)，此后每3天換液一次，達(dá)80％融合時(shí)傳代。分別取兩種來源生長良好的第5代ASCs，通過CCK-8試劑盒操作要求測定兩組ASCs的增殖指數(shù)，以此檢測兩組ASCs增殖潛能的差別；并對其進(jìn)行成骨培養(yǎng)，分別于3、7、14天，利用堿性磷酸酶試劑盒操作要求測定兩組細(xì)胞的堿性磷酸酶活性，并從成骨培養(yǎng)第1天開始，連續(xù)7天測量其增殖指數(shù)，比較兩組ASCs在經(jīng)過成骨培養(yǎng)后

3、其增殖潛能和成骨潛能有何差異。
　　數(shù)據(jù)均由作者采用SPSS13.0軟件進(jìn)行分析，以P<0.05為差異有顯著性意義。
　　結(jié)果:
　　1、人頰脂墊為特化脂肪組織，血管成分明顯多于皮下脂肪。頰脂墊提取ASCs密度為(8.77±1.28)×104/ml，顯著高于吸脂術(shù)來源者(6.00±0.47)×104/ml；ASCs種植入培養(yǎng)瓶中48h滯留期后可見少量的梭形細(xì)胞貼壁，細(xì)胞形態(tài)不一，核居中。從第3天開始，進(jìn)入增殖期快速期，

4、細(xì)胞培養(yǎng)至第7天，可見細(xì)胞以集落或散在的方式增長，兩個(gè)不同部位的ASCs形態(tài)差異較小，均以梭形和多角型為主，但頰脂墊部位ASCs形態(tài)更加均一。細(xì)胞培養(yǎng)至第3代，開始表現(xiàn)快速增殖，頰脂墊來源ASCs形態(tài)較吸脂術(shù)來源者，形態(tài)更加均一且增殖更快。ASCs逐漸長滿瓶壁，經(jīng)傳代培養(yǎng)逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)榫坏亩噙呅巍?br>　　2、不同來源ASCs，其表面標(biāo)志CD44均呈陽性表達(dá)，造血干細(xì)胞的標(biāo)志CD34均呈陰性表達(dá)，結(jié)果顯示，ASCs具有間充質(zhì)干細(xì)胞的表型

5、特征。
　　3、經(jīng)成骨培養(yǎng)后，ASCs的增殖速度較未成骨培養(yǎng)前明顯減慢，經(jīng)成骨誘導(dǎo)后的兩組ASCs相比，在前3天，誘導(dǎo)后的ASCs的增殖速度與未誘導(dǎo)時(shí)ASCs差異不大；4-7天時(shí)，頰脂墊部位成骨誘導(dǎo)的ASCs的增殖速度顯著快于吸脂術(shù)來源的ASCs成骨誘導(dǎo)后的增殖速度。且P<0.05，兩者有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　4、人不同部位ASCs成骨培養(yǎng)3天后，堿性磷酸酶活性頰脂墊組為15.8±1.25u/100ml，吸脂術(shù)組為9.43±1.

6、65u/100ml，ASCs成骨培養(yǎng)7天后，堿性磷酸酶活性頰脂墊組為33.84±7.44u/100ml，吸脂術(shù)組為18.66±3.70u/100ml，成骨培養(yǎng)14天時(shí)，堿性磷酸酶活性頰脂墊組為61.56±5.43u/100ml，吸脂術(shù)組為45.03±4.56u/100ml，所有結(jié)果經(jīng)t檢驗(yàn)，均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　1、人頰脂墊部位來源的ASCs相比吸脂術(shù)來源的ASCs，單位體積組織內(nèi)可提取的AGC