簡(jiǎn)介：第一部分IL35在原發(fā)免疫性血小板減少癥免疫失耐受中的作用研究背景原發(fā)免疫性血小板減少癥PRIMARYIMMUNETHROMBOCYTOPENIA，ITP是一種自身免疫介導(dǎo)的出血性疾病，由于免疫失耐受體內(nèi)產(chǎn)生針對(duì)自身血小板的抗體，導(dǎo)致血小板破壞過(guò)多及生成減少。IL35為IL12家族的新成員，是在機(jī)體炎癥反應(yīng)過(guò)程中由活化的天然型調(diào)節(jié)性T細(xì)胞NTREG產(chǎn)生的一種細(xì)胞因子。它能誘導(dǎo)效應(yīng)T細(xì)胞分化為可分泌IL35的誘導(dǎo)型調(diào)節(jié)性T細(xì)胞ITR35，從而形成級(jí)聯(lián)放大效應(yīng)，最終產(chǎn)生感染耐受。既往研究發(fā)現(xiàn)維持機(jī)體免疫平衡的NTREG在ITP患者外周血中存在數(shù)量減少及抑制功能的減弱，且ITP患者外周血血漿中IL35的水平顯著下調(diào)，且與血小板計(jì)數(shù)呈正相關(guān)，提示IL35可能參與了ITP的發(fā)病，但具體的機(jī)制尚不清楚。目的我們擬通過(guò)本研究闡明IL35在ITP患者中下調(diào)的原因及在免疫失耐受中的作用，同時(shí)評(píng)價(jià)體外誘導(dǎo)ITR35對(duì)血小板特異性自身免疫的調(diào)節(jié)作用，為基于IL35的靶向治療提供依據(jù)。方法1收集患者臨床資料2流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)ITP患者外周血中調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和輔助性T細(xì)胞（TH1和TH17）及IL35刺激對(duì)后CD4、CD8和調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞的表達(dá)水平的影響3BRDU細(xì)胞摻入法檢測(cè)IL35對(duì)外周血單個(gè)核細(xì)胞PBMCS增殖的影響4ELISA方法檢測(cè)ITP患者血漿中IL35的水平以及IL35刺激前后PBMCS培養(yǎng)上清中IFNΓ、IL10、IL17和TGFΒ1的水平變化。結(jié)果1活動(dòng)期ITP患者血漿中IL35的濃度明顯低于緩解期患者及正常對(duì)照組，緩解期ITP患者血漿中IL35的濃度明顯低于正常對(duì)照組。2與正常對(duì)照組相比，ITP患者外周血中NTREG的細(xì)胞比例明顯下降，TH1細(xì)胞比例明顯上調(diào)，而TH17細(xì)胞比例無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。3ITP患者血漿中下降的IL35表達(dá)水平與患者血小板計(jì)數(shù)、外周血NTREG的細(xì)胞比例呈正相關(guān)，與TH1細(xì)胞比例呈負(fù)相關(guān)，與TH17細(xì)胞比例無(wú)關(guān)。4外源性IL35的加入能明顯抑制活動(dòng)期ITP患者PBMCS的增殖，進(jìn)而行流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)顯示IL35能抑制CD4及CD8T細(xì)胞的增殖，但能促進(jìn)NTREG的分化。5IL35促進(jìn)ITP患者PBMCS產(chǎn)生更多的TGFΒ1和IL10，但卻抑制其產(chǎn)生IFNΓ和IL17。結(jié)論原發(fā)免疫性血小板減少癥患者外周血中降低的IL35可能通過(guò)調(diào)節(jié)自身T細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子參與其免疫失耐受。第二部分干擾素Α2B對(duì)原發(fā)性血小板增多癥患者異常骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性及功能的系統(tǒng)研究背景原發(fā)性血小板增多癥ESSENTIALTHROMBOCYTHEMIA，ET是一種費(fèi)氏染色體陰性的慢性骨髓增殖性腫瘤，臨床上以出血傾向和血栓形成為特點(diǎn)。約55％的患者存在JAK2基因突變。以往的研究主要集中于存在突變的造血干祖細(xì)胞損傷機(jī)制方面，但因造血干祖細(xì)胞功能缺陷、體外不易擴(kuò)增和易分化等缺點(diǎn)限制了此方面研究。最近有研究指出ET患者骨髓造血微環(huán)境可能存在缺陷。因此，研究骨髓造血微環(huán)境中的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞BONEMARROWMESENCHYMALSTEMCELLS，BMMSCS各種細(xì)胞成分的前體細(xì)胞的生物學(xué)特性及其功能對(duì)于ET患者發(fā)病機(jī)制的研究具有重要意義。近三十年來(lái)，干擾素Α2B（IFNΑ2B）因其抗腫瘤效應(yīng)、延緩骨髓纖維化進(jìn)展以及無(wú)白血病轉(zhuǎn)化風(fēng)險(xiǎn)等特點(diǎn)在臨床上被廣泛應(yīng)用于ET患者的治療，但對(duì)于其作用機(jī)制目前主要集中在IFNΑ2B對(duì)惡性造血干祖細(xì)胞效應(yīng)方面的研究，其對(duì)骨髓微環(huán)境的影響目前尚不清楚。因此，深入了解IFNΑ2B對(duì)ET患者骨髓微環(huán)境的影響顯得尤為重要。目的本研究旨在系統(tǒng)、全面地比較研究ET患者和正常人BMMSCS生物學(xué)特性及功能的差異，為探討ET患者BMMSCS損傷機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)及理論依據(jù)，同時(shí)為ET患者發(fā)病機(jī)制研究探討新思路。在證實(shí)ET患者骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞存在缺陷的基礎(chǔ)上進(jìn)一步探討IFNΑ2B對(duì)ET患者異常BMMSCS的生物學(xué)特性及功能的影響，為IFNΑ2B應(yīng)用于ET患者的臨床治療提供新的理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法1從ET患者和正常人骨髓組織中采用貼壁、傳代培養(yǎng)的方法獲取相對(duì)純化的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞2倒置顯微鏡觀察BMMSCS形態(tài)變化3流式細(xì)胞儀檢測(cè)BMMSCS表面標(biāo)志4在誘導(dǎo)體系中，定向誘導(dǎo)BMMSCS向脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞分化，用油紅O染色、茜素紅染色觀測(cè)脂滴形成、鈣鹽沉積情況，比較成脂、成骨的分化潛能5應(yīng)用CCK8試劑盒測(cè)定BMMSCS增殖情況并繪制增殖曲線6流式細(xì)胞儀方法檢測(cè)BMMSCS的細(xì)胞凋亡情況7磁珠分選臍血來(lái)源的CD34細(xì)胞，在兩種培養(yǎng)體系（LTCASSAY和MKASSAY）中共培養(yǎng)BMMSCS與CD34細(xì)胞，比較研究ET患者和正常BMMSCS擴(kuò)增CD34細(xì)胞能力和促進(jìn)造血克?。–FUG、CFUM、CFUGM、CFUMIX、BFUE和CFUMK）形成的能力同時(shí)比較兩種BMMSCS表達(dá)造血生長(zhǎng)因子（SCF、IL6和VEGF）的異同。8建立BMMSCS和正常來(lái)源的外周血單個(gè)核細(xì)胞PBMCS共培養(yǎng)體系，比較兩種BMMSCS對(duì)活化后的PBMCS增殖及促進(jìn)PBMCS向TREG細(xì)胞分化能力的差異。9若與正常來(lái)源的BMMSCS相比，ET患者來(lái)源的BMMSCS在上述生物學(xué)和功能檢測(cè)中存在異常，則利用上述方法檢測(cè)IFNΑ2B對(duì)ET患者來(lái)源的異常BMMSCS的生物學(xué)特性及功能的影響。結(jié)果1成功培養(yǎng)并獲取高純度的ET患者和正常人來(lái)源的BMMSCS2在倒置顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，ET患者BMMSCS與正常BMMSCS形態(tài)無(wú)明顯差異，二者BMMSCS細(xì)胞均纖細(xì)、呈長(zhǎng)梭形，規(guī)則排列生長(zhǎng)。3二者BMMSCS均高表達(dá)CD90、CD73、CD105，且表達(dá)情況無(wú)顯著差別。二者均不表達(dá)造血細(xì)胞標(biāo)志CD11A、CD14、CD19、CD34、CD45及MHCⅡ類分子HLADR。4在誘導(dǎo)培養(yǎng)體系下，二者BMMSCS均有向成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞分化的能力。與正常BMMSCS相比，ET患者BMMSCS分化為脂肪細(xì)胞的能力無(wú)明顯變化，但分化為成骨細(xì)胞的能力減弱。5ET患者BMMSCS增殖能力明顯強(qiáng)于正常BMMSCS。6ET患者BMMSCS較正常人BMMSCS的細(xì)胞凋亡明顯減少。7與臍血來(lái)源的CD34細(xì)胞共培養(yǎng)后，ET患者BMMSCS擴(kuò)增CD34細(xì)胞能力和促進(jìn)造血克隆形成能力（尤其是支持長(zhǎng)期造血能力和巨核細(xì)胞系造血能力）較正常BMMSCS顯著減弱。兩種BMMSCS均表達(dá)SCF、IL6和VEGF，但ET患者來(lái)源的BMMSCS上述細(xì)胞因子表達(dá)水平低于正常來(lái)源的BMMSCS。8與正常來(lái)源的PBMCS共培養(yǎng)結(jié)果顯示，ET患者BMMSCS抑制PBMCS增殖能力減弱但促進(jìn)PBMCS向調(diào)節(jié)性T細(xì)胞分化的能力有增強(qiáng)趨勢(shì)，但尚無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。9ET患者來(lái)源的BMMSCS形態(tài)和表面標(biāo)志不受IFNΑ2B的影響，但I(xiàn)FNΑ2B可使ET患者的BMMSCS向成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞定向誘導(dǎo)時(shí)鈣鹽沉積和脂滴形成明顯減少，抑制其成骨、成脂分化潛能。IFNΑ2B可抑制ET患者來(lái)源的BMMSCS的增殖，增加其凋亡和增強(qiáng)其支持造血的能力。IFNΑ2B可促進(jìn)ET患者的BMMSCS表達(dá)SCF、IL6和VEGF。另外，IFNΑ2B還可增強(qiáng)ET患者的BMMSCS對(duì)PBMCS的抑制作用及促進(jìn)PBMCS向調(diào)節(jié)性T細(xì)胞分化的能力。結(jié)論1原發(fā)性血小板增多癥患者骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞存在多方面、多層次的缺陷。2原發(fā)性血小板增多癥患者BMMSCS存在多種生物學(xué)特性異常，包括增殖能力增強(qiáng)、多向分化能力異常（不易向成骨細(xì)胞方向分化）、細(xì)胞凋亡減少。3原發(fā)性血小板增多癥患者BMMSCS支持造血能力（尤其支持長(zhǎng)期造血能力和巨核細(xì)胞系造血能力）減弱。4原發(fā)性血小板增多癥患者BMMSCS抑制正常來(lái)源的外周血單個(gè)核細(xì)胞增殖能力減弱，但可促進(jìn)外周血單個(gè)核細(xì)胞向調(diào)節(jié)性T細(xì)胞分化。5IFNΑ2B可影響原發(fā)性血小板增多癥患者BMMSCS多種生物學(xué)特性及功能，包括增殖、凋亡、分化、支持造血及免疫調(diào)節(jié)等多個(gè)方面。

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多胰島素樣生長(zhǎng)因子-I、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子和透明質(zhì)酸鈉對(duì)藻酸鈣載體-關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞復(fù)合物的生物學(xué)效應(yīng).pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：【研究背景】近年來(lái)，鑒于脂肪干細(xì)胞ADIPOSEDIREVEDSTEMCELLSADSCS在獲取、應(yīng)用方面的諸多優(yōu)點(diǎn)，如何有效運(yùn)用其修復(fù)損傷組織已成為外科學(xué)領(lǐng)域，特別是燒傷、整形外學(xué)的研究熱點(diǎn)。然而迄今為止，ADSCS參與組織修復(fù)的確切機(jī)制并不清楚。目前絕大部分研究主要集中在ADSCS細(xì)胞分化方面，近來(lái)越來(lái)越多的實(shí)驗(yàn)表明尚具有一個(gè)重要的功能，即旁分泌功能。有關(guān)ADSCS旁分泌功能參與組織修復(fù)的生物學(xué)效應(yīng)尚不清楚。此外，胰島素作為人體重要的促合成代謝激素，除能調(diào)節(jié)糖、脂肪、蛋白質(zhì)三大營(yíng)養(yǎng)代謝外，是否具有調(diào)節(jié)ADSCS旁分泌功能，進(jìn)而更有效促進(jìn)ADSCS的組織創(chuàng)面修復(fù)功能，目前尚未見(jiàn)報(bào)道?！狙芯磕康摹?研究ADSCS旁分泌因子對(duì)修復(fù)細(xì)胞HACAT細(xì)胞生物學(xué)作用，初步探討ADSCS促創(chuàng)面愈合的旁分泌機(jī)制。2研究胰島素對(duì)ADSCS旁分泌功能的影響，以期尋求一種促ADSCS旁分泌的有效增敏劑。3研究胰島素干預(yù)前后ADSCS旁分泌對(duì)HACAT細(xì)胞的生物學(xué)作用，進(jìn)一步探討利用胰島素調(diào)節(jié)ADSCS旁分泌作用，以促進(jìn)組織創(chuàng)面修復(fù)的有效性及相關(guān)機(jī)制?！狙芯?jī)?nèi)容】1ADSCS旁分泌功能對(duì)HACAT細(xì)胞的生物學(xué)作用。2胰島素對(duì)ADSCS旁分泌功能的生物學(xué)影響。3胰島素干預(yù)ADSCS后其分泌因子對(duì)HACAT細(xì)胞的生物學(xué)作用?！狙芯拷Y(jié)果】1ADSCS旁分泌因子能明顯促進(jìn)HACAT細(xì)胞增殖、遷移和抑制凋亡。2108～107MOLL濃度的胰島素具有顯著促進(jìn)ADSCS分泌生長(zhǎng)因子的功能。3胰島素干預(yù)前后ADSCS旁分泌功能均能顯著促進(jìn)HACAT細(xì)胞增殖、遷移和抑制凋亡，且胰島素干預(yù)后作用更顯著?！狙芯拷Y(jié)論】1ADSCS旁分泌功能參與組織損傷修復(fù)。2胰島素可有效促進(jìn)ADSCS的旁分泌功能。3胰島素可通過(guò)干預(yù)ADSCS分泌功能來(lái)促進(jìn)皮膚創(chuàng)面修復(fù)細(xì)胞增殖、遷移和抑制凋亡，進(jìn)而促進(jìn)創(chuàng)面愈合。4通過(guò)旁分泌功能促進(jìn)創(chuàng)面愈合，可能是ADSCS參與創(chuàng)面愈合的又一重要潛在機(jī)制。5合理、有效地運(yùn)用ADSCS的旁分泌功能，為創(chuàng)面愈合的研究與治療開(kāi)辟了新思路。

簡(jiǎn)介：分類號(hào)密級(jí)UDC學(xué)號(hào)104110110011南昌大學(xué)博士研究生學(xué)位論文SPOP通過(guò)調(diào)控通過(guò)調(diào)控HHGLI信號(hào)通路影響胃癌細(xì)胞信號(hào)通路影響胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為的研究生物學(xué)行為的研究SPOPAFFECTSTHEBIOLOGICALBEHAVIOFGASTRICCANCERCELLSBYREGULATINGHHGLISIGNALINGPATHWAY曾春艷培養(yǎng)單位（院、系）南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院指導(dǎo)教師姓名、職稱羅時(shí)文教授申請(qǐng)學(xué)位的學(xué)科門類醫(yī)學(xué)學(xué)科專業(yè)名稱內(nèi)科學(xué)（消化系病）論文答辯日期2014年6月答辯委員會(huì)主席評(píng)閱人2014年6月摘要II摘要第一部分第一部分SPOP在人胃癌組織中的表達(dá)及其與臨床在人胃癌組織中的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系病理特征的關(guān)系目的目的探討SPOP在人胃癌細(xì)胞系、人胃癌組織中的表達(dá)及臨床意義。方法方法免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)101例胃癌組織及相應(yīng)癌旁組織的SPOP的表達(dá)，統(tǒng)計(jì)分析其與臨床病理特征的關(guān)系；WESTERNBLOT方法檢測(cè)4例胃癌組織及癌旁組織的SPOP的表達(dá)；WESTERNBLOT方法檢測(cè)4株胃癌及1株永生化正常胃黏膜上皮細(xì)胞株細(xì)胞中的SPOP的表達(dá)。結(jié)果結(jié)果1、101例胃癌組織中，88例癌組織中的SPOP的表達(dá)低于相應(yīng)的癌旁組織，兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P005）。SPOP在癌組織中的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移成正相關(guān)（R0225，P005），與腫瘤分化程度（R－0232，P005）及TNM分期（R－0375，P001）成負(fù)相關(guān)，但與患者的年齡、性別均不相關(guān)；2、WESTERNBLOT檢測(cè)4例癌組織中SPOP表達(dá)均低于相應(yīng)的癌旁組織；3、在人永生化胃粘膜上皮細(xì)胞系GES1及四株胃癌細(xì)胞株AGS，SGC7901，MKN28，MKN45中均有表達(dá)。結(jié)論結(jié)論1、SPOP在胃癌組織中表達(dá)下調(diào)，與癌旁組織中的表達(dá)比較存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P005）；2、SPOP表達(dá)與患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分化程度及TNM分期相關(guān)，但與患者性別、年齡均不相關(guān)。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞胃癌；免疫組化；SPOP；臨床病理特征。第二部分第二部分SPOP基因表達(dá)質(zhì)粒和基因表達(dá)質(zhì)粒和SPOPSHRNA質(zhì)粒質(zhì)粒構(gòu)建及胃癌細(xì)胞模型的篩選與鑒定構(gòu)建及胃癌細(xì)胞模型的篩選與鑒定目的目的為了進(jìn)一步研究SPOP在胃癌中的作用機(jī)制，我們構(gòu)建SPOP基因表達(dá)質(zhì)粒SPOPV5HIS和干擾質(zhì)粒SPOPSHRNA質(zhì)粒，并構(gòu)建SPOP高低表達(dá)胃癌細(xì)胞模型。

簡(jiǎn)介：CD133膽囊癌膽囊癌GBCSD細(xì)胞細(xì)胞的分離的分離及其生物學(xué)特性的研究及其生物學(xué)特性的研究STUDYONBIOLOGICALCHARACTERISTICSOFCD133CELLSSEPARATEDFROMAGALLBLADDERCANCERCELLLINEGBCSD論文類別學(xué)術(shù)研究型論文類別學(xué)術(shù)研究型作者姓名俞遠(yuǎn)林指導(dǎo)教師姓名指導(dǎo)教師姓名俞繼衛(wèi)申請(qǐng)學(xué)位級(jí)申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士學(xué)位授予單位學(xué)位授予單位蚌埠醫(yī)學(xué)院蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)科專業(yè)外科學(xué)研究方向腹部腹部腫瘤腫瘤論文答辯時(shí)間論文答辯時(shí)間2012014年5月學(xué)位授予日期學(xué)位授予日期2012014年6月答辯委員會(huì)主席答辯委員會(huì)主席論文評(píng)閱人人2012014年4月分類號(hào)密級(jí)學(xué)校代碼10367UDC編號(hào)學(xué)號(hào)20117031133學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明本人所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下獨(dú)立進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究工作所取得的成果，本論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或已經(jīng)獲取得的研究成果。在本論文撰寫中所引用其他研究者的研究?jī)?nèi)容和成果時(shí)已在論文中給予特別標(biāo)注和明確說(shuō)明。對(duì)本論文的實(shí)驗(yàn)研究以及論文撰寫過(guò)程中給予幫助和建議等貢獻(xiàn)的其他人士，也已作了致謝說(shuō)明。本人完全理解本聲明的法律責(zé)任，以及所涉及的結(jié)果將由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名日期年月日關(guān)于學(xué)位論文著作權(quán)的共享聲明根據(jù)中華人民共和國(guó)著作權(quán)法和高等院校知識(shí)產(chǎn)權(quán)管理?xiàng)l例，本學(xué)位論文，題目CD133膽囊癌GBCSD細(xì)胞的分離及其生物學(xué)特性的研究，是研究生在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的職務(wù)作品，得到蚌埠醫(yī)學(xué)院相關(guān)部門科室的物質(zhì)技術(shù)和經(jīng)費(fèi)支持，因此，本學(xué)位論文的著作權(quán)由研究生，導(dǎo)師和蚌埠醫(yī)學(xué)院三方共同享有，均享有署名權(quán)和使用權(quán)等權(quán)益；本學(xué)位論文成果歸屬蚌埠醫(yī)學(xué)院。根據(jù)國(guó)家學(xué)位授予條例，學(xué)校對(duì)本學(xué)位論文有使用權(quán)，包括保存本學(xué)位論文；因教學(xué)和科研的目的，保留在圖書館被查閱或借閱；學(xué)?？筛鶕?jù)國(guó)家規(guī)定將本學(xué)位論文送交國(guó)家有部門保留和使用。學(xué)校在公布本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容時(shí)，應(yīng)保障研究生和導(dǎo)師的署名權(quán)等權(quán)益。研究生和導(dǎo)師在公開(kāi)發(fā)表本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容時(shí)必須保障學(xué)校的署名權(quán)等權(quán)益，即在發(fā)表論文時(shí)蚌埠醫(yī)學(xué)院及相關(guān)部門科室應(yīng)署名為作者單位。聲明人完全理解本聲明的法律責(zé)任。研究生簽名導(dǎo)師簽名日期年月日

簡(jiǎn)介：福建醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文1分類號(hào)分類號(hào)參照中國(guó)圖書館分類法參照中國(guó)圖書館分類法學(xué)校代碼學(xué)校代碼1039210392學(xué)科專業(yè)代碼學(xué)科專業(yè)代碼100210100210學(xué)號(hào)212100342121003457密級(jí)級(jí)（注明密級(jí)與保密期限）（注明密級(jí)與保密期限）碩士學(xué)位學(xué)位論文論文CDH17調(diào)控肝細(xì)胞癌的生物學(xué)機(jī)制的研究調(diào)控肝細(xì)胞癌的生物學(xué)機(jī)制的研究THEBIOLOGICALMECHANISMRESEARCHOFCDH17REGULATIONHEPATOMACARCINOMACELL學(xué)位類型型科研碩士科研碩士所在學(xué)院院省立省立臨床臨床醫(yī)學(xué)院學(xué)院申請(qǐng)人姓名申請(qǐng)人姓名王飛王飛學(xué)科學(xué)科、專業(yè)專業(yè)外科學(xué)普外科外科學(xué)普外科導(dǎo)師師李建國(guó)李建國(guó)教授教授研究起止日期研究起止日期20132013年6月至月至20142014年6月答辯委員會(huì)主席答辯委員會(huì)主席尹震宇教授教授答辯日期期20152015年0606月0303日福建醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文3目錄目錄附錄附錄1中文摘要中文摘要2英文摘要英文摘要3前言前言5材料和方法材料和方法81實(shí)驗(yàn)使用儀器、耗材、試劑82常用試劑與配方113細(xì)胞處理124實(shí)驗(yàn)方法135統(tǒng)計(jì)學(xué)方法24結(jié)果結(jié)果241篩選高表達(dá)CDH17基因的肝癌細(xì)胞株242DNA測(cè)序鑒定質(zhì)粒構(gòu)建成功263沉默CDH17基因高表達(dá)的MHCC97H細(xì)胞株274沉默MHCC97H細(xì)胞CDH17的細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)29討論討論32結(jié)論36參考文獻(xiàn)參考文獻(xiàn)37綜述綜述38致謝致謝45

簡(jiǎn)介：華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文RNAI沉默ADAMS家族基因?qū)δ[瘤細(xì)胞生物學(xué)活性的影響姓名豐菁申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)指導(dǎo)教師唐艷平20090501華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文5SHRNA）對(duì)N2A細(xì)胞中目的基因的沉默效應(yīng)，即是否能抑制靶基因在哺乳動(dòng)物腫瘤細(xì)胞中目的基因的表達(dá)，為進(jìn)一步利用RNA干擾技術(shù)對(duì)抗腫瘤的基因治療提供新的依據(jù)和手段。方法方法利用DNA重組技術(shù)針對(duì)ADAM10和PC7基因的SHRNA序列克隆到PGENSIL1中，構(gòu)建SHRNA真核表達(dá)載體，通過(guò)酶切和測(cè)序等方法進(jìn)行鑒定。用脂質(zhì)體介導(dǎo)法將已構(gòu)建好的重組干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入小鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤N2A細(xì)胞株，免疫熒光檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率，采用半定量RTPCR和WESTERN免疫印跡法分別從MRNA和蛋白質(zhì)水平檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后目的基因的表達(dá)，以及小鼠腦內(nèi)注射重組干擾質(zhì)粒PGENSIL1PC7后，在體觀察局部轉(zhuǎn)染后綠色熒光的表達(dá)，以了解RNA干擾效果。結(jié)果結(jié)果成功構(gòu)建了真核干擾載體PGENSIL1ADAM10，PGENSIL1PC7；免疫熒光結(jié)果顯示外源性干擾質(zhì)粒在神經(jīng)母細(xì)胞瘤N2A細(xì)胞中獲得瞬時(shí)表達(dá)，基因轉(zhuǎn)染和表達(dá)率可達(dá)90；兩目的基因MRNA相對(duì)水平（與內(nèi)參的灰度比值）空白對(duì)照組分別為135009、139005，陰性對(duì)照轉(zhuǎn)染組分別為125007、127008，SHRNA重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組分別為035003、062005，可見(jiàn)SHRNA重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組較其他兩組明顯降低（P001）。細(xì)胞中目的基因的蛋白水平變化趨勢(shì)與MRNA表達(dá)相似?；叶葤呙杵毓鈾z測(cè)顯示實(shí)驗(yàn)組重組干擾質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)染入小鼠體內(nèi)有較強(qiáng)綠色熒光的表達(dá)，與對(duì)照組具有顯著差異性。結(jié)論結(jié)論我們構(gòu)建的SHRNA干擾載體能有效沉默小鼠N2A細(xì)胞中靶基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，從而可能抑制腫瘤細(xì)胞的增殖促其凋亡，為下一步在動(dòng)物體內(nèi)利用重組干擾質(zhì)粒沉默目的基因的表達(dá)提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞短發(fā)夾狀RNA；ADAM10；N2A細(xì)胞株；基因干擾綜上所述，研究證實(shí)應(yīng)用短發(fā)夾狀RNA介導(dǎo)的干擾技術(shù)對(duì)腫瘤細(xì)胞可以取得明顯干涉效果，進(jìn)一步完善RNA干擾實(shí)驗(yàn)來(lái)抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)是存在可能的。由于ADAM家族基因（ADAM17，ADAM10，PC7）在腫瘤細(xì)胞中可能均具有顯著的抑制效應(yīng)，但作用機(jī)制尚不明確。因此將有可能成為腫瘤治療潛在的分子靶點(diǎn)，為進(jìn)一步進(jìn)行相關(guān)的實(shí)驗(yàn)研究打下基礎(chǔ)。

簡(jiǎn)介：中山大學(xué)碩士學(xué)位論文干擾EIF4E基因?qū)θ幦橄侔┘?xì)胞生物學(xué)行為與化療敏感性的影響姓名周菲菲申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師夏良平20100515C扣山人學(xué)碩J二論文干擾ELF4E基岡對(duì)三陰乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為與化療敏感性的影響結(jié)果成功構(gòu)建并篩選了穩(wěn)定表達(dá)SHRNAELF4E的三陰乳腺癌MDAOMB23L細(xì)胞，瞬時(shí)轉(zhuǎn)染SIRNA_EIF4E三陰乳腺癌MDAMB23I和MDAMB435細(xì)胞，兩種方法均可明顯抑制上述細(xì)胞中ELF4E蛋白的表達(dá)；克隆形成實(shí)驗(yàn)及流式細(xì)胞術(shù)表明干擾ELF4E表達(dá)使MDAMB一23L細(xì)胞阻滯在G1期，細(xì)胞處于增生不活躍狀態(tài)，明顯抑制細(xì)胞增殖；TRANSWELL實(shí)驗(yàn)顯示干擾ELF4E表達(dá)可能導(dǎo)致三陰乳腺癌MDAMB23L細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力下降；MTT法表明降低ELF4E表達(dá)可增強(qiáng)包括順鉑、紫杉醇、阿霉素、多西他賽等化療藥物對(duì)三陰乳腺癌MDAMB23L細(xì)胞的敏感性WESTERNBLOTTING法顯示干擾MDAMB23L細(xì)胞中ELF4E表達(dá)誘導(dǎo)P53和P21的表達(dá)上調(diào)，同時(shí)明顯增加促凋亡蛋白BAX蛋白表達(dá)，而顯著減少抗凋亡蛋白BCL一2蛋白表達(dá)，即凋亡相關(guān)蛋白BAX／BCL2比例明顯升高。結(jié)論L、成功構(gòu)建ELF4E靶向SHRNA表達(dá)質(zhì)粒，應(yīng)用此質(zhì)粒轉(zhuǎn)染三陰乳腺癌MDAMB23L細(xì)胞；瞬時(shí)ELF4ERNAI轉(zhuǎn)染三陰乳腺癌MDAMB23L及MDAMB435細(xì)胞；兩種方法均有效抑制ELF4E基因蛋自水平表達(dá)，為后續(xù)的研究提供了有力的工具。2、干擾ELF4E基因表達(dá)使三陰乳腺癌細(xì)胞阻滯在GL期，細(xì)胞處于增生不活躍狀態(tài)，可顯著地抑制細(xì)胞增殖和細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力。3、干擾ELF4E基因表達(dá)可增強(qiáng)包括順鉑、紫杉醇、阿霉素、多西他賽等化療藥物對(duì)三陰乳腺癌細(xì)胞的敏感性，其機(jī)制可能是誘導(dǎo)P53和P21的表達(dá)、調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)蛋白BAX／BCL一2而實(shí)現(xiàn)的。關(guān)鍵詞三陰乳腺癌；ELF4E；MDAMB23L細(xì)胞株；化療敏感性H

簡(jiǎn)介：重慶醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文超聲聯(lián)合微泡造影劑對(duì)人肝癌細(xì)胞株HEPG2生物學(xué)效應(yīng)實(shí)驗(yàn)研究姓名聶剛申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)內(nèi)科學(xué)（消化系?。┲笇?dǎo)教師梅浙川20060501重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文英文縮寫A0CASPDNADABDMSOEDL’AEBHKHZRPMPBSPCNAVEGFSCGELMANMAODMTTS英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照英文全稱ACRIDINEORANGE中文全稱吖啶橙COMETASSAYSOFTWAREPROJECT慧星分析軟件DEOXYRIBONUCLEICACID脫氧核糖核酸DIAMINOBENZIDINEDIETHYLSULFOXIDE二氨基聯(lián)苯胺二甲基亞砜ETHYLENEDIAMINETETRAACETICACID乙二胺四乙酸ETHIDIUMBROMIDE溴化乙啶HOURKILOHERTZROLLSPERMINUTE小時(shí)千赫茲每分鐘轉(zhuǎn)數(shù)PHOSPHATEBUFFERSOLUTION磷酸鹽緩沖液PROLIFERATINGCELLNUCLEARANTIGEN增殖細(xì)胞核抗原VASCULARENDOTHELIALGROWTHFACTOR血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子SINGLECELLGELELECTROPHORESIS單細(xì)胞凝膠電泳LOWMELTINGPOINTAGAR低熔點(diǎn)瓊脂糖NORMALMELTINGPOINTAGAR正常熔點(diǎn)瓊脂糖OPTICALDENSITY3一4，5一DIMETHYTHIAZOL一2一Y1一2，5DIPHENYLTETRAZOLIUMBROMIDESECONDL光密度四甲基偶氮唑鹽秒

簡(jiǎn)介：背景骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞HUMANBONEMESENCHYMALSTEMCELLSHMSC是一類具有自我更新能力和多向分化潛能的成體干細(xì)胞目前已有越來(lái)越多的國(guó)內(nèi)外研究證明從骨髓組織中提取的間充質(zhì)干細(xì)胞在不同體外環(huán)境誘導(dǎo)下可以向其他多種組織細(xì)胞分化可以分化為具有中胚層12、外胚層34和內(nèi)胚層5特點(diǎn)的細(xì)胞包括成骨細(xì)胞6、軟骨細(xì)胞7、心肌細(xì)胞8、以及神經(jīng)細(xì)胞910等。盡管目前對(duì)HMSC的分化機(jī)制的研究尚未有定論但是已有足夠相關(guān)研究證明HMSC還能跨胚層向表皮細(xì)胞11和內(nèi)皮細(xì)胞12等來(lái)源于其它胚層的細(xì)胞分化。這也擴(kuò)展了HMSC在醫(yī)學(xué)和研究領(lǐng)域的應(yīng)用前景。除此以外HMSC還具有多方面的效能包括調(diào)節(jié)造血功能在創(chuàng)面愈合過(guò)程中分泌因子抑制細(xì)胞凋亡并激活內(nèi)源性細(xì)胞的修復(fù)作用以及控制炎癥和免疫反應(yīng)等13。因此HMSC的研究是近年來(lái)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)研究關(guān)注的熱點(diǎn)。然而目前在HMSC相關(guān)研究中仍存在許多重要的科學(xué)問(wèn)題亟待解決。特別是HMSC在體外的生物學(xué)特性研究至關(guān)重要是其基礎(chǔ)和應(yīng)用研究的前提。蛻皮甾酮ECDYSTERONEBECDYSONEEDS亦稱Β蛻皮激素簡(jiǎn)稱蛻皮素屬于昆蟲生長(zhǎng)代謝調(diào)節(jié)激素最早為昆蟲學(xué)家所研究。昆蟲、甲殼動(dòng)物及其它節(jié)肢動(dòng)物具有韌硬的角質(zhì)層外殼定期分泌蛻皮激素將角質(zhì)層外殼淘汰并代之以新的一層這個(gè)過(guò)程就謂之蛻皮或蛻皮作用。但人們發(fā)現(xiàn)蛻皮激素在植物界的分布不僅較動(dòng)物界廣而且含量較高資源豐富迄今還不斷地在植物界發(fā)現(xiàn)昆蟲蛻皮甾酮類物質(zhì)這類植物源蛻皮甾酮已近160個(gè)。目前蛻皮激素的應(yīng)用仍依賴于從植物中提取。蛻皮甾酮在脊椎動(dòng)物中也是必需的物質(zhì)。其對(duì)機(jī)體以下功能影響較大目前所知其作用機(jī)理主要為1、促進(jìn)蛋白質(zhì)合成；2、調(diào)節(jié)糖代謝；3、調(diào)節(jié)脂代謝；4、調(diào)節(jié)基因表達(dá)；5、改善免疫功能6、中樞神經(jīng)系統(tǒng)作用；7、作用于心血管系統(tǒng)；8、促進(jìn)愈合作用等14。體外培養(yǎng)的研究表明EDS能促進(jìn)人表皮細(xì)胞的分化15而其同為類固醇的地塞米松已被證實(shí)可促進(jìn)MSC分化為骨組織。在本課題組的前期研究中發(fā)現(xiàn)蛻皮甾酮有刺激人奇靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和分裂16降低肺血管通透性17和有效促進(jìn)兔皮膚缺損創(chuàng)傷愈合過(guò)程18促進(jìn)表皮干細(xì)胞19的增殖等作用。同時(shí)其有刺激細(xì)胞增殖對(duì)抗炎性反應(yīng)的作用。因其在自然界中的廣泛存在它是中藥牛膝等植物的重要組成易于分離提取。蛻皮甾酮的生物多效性提示其對(duì)促進(jìn)細(xì)胞的增殖以及干細(xì)胞誘導(dǎo)分化等方面有一定的影響進(jìn)行此項(xiàng)研究具有廣泛的應(yīng)用前景。第一部分人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的體外分離培養(yǎng)和鑒定目的分離培養(yǎng)并鑒定人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。為實(shí)驗(yàn)的后續(xù)步驟提供種子細(xì)胞。方法采用密度梯度離心法分離含有間充質(zhì)干細(xì)胞的人骨髓細(xì)胞懸液獲得人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)第2代培養(yǎng)的細(xì)胞CD44、CD105、CD34及CD29的表達(dá)以鑒定其為HMSC。流式細(xì)胞儀檢測(cè)第3代HMSC細(xì)胞表面標(biāo)記CD44、CD105和CD34。培養(yǎng)擴(kuò)增。經(jīng)傳代、擴(kuò)增、純化取第3、5、10、代HMSC細(xì)胞觀察細(xì)胞生長(zhǎng)特性并記錄HMSCS生長(zhǎng)曲線。結(jié)果1骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察倒置顯微鏡下骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞接種12H即貼壁原代和傳代細(xì)胞呈梭形外觀去除懸浮細(xì)胞后繼續(xù)培養(yǎng)3D貼壁細(xì)胞開(kāi)始增殖伸展為短梭型、多角型及不規(guī)則型等。培養(yǎng)78D形成集落的數(shù)目、大小明顯增加細(xì)胞排列有一定的方向性至14D細(xì)胞密集在集落中心基本鋪滿瓶底。2免疫組化細(xì)胞表面標(biāo)記物CD44、CD29CD105陽(yáng)性CD34陰性。3流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD34陽(yáng)性率為164％、CD44陽(yáng)性率為9261％；CD105陽(yáng)性率為9177％。4骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線細(xì)胞傳代后3D內(nèi)處于潛伏期3D后進(jìn)入生長(zhǎng)期7D后進(jìn)入平臺(tái)期。結(jié)論1、人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可在體外分離、純化培養(yǎng)生長(zhǎng)穩(wěn)定、可連續(xù)傳代。2、經(jīng)細(xì)胞免疫組化和流式細(xì)胞儀鑒定培養(yǎng)的細(xì)胞不是骨髓中的造血干細(xì)胞或骨髓基質(zhì)中的成纖維細(xì)胞是處于未分化階段的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。3、人間充質(zhì)干細(xì)胞隨著傳代次數(shù)的增加增殖能力有逐漸降低的趨勢(shì)。第二部分不同濃度蛻皮甾酮對(duì)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖的影響目的觀察蛻皮甾酮ECDYSTERONEEDS對(duì)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞HUMANMARROWMESENCHYMALSTEMCELLSHMSC增殖的影響。并明確蛻皮甾酮促HMSC增殖的最佳有效濃度。方法設(shè)定不同終濃度EDS的細(xì)胞培養(yǎng)體系10ΜGML、25ΜGML、50ΜGML、100ΜGML與對(duì)照組單純HMSC培養(yǎng)基EDS濃度0ΜGML作對(duì)比在不同的時(shí)間點(diǎn)用MTT比色法測(cè)定HMSC細(xì)胞的增殖活力檢測(cè)不同濃度EDS的細(xì)胞培養(yǎng)體系中HMSC的生長(zhǎng)曲線并行流式細(xì)胞周期觀察增殖期細(xì)胞所占比例。對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果1在培養(yǎng)體系中EDS各濃度組HMSC的M1YR吸光度值與對(duì)照組均有顯著差異采用重復(fù)測(cè)量資料的方差分析P005三組相應(yīng)吸光度值較25ΜGML組稍減低但吸光度值顯著高于對(duì)照組P2HMSC生長(zhǎng)曲線提示EDS濃度為251ΜGML時(shí)細(xì)胞的增殖能力較其他各組細(xì)胞有顯著提高而不同EDS濃度培養(yǎng)組HMSC增殖能力高于空白對(duì)照組。3流式細(xì)胞周期顯示EDS濃度為25ΜGML時(shí)HMSC培養(yǎng)體細(xì)胞S期細(xì)胞所占比例同時(shí)EDS濃度為25ΜGML時(shí)HMSC培養(yǎng)體細(xì)胞的增殖指數(shù)也顯著高于對(duì)照組。結(jié)論EDS在一定濃度范圍內(nèi)對(duì)體外培養(yǎng)條件下的HMSC具有生長(zhǎng)促進(jìn)作用該作用在EDS濃度為25GΜGML時(shí)最為顯著。但是EDS促進(jìn)HMSC增殖的作用不隨劑量的增加而增加。目的觀察蛻皮甾酮ECDYSTERONEEDS對(duì)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞HUMANMARROWMESENCHYMALSTEMCELLSHMSC分化的影響。方法25ΜGML濃度EDS的細(xì)胞培養(yǎng)體系HMSC培養(yǎng)基25ΜGMLEDS作為實(shí)驗(yàn)組與空對(duì)照組單純HMSC培養(yǎng)基EDS濃度0UGML作對(duì)比。在培養(yǎng)20D時(shí)運(yùn)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)CKL9CK10。并運(yùn)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)CK19的陽(yáng)性率觀察EDS對(duì)于MSC分化為表皮細(xì)胞的影響。同時(shí)在培養(yǎng)20D通過(guò)茜素紅染色觀察鈣化結(jié)節(jié)形成能力。觀察EDS對(duì)于MSC分化為成骨細(xì)胞的影響。結(jié)果1免疫組化顯示實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組細(xì)胞表面標(biāo)記物CK19CK10陰性。2流式細(xì)胞儀檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組陽(yáng)性率CK19為164％、對(duì)照組CK19陽(yáng)性率為9261％；3鈣化結(jié)節(jié)茜素紅染色顯示EDS實(shí)驗(yàn)組骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞形成鈣化結(jié)節(jié)而對(duì)照組并未未形成。結(jié)論125ΜGML濃度的EDS不具有使人骨髓干細(xì)胞向表皮樣細(xì)胞分化的能力。2EDS對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的成骨分化具有促進(jìn)作用。

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多罕見(jiàn)的急性粒細(xì)胞巨核細(xì)胞白血病的生物學(xué)、臨床和血液特征.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：浙江大學(xué)博士學(xué)位論文IGFBP7在結(jié)直腸癌細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)研究姓名阮文靜申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師來(lái)茂德20070401浙江大學(xué)博士學(xué)位論文LOHMAC25MAPKM一～兒VMMRMSPAGEPBSPCRPIPSFRTPCRSA陽(yáng)ALSDSSLRSSHWTBETBS仃ATGF書XGALLOSSOFHETEROZYGOSITYMENINGIOMAASSOCIATEDCDNA25MITOGENACTIVATEDPROTEINKINASEMOLONEYMURINELEUKEMLIAVIRUSMISMATCH旭PAIRMASSSPECTROMETERPOLYACRYLAMIDEGELELECTROPHORESISPHOSPHATEBUFFEREDSALINEPC岫I眥糟辯CHAINREACTIONPROPIDIUMIODIDEPROSTACYCLINSTIMULAFIONFACTORREV盯辯WANSCRIPFIONPOL郴CI值ML刪ONSSENESCENCEASSOCIALECLP唱AIM懈IDA辯SODIUMDODECYLSULFATESIGNALLOGRATIOAASUPPRESSIVESUBNACTIONHYBRIDIZATIONTUMORDERIVEDADHESIONFACTORTRISBORATEEDTAELECTROPHORESISBUFFERTRISBUFIEFSALINE“FLUOROACETICACIDTRANSFORMINGGROWMFACTORII5BROMO4CHLORO3INDOLYLBDGALACTOSIDE4

簡(jiǎn)介：復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文前列腺癌DU145細(xì)胞系腫瘤干細(xì)胞的分離、鑒定及其生物學(xué)特性和相關(guān)機(jī)制研究姓名陳偉申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)泌尿外科指導(dǎo)教師王國(guó)民20070412復(fù)旦大學(xué)博士論文中文摘要人雄激素非依賴性前列腺癌DUL45細(xì)胞系腫瘤干細(xì)胞的分離、鑒定及其生物學(xué)特性和相關(guān)機(jī)制研究摘要第一部分人激素非依賴性前列腺癌DUL45細(xì)胞系腫瘤干細(xì)胞的分離與鑒定【目的L于DUL45細(xì)胞內(nèi)分選表達(dá)不同表面分子的細(xì)胞群，篩選出優(yōu)勢(shì)細(xì)胞，確定具有干細(xì)胞特性的細(xì)胞群，完成腫瘤干細(xì)胞的鑒定和腫瘤干細(xì)胞表面標(biāo)記的確定?！痉椒↙應(yīng)用人雄激素非依賴性前列腺癌細(xì)胞系DUL45體外培養(yǎng)，免疫細(xì)胞化學(xué)、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)DUL45細(xì)胞表面分子和分化標(biāo)志的表達(dá)譜；免疫磁珠分選法結(jié)合I型膠原黏附法分選CDLL7細(xì)胞、CD34細(xì)胞和CD44整合素21CDL33細(xì)胞；應(yīng)用克隆形成實(shí)驗(yàn)、免疫細(xì)胞化學(xué)、流式細(xì)胞術(shù)、CELLTITERBLUE細(xì)胞增殖活性檢測(cè)法對(duì)上述的各群細(xì)胞進(jìn)行鑒定，篩選出具有自我更新、多向分化和增殖能力的細(xì)胞群。I結(jié)果】DUL45細(xì)胞表面表達(dá)CD24、CD34、CD44、CD59、CDLL7、CDL33、CKL4、CKL8；免疫磁珠MACS分選法可獲得高純度CDLL7細(xì)胞、CD34細(xì)胞、CD44整合素21CDL33細(xì)胞；DUL45細(xì)胞中CD44整合素21CDL33細(xì)胞克隆形成率CFE顯著高于其它類型細(xì)胞P005，傳代后，克隆形成率無(wú)顯著變化。CDLL7細(xì)胞、CD34細(xì)胞克隆形成能力較弱，傳代后CFE明顯下降。CD44整合素21CDL33細(xì)胞形成的克隆與其它類型細(xì)胞形成的克隆存在明顯的形態(tài)學(xué)差異。CD44整合索21CDL33細(xì)胞具有自我更新能力和多向分化潛能，CDLL7細(xì)胞、CD34細(xì)胞未表現(xiàn)這種潛能；與整合素2TCDL33。和未分選的DUL45細(xì)胞相比較，CD44整合素21CDL33細(xì)胞增殖能力更強(qiáng)P005【結(jié)論LCD44“整合素21CDL33細(xì)胞具有克隆形成、自我更新、多向分化和強(qiáng)增殖潛能，即千細(xì)胞特性。CD44、整合素21、CD133可作為DUL45細(xì)胞的腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志；CDLL7、CD34細(xì)胞在本研究中未表現(xiàn)出千細(xì)胞特性

簡(jiǎn)介：中山大學(xué)博士學(xué)位論文中國(guó)非小細(xì)胞肺癌患者EGFR雙突變的分子流行病學(xué)及生物學(xué)特性研究姓名張國(guó)淳申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師吳一龍20070430LL_L冉I寧竹論上。IⅢ扯小細(xì)胞種艋吉占EGFR“突變的舒F贏J抽卞，乏’L物卞持性研宄I正捕霍突變的分了流IJ病學(xué)研究，了解EGFR雙突變的分布規(guī)律并進(jìn)步通過(guò)仆外實(shí)驗(yàn)明確其生物學(xué)釣性以指導(dǎo)臨床個(gè)體化TKI治療的用藥選擇。方法1非選擇性中國(guó)人NSCLC患者肺癌組織標(biāo)本的EGFR測(cè)序2004年1月至2005年7月期間，“東省人民醫(yī)院腫瘤巾心收治的非小細(xì)H色I(xiàn)肺癌患者，采用TRIZOL法及石蠟包埋組織DNA提取法獲得所有標(biāo)本的皋岡DNA進(jìn)行PCR測(cè)序。除對(duì)EGFR的18，19，21外顯F測(cè)序外，接受過(guò)GEFITMIB治療的病例還進(jìn)行KRAS第2顯子及EGFR笫20外顯子的耐藥性突變榆測(cè)。2EGFR雙突變的等位基因定位實(shí)驗(yàn)提取攜帶EGFR雙突變的肺癌組織的總RNA進(jìn)行EGFRL821外顯F全K的RTPCR，并使用PMDL8T載體進(jìn)行TA克隆測(cè)序，分析EGFR雙突變的等位毖因分卻情況。3EGFR雙突變表達(dá)載體的構(gòu)建利用STRATAGENE公司開(kāi)發(fā)的QUICKCHANGEXL定點(diǎn)突變?cè)噭┖袑858R定點(diǎn)突變劍己插入了EGFRDELE746一A750的PEDNA31一表達(dá)載體上，從而構(gòu)建EGFRDELE746A750／L858R雙突變表達(dá)載體。通過(guò)雙酶切及EGFR開(kāi)放讀碼柜全長(zhǎng)測(cè)序進(jìn)行鑒定。4TKIS藥敏實(shí)驗(yàn)將構(gòu)建成功的EGFR雙突變以及DELE746A750，L858R兩種單突變載體與野生型載體通過(guò)脂質(zhì)轉(zhuǎn)染的方法分別瞬時(shí)轉(zhuǎn)染至293T細(xì)胞中。轉(zhuǎn)染40小時(shí)后以分別以GEFITINIB與ERLOTINIB濃度梯度處理3小時(shí)。處理完成后以EGF刺激誘導(dǎo)EGFR磷酸化。收集細(xì)胞提取總蛋白進(jìn)行EGFRTYRL068位點(diǎn)磷酸化的WESTERNBLOTTING檢測(cè)。使用QUANTITYONE光密度分析軟件對(duì)WESTERNBLOTTING的結(jié)果進(jìn)行分析，獲得EGFR磷酸化被TKIS抑制程度的比值，并作圖比較。5EGFR雙突變體對(duì)P13K／AKT信號(hào)傳導(dǎo)通路效應(yīng)的初步研究將上述4種EGFR表達(dá)載體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染至293T細(xì)胞中。轉(zhuǎn)染48小時(shí)后收集細(xì)胞提取總RNA行P13K及AKT兩種基因的災(zāi)時(shí)熒光定量PCR，并比較4種轉(zhuǎn)染后細(xì)胞中以EGFR轉(zhuǎn)錄水平校正后的這柏種基因轉(zhuǎn)錄水平，初步了解EGFRⅡ

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