基于蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的蚯蚓纖溶酶分析方法研究.pdf

1、蚯蚓纖溶酶(EFE)是從蚯蚓中提取的一組絲氨酸蛋白酶。EFE具有降低血液黏稠度、減少血小板聚集、改善微循環(huán)、副作用小的特點(diǎn)，已大量應(yīng)用于臨床，治療多種血栓性疾病，并取得較好的療效。中科院生物物理所以赤子愛(ài)勝蚓為原料已制成用于預(yù)防和治療血栓的口服膠囊。實(shí)際上，該膠囊（蚓激酶粗品）含有多種活性組分。為了便于對(duì)蚯蚓纖溶酶藥物的生產(chǎn)過(guò)程進(jìn)行質(zhì)量控制，急需建立一套完整的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)方法，為這種藥物的生產(chǎn)及開(kāi)發(fā)提供質(zhì)量保證。通過(guò)對(duì)EFE的研究現(xiàn)狀調(diào)查表

2、明，由于各種纖溶酶組分的理化性質(zhì)比較接近，使分離純化工作具有很大的挑戰(zhàn)性。
　　本研究利用不同分離方法對(duì)蚯蚓纖溶酶粗品中全蛋白組分進(jìn)行分離，建立了基于強(qiáng)陰離子交換色譜和SDS-PAGE的最佳分析、分離方法。在最佳凝膠電泳分離條件下分離出多達(dá)20個(gè)蛋白質(zhì)條帶，分別通過(guò)MALDI-TOF-MS和2D-LC-MS/MS質(zhì)譜對(duì)各蛋白質(zhì)條帶進(jìn)行了鑒定。在最佳色譜條件分離出了約35個(gè)峰，將其分為26個(gè)組分，分別用MALDI-TOF-MS和Q-

3、TOF-MS對(duì)各組分中蛋白的分子量進(jìn)行了準(zhǔn)確測(cè)定?；凇癝hotgun”研究策略的蛋白質(zhì)組學(xué)研究方法，采用了蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)和EST（表達(dá)序列標(biāo)簽）數(shù)據(jù)庫(kù)兩種對(duì)蚯蚓纖溶酶進(jìn)行了鑒定:使用蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)(Lumbricidaesequence)得到20種不同的蛋白;而使用EST形式數(shù)據(jù)庫(kù)(Lumbricidae sequence)得到了57種不同的mRNA序列。本文應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)的研究方法對(duì)蚯蚓纖溶酶粗品進(jìn)行分析及鑒定，建立了蚯蚓纖溶酶藥物質(zhì)量控