糖蛋白質(zhì)譜分析和過(guò)甲酸氧化用于蛋白質(zhì)組學(xué)的方法學(xué)研究.pdf

1、過(guò)甲酸氧化是一種應(yīng)用廣泛的打開(kāi)二硫鍵的方法。論文的第一部分系統(tǒng)地研究了過(guò)甲酸氧化作為一種樣品前處理方法用于蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)研究的可能性。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)了過(guò)甲酸氧化過(guò)程中除主要反應(yīng)即半胱氨酸氧化成其磺酸的形式、蛋氨酸氧化成其砜的形式之外的一些副反應(yīng)。這些副反應(yīng)包括天冬酰胺殘基和色氨酸殘基C-端肽鍵的斷裂、半胱氨酸的一個(gè)類(lèi)似β-消除的反應(yīng)、賴(lài)氨酸ε-氨基的甲酰化以及酪氨酸的氯化和氧化反應(yīng)。樣品的極端復(fù)雜性和串聯(lián)質(zhì)譜圖的質(zhì)量差是蛋白質(zhì)組學(xué)研究技術(shù)中面

2、臨的兩個(gè)突出問(wèn)題?；谶^(guò)甲酸氧化開(kāi)發(fā)了一種針對(duì)這兩個(gè)問(wèn)題的蛋白質(zhì)組學(xué)研究策略。首先，蛋白質(zhì)經(jīng)過(guò)甲酸氧化后經(jīng)胰蛋白酶消化得到肽段，利用含半胱氨酸肽段由于過(guò)甲酸氧化造成的磺酸基團(tuán)的電負(fù)性，在強(qiáng)陽(yáng)離子交換的條件下選擇性的富集合有半胱氨酸的肽，從而簡(jiǎn)化了樣品體系；然后，利用MALDI-TOF/TOF對(duì)所得肽段進(jìn)行質(zhì)譜分析，磺酸肽表現(xiàn)出更高的裂解效率和更簡(jiǎn)單的串聯(lián)圖譜，從而解決了串聯(lián)圖譜質(zhì)量差的問(wèn)題。文中利用牛血清白蛋白展示了這種方法的可行性。

3、 糖基化是一種普遍存在的翻譯后修飾，對(duì)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能有著重要的影響。因此，糖基化也成為蛋白質(zhì)組學(xué)研究中的一個(gè)重要領(lǐng)域。但是，糖基化是一個(gè)高度復(fù)雜的動(dòng)態(tài)的過(guò)程，導(dǎo)致合成的糖鏈具有極大的不均一性，使多糖成為最復(fù)雜的一種生物大分子之一。因此，盡管具有非常重要的生物學(xué)意義，闡明蛋白質(zhì)的糖基化仍然是蛋白質(zhì)組學(xué)面臨的一大挑戰(zhàn)。論文的第二部分以重組人尿激酶原(rhProUK)和重組人血小板源生長(zhǎng)因子(rhPDGF)為研究對(duì)象，以生物質(zhì)譜為