沙漠富油微藻的篩選及其脂代謝相關(guān)基因的研究.pdf

1、目的:本研究對古爾班通古特沙漠和塔克拉瑪干沙漠中的藻類進(jìn)行分離純化和種屬分類,收集得到一些沙漠特有的藻類資源;從本實(shí)驗(yàn)室已分離的藻種中,篩選出一株可異養(yǎng)微藻,比較該株微藻在不同培養(yǎng)方式不同生長時(shí)期其生化組分的含量和變化;構(gòu)建沙漠微藻混合文庫,克隆影響油脂合成代謝的關(guān)鍵基因accD和pepc,為闡明微藻的油脂積累和分子調(diào)控機(jī)制的關(guān)系奠定基礎(chǔ)。
　　方法:(1)采集的沙樣先進(jìn)行混合培養(yǎng)(BBM培養(yǎng)基),采用平板法和96孔板逐步稀釋法進(jìn)

2、行藻株的分離純化,通過形態(tài)學(xué)與分子生物學(xué)相結(jié)合的方法進(jìn)行種屬鑒定。(2)分離藻株總脂測定采用酸水解法,脂肪酸組分測定采用GC-MS方法。(3)篩選得到一株可異養(yǎng)藻株GTD8A1,通過分光光度法測定其粗脂含量,考馬斯亮蘭法測定其粗蛋白含量,氣相色譜分析其脂肪酸組分。
　　結(jié)果與結(jié)論:
　　1.本實(shí)驗(yàn)成功分離純化了11株沙漠微藻,從古爾班通古特沙漠采集沙樣中分離了5株,從塔克拉瑪干沙漠采集沙樣中分離了6株。通過形態(tài)學(xué)和18SrD

3、NA數(shù)據(jù)分析,結(jié)果顯示有10株屬于綠藻門,其中5株隸屬于衣藻科,1株隸屬于原管藻屬,2株隸屬于小球藻屬,1株隸屬于克里藻屬,另外1株為柵列藻科。其中4株進(jìn)行了5.8SrDNA-ITS序列分析,TLD2A1和GTD2A2分別與Chlorellasp.和Chlamydomonasdebaryana可能為同一物種,TLD7A2和TLD7B-5比對序列差異較大未鑒定到種。16SrDNA數(shù)據(jù)表明TLD5A1為藍(lán)藻門念珠藻屬。
　　2.從10

4、株沙漠綠藻中選出7株微藻樣品,測定總脂含量和脂肪酸組分。小球藻TLD6B的總脂含量最高為干重的17.7％,克里藻GTD4b-2的生物量最高(0.346g/L),3株衣藻的總脂含量都偏低其中。6株微藻樣品的脂肪酸組分主要含有豐富的C16-C18系脂肪酸,不同樣品其脂肪酸成分和含量均有所不同,另外1株為柵列藻TLD7B-5,其富含豐富的長鏈脂肪酸C20-C24(77.9%)。
　　3.從實(shí)驗(yàn)室保存藻種中篩選了1株可異養(yǎng)沙漠微藻GTD8

5、A1。不同培養(yǎng)方式下,以葡萄糖或乙酸鈉為外加有機(jī)碳源生長能力最好,生物量比自養(yǎng)提高2-4倍。氣相色譜分析顯示:不同培養(yǎng)條件下均以C16-C18為主;自養(yǎng)時(shí)C18:3(n3)含量達(dá)總脂肪酸含量的70%左右;兼養(yǎng)和異養(yǎng)培養(yǎng)時(shí),飽和脂肪酸和單不飽和脂肪酸比例增大,C18:3(n3)的比例降低。
　　4.成功構(gòu)建了9株沙漠微藻cDNA混合文庫,文庫滴定度:1.0×106cfu/ml;庫容:2.5×106以上;空載率:3.89%;冗余度:1