沙漠富油微藻的篩選及其脂代謝相關(guān)基因的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:本研究對古爾班通古特沙漠和塔克拉瑪干沙漠中的藻類進行分離純化和種屬分類,收集得到一些沙漠特有的藻類資源;從本實驗室已分離的藻種中,篩選出一株可異養(yǎng)微藻,比較該株微藻在不同培養(yǎng)方式不同生長時期其生化組分的含量和變化;構(gòu)建沙漠微藻混合文庫,克隆影響油脂合成代謝的關(guān)鍵基因accD和pepc,為闡明微藻的油脂積累和分子調(diào)控機制的關(guān)系奠定基礎。
  方法:(1)采集的沙樣先進行混合培養(yǎng)(BBM培養(yǎng)基),采用平板法和96孔板逐步稀釋法進

2、行藻株的分離純化,通過形態(tài)學與分子生物學相結(jié)合的方法進行種屬鑒定。(2)分離藻株總脂測定采用酸水解法,脂肪酸組分測定采用GC-MS方法。(3)篩選得到一株可異養(yǎng)藻株GTD8A1,通過分光光度法測定其粗脂含量,考馬斯亮蘭法測定其粗蛋白含量,氣相色譜分析其脂肪酸組分。
  結(jié)果與結(jié)論:
  1.本實驗成功分離純化了11株沙漠微藻,從古爾班通古特沙漠采集沙樣中分離了5株,從塔克拉瑪干沙漠采集沙樣中分離了6株。通過形態(tài)學和18SrD

3、NA數(shù)據(jù)分析,結(jié)果顯示有10株屬于綠藻門,其中5株隸屬于衣藻科,1株隸屬于原管藻屬,2株隸屬于小球藻屬,1株隸屬于克里藻屬,另外1株為柵列藻科。其中4株進行了5.8SrDNA-ITS序列分析,TLD2A1和GTD2A2分別與Chlorellasp.和Chlamydomonasdebaryana可能為同一物種,TLD7A2和TLD7B-5比對序列差異較大未鑒定到種。16SrDNA數(shù)據(jù)表明TLD5A1為藍藻門念珠藻屬。
  2.從10

4、株沙漠綠藻中選出7株微藻樣品,測定總脂含量和脂肪酸組分。小球藻TLD6B的總脂含量最高為干重的17.7%,克里藻GTD4b-2的生物量最高(0.346g/L),3株衣藻的總脂含量都偏低其中。6株微藻樣品的脂肪酸組分主要含有豐富的C16-C18系脂肪酸,不同樣品其脂肪酸成分和含量均有所不同,另外1株為柵列藻TLD7B-5,其富含豐富的長鏈脂肪酸C20-C24(77.9%)。
  3.從實驗室保存藻種中篩選了1株可異養(yǎng)沙漠微藻GTD8

5、A1。不同培養(yǎng)方式下,以葡萄糖或乙酸鈉為外加有機碳源生長能力最好,生物量比自養(yǎng)提高2-4倍。氣相色譜分析顯示:不同培養(yǎng)條件下均以C16-C18為主;自養(yǎng)時C18:3(n3)含量達總脂肪酸含量的70%左右;兼養(yǎng)和異養(yǎng)培養(yǎng)時,飽和脂肪酸和單不飽和脂肪酸比例增大,C18:3(n3)的比例降低。
  4.成功構(gòu)建了9株沙漠微藻cDNA混合文庫,文庫滴定度:1.0×106cfu/ml;庫容:2.5×106以上;空載率:3.89%;冗余度:1

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