富EPA海洋微藻的分離、篩選及培養(yǎng)條件優(yōu)化.pdf

1、本研究于2012年4月～6月從浙江近海海域采用浮游植物網(wǎng)拖采，利用平板分離法和水滴分離法等分離海洋微藻。從中篩選出富 EPA（二十碳五烯酸）的藻株，分別研究了生態(tài)因子（溫度、光照、鹽度）、營(yíng)養(yǎng)鹽因子（氮、磷、鐵、硅）及不同生長(zhǎng)時(shí)期對(duì)目標(biāo)藻株的生長(zhǎng)、總脂含量及脂肪酸組成的影響，旨在優(yōu)化目標(biāo)藻株生產(chǎn) EPA和PUFA（多不飽和脂肪酸）的培養(yǎng)條件，為大規(guī)模生產(chǎn)實(shí)踐提供理論依據(jù)。主要結(jié)果如下：
　　分離出10株海洋微藻，從中篩選出5株易培

2、養(yǎng)且生長(zhǎng)快的藻株，分別為大龍骨藻（Tropidoneis maxima）、咖啡雙眉藻（Amphora coffeaeformis）、曼氏骨條藻（Skeletonema.munzelii） SM-1、曼氏骨條藻 SM-2、成對(duì)海鏈藻（Thalassiosira binata）。利用MAV培養(yǎng)基對(duì)這5株海洋微藻進(jìn)行單種培養(yǎng)，培養(yǎng)條件：水溫17～25℃，鹽度25，自然光照，不充氣，并對(duì)生長(zhǎng)速率、總脂及脂肪酸組成進(jìn)行了測(cè)定，最終篩選出2株富 E

3、PA的藻株，分別是曼氏骨條藻 SM-1（24.83％）和 SM-2（27.74%）。
　　在 pH8.05、光暗比12h:12h、MAV培養(yǎng)基、不充氣培養(yǎng)條件下，進(jìn)行溫度、光照、鹽度單因素試驗(yàn)，分別設(shè)置溫度為10℃、15℃、20℃、25℃、30℃，光照20μmol m-2 s-1、40μmol m-2 s-1、60μmol m-2 s-1、80μmol m-2 s-1、100μmol m-2 s-1、120μmol m-2 s-1

4、，鹽度10、15、20、25、30、35、40，結(jié)果表明SM-1、SM-2藻株生長(zhǎng)的最適條件分別為溫度20～25℃、20℃，光強(qiáng)60μmol m-2 s-1，鹽度30。利于2株藻總脂積累的最適條件：溫度10℃，光強(qiáng)20μmol m-2 s-1，鹽度15。利于2株藻PUFA積累的最適條件：溫度15℃，光強(qiáng)20μmol m-2 s-1，鹽度15，PUFA含量最高時(shí) SM-1為46.92%、SM-2為53.01%；EPA含量最高時(shí)SM-1為1

5、9.39%、SM-2為21.31%。
　　在溫度25℃、光強(qiáng)60μmol m-2 s-1、鹽度25、pH8.05、光暗比12h:12h、充氣培養(yǎng)條件下，進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)鹽單因素試驗(yàn)。在氮源為硝酸鉀、氯化銨、硫酸銨和尿素，鐵源為檸檬酸鐵、硫酸亞鐵、三氯化鐵研究中，SM-1、SM-2藻株適宜氮源為硝酸鉀和尿素，適宜鐵源為硫酸亞鐵。分別設(shè)置氮濃度為0mg/L、5mg/L、10mg/L、15mg/L、20mg/L、25mg/L、30mg/L，磷濃

6、度0mg/L、0.5mg/L、1mg/L、1.5mg/L、2mg/L、2.5mg/L、3mg/L，鐵濃度0mg/L、0.1mg/L、0.25mg/L、0.5mg/L、1mg/L，硅濃度0mg/L、0.5mg/L、1mg/L、2mg/L、4mg/L。結(jié)果表明：SM-1、SM-2藻株生長(zhǎng)的最適條件分別為氮濃度20～25mg/L、25～30mg/L，磷濃度1.5mg/L、2mg/L，鐵濃度0.5mg/L，硅濃度2mg/L～4mg/L、1mg/

7、L。2株藻總脂積累的營(yíng)養(yǎng)調(diào)控條件分別為缺氮，缺磷，缺硅，鐵濃度0.25mg/L、1mg/L；2株藻PUFA積累的營(yíng)養(yǎng)調(diào)控條件分別為缺硅，氮濃度10mg/L、30 mg/L，磷濃度3mg/L、2.5～3mg/L，鐵濃度0.25mg/L、0.5mg/L。PUFA含量最高時(shí)SM-1為49.11%，SM-2為50.48%；EPA含量最高時(shí)SM-1為17.12%，SM-2為18.39%。
　　在溫度25℃、光照60μ mol m-2 s-1